Email this article 
Haplotypic diversity of mosquitoes of the genus Anopheles (Diptera, Culicidae) of North Vietnam
- Authors: Vu T.1, Andrianov B.V.2, Gorelova T.V.2, Gordeev M.I.1
-
Affiliations:
- Moscow Region State University
- Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Sciences
- Issue: Vol 16, No 3 (2018)
- Pages: 18-25
- Section: Genetic basis of ecosystems evolution
- URL: https://journals.eco-vector.com/ecolgenet/article/view/8963
- DOI: https://doi.org/10.17816/ecogen16318-25
- ID: 8963
Cite item
Full Text
Abstract
Background. Malaria in the territory of North Vietnam remains an actual problem. The species composition of mosquitoes of the genus Anopheles – the main vectors of malaria and the density of their populations – has a critical impact on the likelihood of the epidemic.
Materials and methods. We analyzed the variability of the BOLD fragment of the mitochondrial cox1 gene in a sampling set of Anopheles mosquitoes from the North Vietnam. Results. We found mosquitoes belonging to the species complexes: Anopheles sinensis, Anopheles vagus and Anopheles barbirostris. Nucleotide variability within the complexes does not exceed 2%. The differentiation into subspecies within the species complexes was not found.
Conclusion. The most common species of the genus Anopheles of North Vietnam is Anopheles sinensis — the main malaria vector. We predict the success of local transmission of malaria in this region in the case of malaria emergence.
Keywords
Full Text
Введение
Комары рода Anopheles Meigen, 1818 привлекают внимание исследователей благодаря своей способности к переносу возбудителей малярии. Среди большого числа видов рода Anopheles лишь некоторые способны переносить возбудителей малярии человека, поэтому составление прогноза эпидемической ситуации в конкретных районах в значительной степени основывается на характеристике популяций комаров и точном определении видов. Морфологическое определение видов рода Anopheles во многих случаях затруднительно. Для видовой идентификации в роде Anopheles предложено несколько молекулярно-генетических маркеров, обладающих достаточной изменчивостью на межвидовом уровне. Наиболее полные базы данных в настоящее время существуют по изменчивости внутреннего транскрибируемого спейсера гена рибосомой РНК (ITS2 rDNA) [1] и по изменчивости митохондриального гена цитохромоксидазы (cox1) [2]. Применение молекулярно-генетических маркеров для определения видов комаров основано на использовании порогового уровня допустимой внутривидовой изменчивости данного маркера. Этот порог для каждого маркера и для каждой систематической группы насекомых определяется эмпирически [3]. Для многих групп насекомых пороговый уровень внутривидовой нуклеотидной изменчивости BOLD-фрагмента митохондриального гена cox1 равен 3 % [4]. Практика идентификации видов комаров рода Anopheles по анализу изменчивости BOLD-фрагмента митохондриального гена cox1, или более кратко — ДНК-баркодинг, показывает хорошее совпадение морфологических и молекулярных данных. Внут ривидовая изменчивость комаров Anopheles из группы hyrcanus на территории Дальнего Востока России оказалась в пределах от 0,36 до 1,09 %, межвидовая изменчивость — в пределах от 2,34 до 4,50 % [5]. В среднем внутривидовая изменчивость комаров в Китае равна 0,39 % [6]. Внутривидовая изменчивость Anopheles из группы hyrcanus в Китае находится в пределах от 0,2 до 1,7 %, тогда как межвидовая — от 2,7 до 10,8 % [2]. Столь удобная для систематика ситуация, когда межвидовая изменчивость всегда больше внутривидовой, встречается не всегда. ДНК-баркодинг комаров Канады выявил внутривидовую изменчивость в пределах 0,0–3,9 %, тогда как величины межвидовой изменчивости наблюдались от 0,2 до 17,2 % [7]. Перекрывание диапазонов внутривидовой и межвидовой изменчивости не создает затруднений в идентификации вида, так как во всех случаях последовательности, относящиеся к одному виду, кластеризуются вместе с хорошей статистической достоверностью. Четкая кластеризация последовательностей, относящихся к одному виду, представляет собой более важный критерий для видовой идентификации, чем величина изменчивости в пределах кластера [3]. Применение ДНК-баркодинга для видовой диагностики всей фауны комаров Сингапура, включая Aedes, Anopheles и Culex, показало 100 % эффективность [8].
