СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ МЕТИЛЕНОВОГО СИНЕГО ДЛЯ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ПУТЕЙ ЛИМФООТТОКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ



Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель исследования. Сравнить и оценить эффективность использования препаратов метиленового синего для маркирования путей лимфооттока у лабораторных животных (крыса беспородная). Материалы и методы. В эксперименте использовано 16 самок беспородных крыс в возрасте около 40 дней с начальной массой тела 180-220 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. Для анестезии использовался препарат «Золазепам» (Zoletil®100). Животные рандомизированы в 2 группы по 8 особей в каждой. Первой группе подкожно в левое бедро вводился 1%-ный водный раствор метиленового синего, второй - метиленовый синий с человеческим сывороточным альбумином. В зависимости от времени экспозиции препарата животные случайным образом разделены на 4 подгруппы - 15, 30, 45 и 60 мин. Оценивалась эффективность маркирования путей лимфооттока от места инъекции. Результаты. В результате исследования продемонстрировано, что использование 1%-ного раствора метиленового синего позволяет визуализировать пути лимфооттока при экспозиции препарата в течение 30 мин. При увеличении времени экспозиции происходит окрашивание лимфатических узлов следующего порядка. Раствор метиленового синего в сочетании с человеческим сывороточным альбумином окрашивает первый узел на пути лимфооттока спустя 30 мин после введения. Препарат характеризуется замедленной миграцией из лимфатических узлов первого порядка (>60 мин). Заключение. Использование раствора метиленового синего в сочетании с сывороточным альбумином характеризуется замедленной миграцией из лимфатических узлов первого порядка, что делает его применение предпочтительным при оперативных вмешательствах (8 рис., 1 табл., библ.: 14 ист.).