В настоящем сообщении мы приводим данные о видовой идентификации и гаплотипическом разнообразии комаров из рода Anopheles Северного Вьетнама в выборках из пяти локалитетов методом ДНК-баркодинга. Ранее в этих локалитетах изучение фауны комаров не проводилось. Мы обнаружили три вида комаров Anopheles, потенциальных переносчиков малярии. Наиболее массовым видом в сборах оказался Anopheles sinensis Wiedemann, 1828, реже встречались An. vagus Donitz, 1902, и An. barbirostris Van der Wulp, 1884.
An. sinensis — полиморфный вид, распространенный на территории Юго-Восточной Азии. В Китае An. sinensis является одним из основных переносчиков возбудителя трехдневной малярии Plasmodium vivax [9]. An. sinensis рассматривается как видовой комплекс, хотя систематический статус отдельных видов комплекса точно не известен и служит предметом активного изучения [10]. Новые возможности для выявления видов-двойников дает разработка фотокарт высокого разрешения у близких видов An. sinensis и An. lesteri [11, 12].
Среди комаров Северного Вьетнама были отмечены два других, преимущественно зоофильных, вида — An. vagus и An. barbirostris. Они также рассматриваются как видовые комплексы. Оба вида распространяют возбудителей как трехдневной, так и тропической малярии, но только в некоторых областях своего ареала [13, 14]. Причины, по которым эти виды являются переносчиками малярии только в некоторых областях своего ареала, неизвестны, но, вероятно, связаны со скрытым полиморфизмом в составе этих видов. Следует отметить, что такие известные переносчики возбудителей малярии в Юго-Восточной Азии, как Anopheles stephensi, Anopheles balabacensis, Anopheles maculatus, Anopheles dirus и Anopheles minimus, не найдены в наших сборах. Наличие основного переносчика малярии An. sinensis в четырех локалитетах Северного Вьетнама из пяти изученных позволяет сделать вывод о сохраняющейся возможности местной передачи трехдневной малярии на территории Северного Вьетнама.
Материал и методы
Сборы комаров
Выборки личинок комаров рода Anopheles были собраны в экспедиции с июля до сентября 2017 г. в пяти провинциях Северного Вьетнама, в которых есть риск восстановления очагов малярии. Сборы комаров проведены в провинциях: Куангнинь, Бакзянг, Шонла, Лаокай и Иэньбай. Три провинции — Шонла, Лаокай и Иэньбай — входят в район Северо-Западного Вьетнама (Тэйбак). Две провинции — Куангнинь, Бакзянг — находятся на северо-востоке Вьетнама. На севере и северо-западе Вьетнама преобладает горный рельеф, расчлененный глубокими долинами. На климат Северного Вьетнама оказывают влияние муссоны. Здесь четко выражены четыре времени года. Лето жаркое, влажное и дождливое. Зима засушливая и менее жаркая. Среднегодовая температура составляет 22,9 °C, средняя влажность — 82 %. Среднегодовой уровень осадков меняется от 1700 до 2400 мм (большая их часть выпадает в июле и августе).
Личинок 4-го возраста фиксировали 98 % этанолом. Для выделения тотальной ДНК и молекулярно-генетического анализа использовали фиксированных в спирте личинок. Основной целью молекулярно-генетического анализа была идентификация видов комаров рода Anopheles.
Выделение ДНК
ДНК выделяли методом фенол-хлороформной экстракции по стандартной методике [15] из индивидуальных личинок после морфологической идентификации. Выделенная тотальная ДНК была растворена в 50 мкл деионизированной воды. В реакцию амплификации брали по 1 нг тотальной ДНК в качестве матрицы.
Условия проведения ПЦР
Реакцию амплификации проводили в конечном объеме 25 мкл с помощью наборов для амплификации EncycloPlus PCR kit в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. ПЦР-фрагмент митохондриального гена cox1 для выполнения ДНК-штрихкодирования получали с помощью стандартных фолмеровских праймеров. Праймеры LCO1490 и HCO2198 комплиментарны 5’-концу митохондриального гена cox1, с которых у представителей ряда групп беспозвоночных амплифицируется специфический BOLD-фрагмент 5’-области митохондриального гена cox1 длиной 658 п. н. [16].
LCO1490 5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’
HCO2198 5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAATCA-3’
Фрагменты гена cox1 москитов амплифицировали в следующих условиях: первичная денатурация — 4 мин при 95 °C; 5 циклов: денатурация при 95 °C 30 с, отжиг при 45 °C 30 с, синтез при 72 °C 1 мин; 35 цик лов: денатурация при 95 °C 30 с, отжиг при 55 °C 30 с, синтез при 72 °C 1 мин; завершающий синтез при 72 °C 5 мин. ПЦР проводили на амплификаторе T100 (Bio-Rad, USA).
Продукты ПЦР разделяли и визуализировали методом электрофореза в 1,5 % агарозном геле. Элюцию ДНК из агарозного геля выполняли с помощью набора ZymocleAn Gel DNA Recovery Kit в соответствии с протоколом фирмы-производителя (The Epigenetics CompAny, USA). Полученные ПЦР-фрагменты были секвенированы.
Секвенирование
Секвенирование продуктов амплификации осуществляли по методу Сэнгера с обоих праймеров с применением ДНК-секвенатора ABI PRISMTM 377 и набора реактивов dGTP Big Dye Termination Kit (PE Applied Biosystems, США). Для секвенирования использовали полимер (ПДМА-6 — компания «Синтол») и капилляры длиной 50 см. На один образец делали два прогона для исключения ошибок сиквенса.
Биоинформационный анализ
Хроматограммы анализировали с помощью программы CromasPro 13.3 (Technelysium, Australia). Выравнивание последовательностей, полученных в результате секвенирования, с последовательностями, размещенными в базах данных, было выполнено с использованием ресурсов NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Для построения дендрограмм применяли программу MEGA7 [17] c использованием метода ближайших соседей (NJ) и p-дистанцию как модель нуклеотидных замен. Статистическую достоверность полученных деревьев оценивали при помощи величины бутстрэп-поддержки с числом репликаций 1000.
Медианная сеть митохондриальных гаплотипов была построена в программе PopART [18] с применением алгоритма TCS [19].
Результаты и обсуждение
Суммарные результаты молекулярно-генетического определения видов комаров рода Anopheles на территории пяти провинций Северного Вьетнама приведены в табл. 1 и 2.
Таблица 1. Описание сборов личинок комаров рода Anopheles, сделанных в 2016 г. на территории Северного Вьетнама, и перечень полученных нуклеотидных последовательностей BOLD-фрагмента митохондриального гена cox1
Table 1. The sampling set of mosquitoes larvae of the genus Anopheles collected in 2016 in the territory of North Vietnam and nucleotide sequences of the BOLD fragment of the mitochondrial cox1 gene
№ | Имя образца / Haplotype name | Вид комара / Anopheles species name | Место сбора июль – сентябрь ٢٠١٦ г. / Location. July-September 2016 | GenBank ID |
1 | Viet_A-1 | An. sinensis | Лаокай | MH425400 |
2 | Viet_A-2 | An. sinensis | MH425401 | |
3 | Viet_A-3 | An. sinensis | MH425402 | |
4 | Viet_A-4 | An. sinensis | MH425403 | |
5 | Viet_A-5 | An. sinensis | MH425404 | |
6 | Viet_A-6 | An. sinensis | MH425405 | |
7 | Viet_A-7 | An. sinensis | MH425406 | |
8 | Viet_A-8 | An. sinensis | MH425407 | |
9 | Viet_A-9 | An. sinensis | MH425408 | |
10 | Viet_B-1 | An. vagus | Шонла | MH425409 |
11 | Viet_B-2 | An. vagus | MH425409 | |
12 | Viet_B-3 | An. vagus | MH425410 | |
13 | Viet_B-4 | An. vagus | MH425411 | |
14 | Viet_C-1 | An. sinensis | Иэньбай | MH425412 |
15 | Viet_C-2 | An. sinensis | MH425413 | |
16 | Viet_C-3 | An. sinensis | MH425414 | |
17 | Viet_C-4 | An. sinensis | MH425415 | |
18 | Viet_C-5 | An. sinensis | MH425416 | |
19 | Viet_C-6 | An. sinensis | MH425417 | |
20 | Viet_C-7 | An. sinensis | MH425418 | |
21 | Viet_C-8 | An. sinensis | MH425419 | |
22 | Viet_C-9 | An. sinensis | MH425420 | |
23 | Viet_C-10 | An. sinensis | MH425421 | |
24 | Viet_C-11 | An. sinensis | MH425417 | |
25 | Viet_C-12 | An. sinensis | MH425422 | |
26 | Viet_C-13 | An. sinensis | MH425423 | |
27 | Viet_C-14 | An. sinensis | MH425424 | |
28 | Viet_C-15 | An. sinensis | MH425421 | |
29 | Viet_С-١٦ | An. sinensis | MH425425 | |
30 | Viet_D-1 | An. barbirostris | Куангнинь | MH425426 |
31 | Viet_D-2 | An. barbirostris | MH425427 | |
32 | Viet_D-3 | An. barbirostris | MH425428 | |
33 | Viet_D-4 | An. barbirostris | MH425429 | |
34 | Viet_D-5 | An. sinensis | MH425430 | |
35 | Viet_D-6 | An. sinensis | MH425431 | |
36 | Viet_D-7 | An. sinensis | MH425432 | |
37 | Viet_D-8 | An. sinensis | MH425433 | |
38 | Viet_D-9 | An. sinensis | MH425434 | |
39 | Viet_D-10 | An. sinensis | MH425435 | |
40 | Viet_D-11 | An. sinensis | MH425436 | |
41 | Viet_D-12 | An. barbirostris | MH425437 | |
42 | Viet_E-1 | An. sinensis | Бакзянг | MH425438 |
43 | Viet_E-2 | An. vagus | MH425439 | |
44 | Viet_E-3 | An. vagus | MH425440 | |
45 | Viet_E-4 | An. sinensis | MH425441 | |
46 | Viet_E-5 | An. vagus | MH425442 | |
47 | Viet_E-6 | An. sinensis | MH425443 | |
48 | Viet_E-7 | An. vagus | MH425442 | |
49 | Viet_E-8 | An. vagus | MH425444 |
Окончание табл. 1 (Table 1 (continued))
Таблица 2. Видовой состав малярийных комаров в пяти локалитетах Северного Вьетнама
Table 2. Species composition of malarial mosquitoes in five localities of North Vietnam
Место сбора и его географические координаты / Geographical location | Характеристика биотопов и дата сборов / | Видовой состав / Species name | Число идентифицированных комаров / Number of specimen |
Лаокай 22.48 № 103.98 E | Горный район. Заросшая канава со стоячей водой. Городская застройка. 21 сентября 2016 г. | An. sinensis | 9 |
Шонла 21.10 № 103.73 E | Горный район. Пруд, заросшая канава. 30 августа 2016 г. | An. sinensis | 4 |
Иэньбай 21.68 № 104.46 E | Горный район. Рисовые чеки. Городская застройка. 10 сентября 2016 г. | An. sinensis | 16 |
Куангнинь 21.00 № 107.29 E | Предгорный район. Пруд. 15 августа 2016 г. | An. barbirostris, An. sinensis | 12 |
Бакзянг 21.29 № 106.19 E | Предгорный район. Рисовые чеки. 17 сентября 2016 г. | An. sinensis, An.vagus | 8 |
Идентифицированы три видовых комплекса: An. sinensis, An. vagus и An. barbirostris. Для генетической дифференциации идентифицированных видовых комплексов была построена кладограмма с включением контрольных последовательностей представляющих отдельные виды комплексов (рис. 1).
Рис. 1. Кладограмма комаров рода Anopheles, полученная на основе анализа изменчивости фрагмента гена cox1 длиной 649 п. н. На ветвях филограммы приведены имена образцов. Филограмма Neighbor-Joining построена с помощью метода (p-dis tance) с bootstrap-поддержкой — 1000 реплик в программе MEGA 7. Место сбора образца помечено фигурой перед именем: Лаокай, Шонла, Иэньбай, Куангнинь, Бакзянг. Описание образцов ДНК комаров, характеризующих индивидуальных особей, приведено в табл. 1. Дерево построено по методу ближайших соседей (NJ). Величина бутстрэп-поддержки кластеризации таксонов указана рядом с узлами филограммы. Дерево построено в масштабе — число нуклеотидных замен на сайт. Длина контрольного отрезка соответствует 1 % нуклеотидной изменчивости. В качестве контроля приведены нуклеотидные последовательности комаров Anopheles из группы hyrcanus и видовых комплексов Anopheles vagus и Anopheles barbirostris. Для выделения этих последовательностей на филограмме показаны GenBank ID. В качестве внешней группы взята последовательность cox1 Drosophila yakuba
Fig. 1. Cladistic analysis of mosquitoes of the genus Anopheles obtained on the basis of the analysis of the variability of a fragment of the cox1 gene, 649 bp in length . The names of the samples are given on the branches of the philogram. The Neighbor-Joining philogram was built using the (p-distance) method with the bootstrap support – 1000 replicas. The phylogram was constructed in MEGA 7. The sample collection locality is marked with a figure in front of the name: Laocai, Shonla, Yenbai, Kuangnin, Bakjiang. The Description of DNA samples of mosquitoes, see Table 1. The tree is constructed by the method (Neighbor-Joining). The bootstrap value of cluster support is shown next to the nodes of the phylogram. The tree is built in scale of the number of nucleotide replacements per site. The length of the control segment corresponds to 1% of nucleotide variability. Typical nucleotide sequences of the Anopheles of the hyrcanus group and Anopheles vagus species complex and Anopheles barbirostris species complex are given as controls. To mark these sequences are on the phylogram, the GenBank ID is given. The sequence of Drosophila yakuba cox1 of is taken as an external group
Большая часть проанализированных образцов относится к виду An. sinensis. Другие виды комплекса — An. pullus, An. lesteri, An. hyrcanus — не обнаружены. Различить An. sinensis и An. kleini по изменчивости BOLD-фрагмента невозможно, так как An. kleini в эволюционно недавнем прошлом потерял собственные митохондрии, которые были вытеснены митохондриями An. sinensis [10]. Наблюдаемая изменчивость An. sinensis в нашей выборке находится на внутривидовом уровне и не превышает 2 %. В недавно опубликованном исследовании гаплотипического разнообразия An. sinensis в Китае [9] было обнаружено два кластера. Самым массовым гаплотипом для кластера 1 является гаплотип Hap_41, а для кластера 2 — Hap122. Большинство найденных гаплотипов комаров из Китая относится к кластеру 1. Во Вьетнаме мы обнаружили эти группы. Большинство найденных нами гаплотипов также относится к кластеру 1 (см. рис. 1). К кластеру 2 в нашей выборке относится единственный гаплотип С-9. Гаплотип 113, редко встречающийся в Китае, во Вьетнаме, напротив, является одним из основных. Четкая кластеризация митохондриальных гаплотипов обычно соответствует разным видам комаров, которые могут иметь разные биологические характе ристики. У An. sinensis Вьетнама такая кластеризация только намечается, но не имеет достаточной бутстрэп-поддержки на филограмме. Вопрос о существовании подвидов An. sinensis и возможных различий в их био логических особенностях требует дальнейших исследований. На рис. 1 заметна дифференциация на две группы в пределах кластера гаплотипов 1 An. sinensis. Для более подробного исследования внутривидовой дивергенции An. sinensis мы построили медианную сеть митохондриальных гаплотипов (рис. 2).
Рис. 2. Медианная сеть митохондриальных гаплотипов An. Cinensis, построенная в программе PopArt на основании нуклеотидного полиморфизма фрагмента гена cox1 длиной 649 п. н. Штрихи отмечают мутационные события. Размер кружков пропорционален числу синонимичных гаплотипов
Fig. 2. Median network of the mitochondrial haplotypes of An. cinensis, constructed in the program PopArt on the basis of the nucleotide polymorphism of the cox1 gene fragment, 649 bp in length. Mutations are indicated by strokes. The size of the circles is proportional to the number of synonymous haplotypes
Полученный результат подтверждает начавшуюся дифференциацию популяции на две формы. Форма сети выделяет гаплотип A-5 и группу производных от него гаплотипов. Такая звездчатая структура может возникнуть в случае недавнего расселения и роста численности этой формы.
Заключение
В горных местообитаниях Куангниня и Бакзянга видовое разнообразие комаров рода Anopheles снижено, но характеризуется наличием специфических видов. An. barbirostris найден только в Куангнине, An. vagus — только в Бакзянге и Шонле. Преимущественная локализация комаров с гаплотипом A-5 и родственными ему гаплотипами в городской застройке Лаокая и Иэньбай позволяет предположить, что мы наблюдаем начало формирования городской антропофильной популяции у An. sinensis.
Как известно, виды — двойники комплекса Anopheles hyrcanus, а именно An. sinensis и An. lesteri, являются главными переносчиками малярии в Юго-Восточной Азии и в Китае. Среди этих видов наиболее антропофильным считается An. lesteri, который рассматривается как главный переносчик Plasmodium vivax в Центральном Китае. Этот вид больше охотится на людей и имеет более высокий HBI (human blood index — пропорция крови у самок комаров, полученной от человека) [20]. Однако в последнее время второстепенная роль An. sinensisкак переносчика Plasmodium vivax пересмотрена. Показано, что благодаря An. sinensis в 2006 г. возникла эпидемия трехдневной малярии в рисосеящих районах Центрального Китая [21]. По-видимому, степень антропофильности An. sinensis и, соответственно, его эпидемиологическое значение могут подвергаться отбору и варьировать в локальных популяциях.
Наличие основного переносчика малярии An. si nensis в четырех локалитетах Северного Вьетнама из пяти изученных позволяет сделать вывод о сохраняющейся возможности местной передачи трехдневной малярии на территории Северного Вьетнама.
Благодарности
Работа выполнена при финансовой поддержке проекта (АААА-А16-116111610180-3)«Изучение изменчивости автономных генетических элементов насекомых и разработка маркеров нестабильности генома» (договор № 0112-2016-0001).
About the authors
Thi Huong Vu
Moscow Region State University
Author for correspondence.
Email: Vuhuongmgou@gmail.com
Researcher
Russian Federation, 24, Very Voloshinoy street, Mytishi, 141014Boris V. Andrianov
Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Sciences
Email: andrianovb@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0064-4696
PhD, Senior Researcher
Russian Federation, 3, Gubkin street, Moscow, 119991Tatiana V. Gorelova
Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Sciences
Email: tagor08@mail.ru
PhD, Researcher
Russian Federation, 3, Gubkin street, Moscow, 119991Michail I. Gordeev
Moscow Region State University
Email: gordeev_mikhail@mail.ru
PhD, Head of the Department
Russian Federation, 24, Very Voloshinoy street, Mytishi, 141014References
- Fang Y, Shi WQ, Zhang Y. Molecular phylogeny of Anopheles hyrcanus group members based on ITS2 rDNA. Parasit Vectors. 2017;10(1):417. doi: 10.1186/s13071-017-2351-x.
- Fang Y, Shi WQ, Zhang Y. Molecular phylogeny of Anopheles hyrcanus group (Diptera: Culicidae) based on mtDNA COI. Infect Dis Poverty. 2017;6(1):61. doi: 10.1186/s40249-017-0273-7.
- Zhang HG, Lv MH, Yi WB, et al. Species diversity can be overestimated by a fixed empirical threshold: insights from DNA barcoding of the genus Cletus (Hemiptera: Coreidae) and the meta-analysis of COI data from previous phylogeographical studies. Mol Ecol Resour. 2017;17(2):314-323. doi: 10.1111/1755-0998.12571.
- Hebert PD, Cywinska A, Ball SL, deWaard JR. Biological identifications through DNA barcodes. Proc Biol Sci. 2003;270(1512):313-321. doi: 10.1098/rspb.2002.2218.
- Khrabrova NV, Andreeva YV, Sibataev AK, et al. Mosquitoes of Anopheles hyrcanus (Diptera, Culicidae) Group: Species Diagnostic and Phylogenetic Relationships. Am J Trop Med Hyg. 2015;93(3):619-622. doi: 10.4269/ajtmh.14-0207.
- Wang G, Li C, Guo X, et al. Identifying the main mosquito species in China based on DNA barcoding. PLoS One. 2012;7(10): e47051. doi: 10.1371/journal.pone.0047051.
- Cywinska A, Hunter FF, Hebert PD. Identifying Canadian mosquito species through DNA barcodes. Med Vet Entomol. 2006;20(4):413-424. doi: 10.1111/j.1365-2915.2006.00653.x.
- Chan A, Chiang LP, Hapuarachchi HC, et al. DNA barcoding: complementing morphological identification of mosquito species in Singapore. Parasit Vectors. 2014;7:569. doi: 10.1186/s13071-014-0569-4.
- Feng X, Huang L, Lin L, et al. Genetic diversity and population structure of the primary malaria vector Anopheles sinensis (Diptera: Culicidae) in China inferred by cox1 gene. Parasit Vectors. 2017;10(1):75. doi: 10.1186/s13071-017-2013-z.
- Choochote W, Min GS, Intapan PM, et al. Evidence to support natural hybridization between Anopheles sinensis and Anopheles kleini (Diptera: Culicidae): possibly a significant mechanism for gene introgression in sympatric populations. Parasit Vectors. 2014;7:36. doi: 10.1186/1756-3305-7-36.
- Liang J, Sharakhova MV, Lan Q, et al. A standard cytogenetic map for Anopheles sinensis and chromosome arm homology between the subgenera Anopheles and Cellia. Med Vet Entomol. 2014;28 Suppl 1:26-32. doi: 10.1111/mve.12048.
- Liang J, Cheng B, Zhu G, et al. Structural divergence of chromosomes between malaria vectors Ano pheles lesteri and Anopheles sinensis. Parasit Vectors. 2016;9(1):608. doi: 10.1186/s13071-016-1855-0.
- Dhiman S, Yadav K, Rabha B, et al. Evaluation of Insecticides Susceptibility and Malaria Vector Potential of Anopheles annularis s. l. and Anopheles vagus in Assam, India. PLoS One. 2016;11(3): e0151786. doi: 10.1371/journal.pone.0151786.
- Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. – М.: Мир, 1984. [Maniatis T, Fritch EF, Sambrook J. Molecular cloning. Moscow: Mir; 1984. (In Russ.)]
- Sinka ME, Bangs MJ, Manguin S, et al. The dominant Anopheles vectors of human malaria in the Asia-Pacific region: occurrence data, distribution maps and bionomic precis. Parasit Vectors. 2011;4:89. doi: 10.1186/1756-3305-4-89.
- Folmer O, Black M, Hoeh W, et al. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates. Mol Mar Biol Biotechnol. 1994;3(5):294-299.
- Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets. Mol Biol Evol. 2016;33(7):1870-1874. doi: 10.1093/molbev/msw054.
- Leigh JW, Bryant D, Nakagawa S. popart: full-feature software for haplotype network construction. Methods Ecol Evol. 2015;6(9):1110-1116. doi: 10.1111/2041-210x.12410.
- Clement M, Posada D, Crandall KA. TCS: a computer program to estimate gene genealogies. Mol Ecol. 2000;9(10):1657-1659. doi: 10.1046/j.1365-294x.2000.01020.x.
- Gu ZC, Shang LY, Chen JS, et al. The role of Anopheles anthropophagus in malaria transmission in Xinyang City of Henan Province. Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Bing Za Zhi. 2001;19(4):221-224.
- Zhu G, Xia H, Zhou H, et al. Susceptibility of Ano pheles sinensis to Plasmodium vivax in malarial outbreak areas of central China. Parasit Vectors. 2013;6:176. doi: 10.1186/1756-3305-6-176.
Supplementary files