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ Рак легкого на протяжении последних лет занимает лидирующую позицию в структуре онкологической заболеваемости и смертности. Ежегодно во всем мире диагностируется более 2 000 000 новых случаев этого заболевания, 85-90% которого представлены немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) [1]. Кроме того, более 1 700 000 человек погибают ежегодно в связи с прогрессированием онкологического процесса. Несмотря на стремительное развитие медицины и онкологии в частности, отдаленная выживаемость среди мужчин и женщин по разным источникам остается около 19% [2]. Адекватное лечение НМРЛ ранних стадий (I-II) позволяет увеличить долю пациентов, переживающих 5-летний рубеж, до 64% и более [3]. Предоперационное выявление метастазов в регионарных лимфатических узлах (ЛУ) является важнейшим диагностическим этапом для определения прогнозов и тактики дальнейшего лечения [4]. У 20-30% пациентов, прошедших лечение по поводу НМРЛ I-II стадии, наблюдается местный или отдаленный рецидив заболевания, а 5-летняя выживаемость у этих больных варьирует от 40 до 85,5% [5]. Одной из причин неудовлетворительных результатов является распространение опухолевых клеток в региональные узлы в виде микрометастазов, которые не выявлены при лучевой диагностике и рутинном гистологическом исследовании [3]. Активное использование низкодозовой компьютерной томографии (НДКТ) в качестве метода скрининга рака легкого позволило увеличить долю пациентов с подозрением на наличие злокачественного новообразования в легких [6, 7]. При I-II стадии НМРЛ должна быть использована активная хирургическая тактика для диагностики и лечения патологического процесса [8]. Стандартным объемом вмешательства является лобэктомия. Однако в последнее время предложены органосохраняющие анатомические резекции (сегментэктомии). Данный объем вмешательства может выполняться исключительно при доказанном отсутствии поражения регионарных ЛУ, что должно подтверждаться интраоперационно при определении индивидуальных путей лимфооттока. В связи с вышесказанным создаются предпосылки для поиска новых методов, которые позволят усовершенствовать результаты диагностики поражения ЛУ у пациентов с НМРЛ. Одной из таких методик является интраоперационное выявление «сигнального ЛУ» (СЛУ), а также определение индивидуального типа лимфооттока. Данный подход позволяет определить первый лимфатический коллектор на пути лимфогенного распространения онкологического процесса и выполнить его прицельную биопсию с целью определения состояния остальных региональных ЛУ [9-11]. Однако на сегодняшний день отсутствует «идеальный» метод выявления СЛУ. Предложено использовать биологические красители, радиоизотопные препараты, флюоресцирующие и радиоконтрастные вещества. Но каждый из перечисленных методов имеет недостатки при использовании в клинической практике, что делает актуальной проблему поиска оптимального метода интраоперационного маркирования путей лимфооттока [12, 13]. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Сравнить эффективность использования 1%ного водного раствора метиленового синего (МС) и 1%-ного водного раствора метиленового синего с сывороточным человеческим альбумином (МС + альбумин) в эксперименте. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В исследовании проводились оценка и сравнение эффективности использования анилиновых красителей синего цвета для маркирования путей лимфооттока у лабораторных животных (крыса беспородная). В эксперименте использовано 16 самок беспородных крыс (ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово»», Ленинградская область, РФ) в возрасте около 40 дней с начальной массой тела 180-220 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. Для анестезии использовался препарат «Золазепам» (Zoletil®100). Все экспериментальные работы выполнялись в соответствии с требованиями международной конвенции. Получено разрешение этического комитета Военно-медицинской академии имени С. М. Кирова. Животные рандомизированы в 2 группы по 8 особей в каждой. Первой группе для маркирования путей лимфооттока вводился 1%-ный водный раствор МС, второй - смесь 1%-ного водного раствора МС с 20%-ным раствором человеческого сывороточного альбумина (МС + альбумин). Введение препаратов осуществлялось по одинаковой методике: после предварительной анестезии маркирующий раствор вводился подкожно в бедренный сегмент левой задней конечности. После инъекции в течение 15 с выполнялись круговые массирующие движения в месте введения препарата. Далее животные случайным образом разделены на 4 подгруппы в зависимости от времени экспозиции растворов - 15, 30, 45 и 60 мин. По истечении времени животные выводились из эксперимента. Производилось вскрытие с целью определения эффективности маркирования ЛУ. ЛУ верифицированы на основании схемы, представленной в литературе [14]. Выполнялась биопсия СЛУ с последующим гистологическим исследованием. Его целью являлось изучение микроскопических изменений, наблюдаемых в маркированном ЛУ. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ У всех лабораторных животных проведена оценена эффективности интраоперационной визуализации путей лимфооттока от места введения хромолимфотропных препаратов МС + альбумин). По результатам визуальной оценки определялась эффективность введенного препарата для окраски путей лимфооттока (табл. 1). При экспозиции препаратов в течение 15 мин в группах с использованием МС и МС + альбумин не обнаружено каких-либо различий. Вероятно, это связано с недостаточным временем для миграции препарата из точки введения (рис. 1, 2). Далее исследованы результаты маркирования СЛУ при экспозиции в течение 30 мин. В группах МС и МС + альбумин у всех 4 животных определялся единственный окрашенный ЛУ, который был расценен как сигнальный (рис. 3, 4). На 45-й минуте экспозиции препарата в группе животных, которым вводился MC, наблюдалась миграция красителя в ЛУ следующего порядка, что делало невозможным обнаружение СЛУ. Во второй группе выявлялся единственный окрашенный лимфатический узел. (рис. 5, 6). При экспозиции длительностью 60 мин результаты в группе МС + альбумин были получены аналогичные предыдущим, однако окраска узла оказалась чуть менее интенсивной, чем спустя 30 и 45 мин. Напротив, в группе, которой вводился МС, по истечении 60 мин окрашенных узлов не обнаружено (рис. 7, 8). Из полученных маркированных ЛУ изготовлены микропрепараты. Структура ЛУ оставалась не измененной, а также не определялось гистологических признаков окрашивания МС. Таким образом, маркирование ЛУ синими красителями не изменяет микроструктуры препарата, что является важным критерием при поиске микрометастазов в ЛУ. ВЫВОДЫ 1. Использование 1%-ного раствора МС позволяет адекватно визуализировать пути лимфооттока. Недостатком препарата является миграция в ЛУ следующего порядка при экспозиции длительностью 30 мин. 2. Раствор МС в сочетании с человеческим сывороточным альбумином обладает сравнимым качеством визуализации ЛУ, однако обладает замедленной (>60 мин) миграцией, что является предпочтительным во время операции.
×

Об авторах

В В Коваленко

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ

г. Санкт-Петербург, Россия

О В Баринов

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ

г. Санкт-Петербург, Россия

Е Е Фуфаев

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ

г. Санкт-Петербург, Россия

И В Дмитроченко

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ

г. Санкт-Петербург, Россия

И В Куракевич

Филиал № 1 ФГКУ "439 военный госпиталь" МО РФ

Приморский Край, Пограничный, Россия

А П Овчаренко

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» МО РФ

г. Санкт-Петербург, Россия

Список литературы

  1. Siegel R. L. Cancer statistics. CA Cancer J. Clinic. 2019; 69 (1): 7-34.
  2. Bray F. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J. Clin. 2018; 68 (6): 394-424.
  3. Bille A. Incidence of occult pN2 disease following resection and mediastinal lymph node dissection in clinical stage I lung cancer patients. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 2017; 51 (4): 674-79.
  4. Akopov A. L., Papayan G. V., Chistyakov I. V. Intraoperative determination of “signal” lymph nodes using an infrared imaging system for locally advanced non-small cell lung cancer. Vestnik khirurgii imeni I. I. Grekova. 2015; 174 (4): 13-7.
  5. Amiraliev A. M., Pikin O. V., Ryabov A. B. Segmentectomy in patients with malignant neoplasms of the lungs. P. A. Herzen Journal of Oncology. 2017; 6 (5): 87-95. Russian (Амиралиев А. М., Пикин О. В., Рябов А. Б. Сегментэктомия у больных со злокачественными новообразованиями легких. Онкология. Журнал им. П. А. Герцена. 2017; 6 (5): 87-95).
  6. Usman A. M., Miller J., Peirson L., Fitzpatrick-Lewis D., Kenny M., Sherifali D., Parminder R. Screening for lung cancer: A systematic review and meta-analysis. Prev. Med. 2016; 89 (3): 301-14.
  7. Silvestri G. A., Gonzalez A. V., Jantz M. A. , Margolis M. L., Gould M. K., Tanoue L. T., Harris L. J., Detterbeck F. C. Methods for staging non-small cell lung cancer: Diagnosis and management of lung cancer, 3rd ed: American college of chest physicians evidence-based clinical practice guidelines. Chest. 2013; 143 (5): 211-50.
  8. Ettinger D. S., Wood D. E., Aisner D. L. , Akerley W., Bauman J. R., Bharat A., Bruno D. S., Chang J. Y., Chirieac L. R. Non-Small Cell Lung Cancer, Version 1.2020, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. J. Natl. Compr. Canc. Netw. 2019; 15 (4): 504-35.
  9. Manikhas G. M., Martynyuk V. V., Zin’kevich M. V. Biopsy of the signal lymph node with melanoma of the skin of the limbs and trunk. Vestnik Sankt-Peterburgskoy gosudarstvennoy meditsinskoy akademii imeni I. I. Mechnikova. 2008; 1: 107-10. Russian (Манихас Г. М., Мартынюк В. В., Зинькевич М. В. Биопсия сигнального лимфатического узла при меланоме кожи конечностей и туловища. Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии имени И. И. Мечникова. 2008; 1: 107-10).
  10. Ismagilov A. Kh., Asnina N. G., Azarov G. A. Signal lymph node biopsy: history and modernity. Opukholi zhenskoy reproduktivnoy sistemy. 2018; 14 (1): 38-46. Russian (Исмагилов А. Х., Аснина Н. Г., Азаров Г. А. Биопсия сигнальных лимфатических узлов: история и современность. Опухоли женской репродуктивной системы. 2018; 14 (1): 38-46).
  11. Tiff et O., Perrot J. L., Gentil-Perret A., Prevot N., Dubois F., Alamrtine E., Cambazard F. Sentinel lymph node detection in primary melanoma with preoperative dynamic lymphoscintigraphy and intraoperative γ probe guidance. Br. J. Surg. 2004; 91(7): 886-92.
  12. Wishart G. C., Loh S.-W., Jones L., Benson J. R. A feasibility study (ICG-10) of indocyanine green (ICG) fl uorescence mapping for sentinel lymph node detection in early breast cancer. Eur. J. Surg. Oncol. 2012; 38 (8): 651-6.
  13. Hachey K. J., Colson Y. L. Current Innovations in Sentinel Lymph Node Mapping for the Staging and Treatment of Resectable Lung Cancer. Semin. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2014; 26 (3): 201-9.
  14. Treuting P. M., Dintzis S. M., Montine K. Hematopoietic and Lymphoid Tissues. In: Comparative Anatomy and Histology. Second Edition. A Mouse, Rat, and Human Atlas. London, UK: Academic Press, Elsevier Publisher; 2018: 365-401.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Коваленко В.В., Баринов О.В., Фуфаев Е.Е., Дмитроченко И.В., Куракевич И.В., Овчаренко А.П., 2020

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 77760 от 10.02.2020.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах