Анализ роли генов WNT4, HOXA10 и TWIST1 в патогенезе наружного генитального эндометриоза и миомы матки

Полный текст

ОБОСНОВАНИЕ

Наружный генитальный эндометриоз (НГЭ) и миому матки (ММ) рассматривают как наиболее распространенные пролиферативные заболеваниями у женщин репродуктивного возраста. НГЭ и ММ являются ведущими причинами тазовых болей; типичное осложнение эндометриоза — бесплодие, у пациенток с ММ часто снижается фертильность. Для обоих этих процессов характерны высокая частота рецидивов и семейная предрасположенность к развитию заболевания; ряд исследователей предполагают, что некоторые аспекты этиологии и патогенеза могут быть общими для развития как миомы, так и генитального эндометриоза [1–3]. Исследования, выполненные методом GWAS, в том числе и при проведении метаанализа, продемонстрировали наличие ассоциации полиморфных вариантов генов WNT4, HOXA10 и некоторых других с риском развития этих гиперпролиферативных процессов [4, 5].

Наиболее популярными гипотезами возникновения эндометриоидных очагов являются теория ретроградной менструации, теория целомической метаплазии и теория эмбриональных остатков [6]. Ни одна из них не доказана, а точные причины эктопического роста эндометриальной ткани остаются неизвестными. В развитии ММ, по современным представлениям, наиболее значительную роль играют мутации генов, прежде всего соматические мутации гена MED12, выявляемые в 50–70 % узлов ММ [7]. Однако по-прежнему неизвестны причины, приводящие к возникновению миом без мутаций, а также к развитию множественных и рецидивирующих миом.

В последнее время большинство исследователей признают ведущую роль стволовых клеток в формировании очагов эндометриоза [8, 9]; основные дискуссии ведутся о происхождении этих стволовых клеток (эутопический эндометрий, костный мозг, тканевые стволовые клетки) и о непосредственных причинах эктопического роста и дифференцировки. Ряд исследователей указывают также на существование стволовых клеток в узлах ММ [10]. Таким образом, теоретически оба заболевания, и ММ, и НГЭ, могут рассматриваться как результат аномальной дифференцировки стволовых клеток, приводящей к формированию эктопических очагов эндометриоидной ткани (с включениями элементов мышечной, нервной и соединительной ткани) при эндометриозе и узлов ММ, состоящих (при лейомиоме) преимущественно из миоцитов и фибробластов с включением клеток хряща и вероятным присутствием элементов нервной ткани.

Целью данной работы были исследование частоты ряда полиморфных и минорных вариантов и сравнительный анализ экспрессии в эндометрии генов WNT4, HOXA10 и TWIST1, участвующих в формировании женской половой системы и нормальном функционировании эндометрия, а также способствующих поддержанию стволовых свойств клеток у пациенток с НГЭ, ММ и женщин группы сравнения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследованные образцы

Группу пациенток с эндометриозом составила 61 женщина в возрасте от 25 до 40 лет (средний возраст — 32,5 ± 7,5 года) с НГЭ I–IV степеней по классификации Американского общества фертильности (r-AFS, 1996). Критерием исключения было наличие ММ и синдрома поликистозных яичников. Диагноз у всех пациенток был установлен в ходе диагностической лапароскопии в НИИ АГиР им. Д.О. Отта и подтвержден результатами гистологического исследования. Дополнительными критериями включения в группу «распространенные/рецидивирующие/семейные формы НГЭ» для исследования полиморфных вариантов генов WNT4, HOXA10 и TWIST1 были раннее начало заболевания (до 25 лет включительно), и/или наличие эндометриоза у родственников первой степени родства, и/или рецидивирующее течение, и/или распространенная форма заболевания.

Группу пациенток с ММ составили 99 женщин, проходивших лечение (миомэктомия, гистероэктомия) в НИИ АГиР им. Д.О. Отта, средний возраст — 38,2 ± 6,8 года. Диагноз ММ у всех пациенток был подтвержден при гистологическом исследовании. Критерием исключения было наличие эндометриоза и/или синдрома поликистозных яичников. Для оценки популяционных частот аллелей использовали сведения из базы данных «1000 genomes» (https://www.internationalgenome.org). Были обследованы женщины двух контрольных групп. Контрольную первую группу составили 24 здоровые женщины, проходившие обследование в рамках прегравидарной подготовки (средний возраст — 26,8 ± 3 года). Всем пациенткам из контрольной первой группы было проведено ультразвуковое исследование органов малого таза, биохимический анализ крови (включая сахарную кривую и липидограмму); в первую фазу цикла были определены уровни фолликулостимулирующего, лютеинизирующего гормонов, пролактина и эстрадиола, во второй фазе — прогестерона. Контрольная вторая группа состояла из 19 пациенток «без эндометриоза и миомы матки» (средний возраст — 31,4 ± 4,2 года), в нее были включены женщины, проходившие диагностическую лапароскопию по поводу жалоб на тазовые боли и/или идиопатическое бесплодие, которым после стандартного обследования была назначена диагностическая лапароскопия, но при ревизии тазовых органов диагноз эндометриоза был отвергнут.

Для анализа полиморфных вариантов генов WNT4, HOXA10 и TWIST1 были исследованы образцы ДНК из лимфоцитов периферической крови, полученные от пациенток с распространенными/рецидивирующими/семейными формами эндометриоза (всего 43 пациентки), единичной и множественной ММ [всего 96 женщин, в том числе 55 пациенток с единичными и 41 со множественными (три и более) узлами ММ] и женщин группы сравнения (42 женщины), — всего 182 образца.

Экспрессия генов WNT4, HOXA10 и TWIST1 была исследована методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОТ-РВ-ПЦР) в образцах эндометрия, полученных в ходе оперативного вмешательства (диагностическая лапароскопия, миомэктомия) в НИИ АГиР им. Отта. Всем пациенткам были выполнены лапароскопия и гистероскопия. Всего было исследовано 15 образцов эндометрия от пациенток с ММ, 17 образцов от пациенток с НГЭ и 6 образцов от пациенток контрольной второй группы. Распределение пациенток по дням менструального цикла (дмц) представлено в табл. 1.

 

Таблица 1. Исследованные образцы эндометрия, распределение по дням менструального цикла

Группа	7–12-й дмц	14–17-й дмц	18–23-й дмц
Пациентки с миомой матки	15	–	–
Контрольная вторая группа	–	–	6
Пациентки с наружным генитальным эндометриозом	5	7	5

Примечание: дмц — день менструального цикла.

 

Исследование одобрено этическим комитетом НИИ АГиР им. Д.О. Отта (протокол № 104 от 23.10.2020). Все пациенты подписали информированное согласие на исследование тканей и обработку персональных данных, включая данные историй болезни.

Методы исследования

ДНК из лейкоцитов периферической крови выделяли стандартным фенол-хлороформным методом. Полиморфные варианты rs7521902 (ген WNT4) и rs4721745 (ген TWIST1) были протестированы методом ПЦР в реальном времени. Использовали соответствующие комплекты зондов и праймеров TaqMan® SNP Genotyping Assays и реакционную смесь TaqMan Universal MasterMix II производства ThermoFisher (США). Каждый образец анализировали в двух повторностях. Для гена HOXA10 было проведено секвенирование экзона 2 гена, поскольку, по результатам других авторов [11], именно в этом экзоне у пациентов с эндометриозом наиболее часто обнаруживают мутации и минорные варианты. ПЦР-продукт, содержащий последовательность экзона 2 гена HOXA10 получали с использованием олигонуклеотидов, описанных ранее [11]. Секвенирование по Сэнгеру проводили с помощью набора BigDye Terminator Cycle Sequencing Kitv 3.1 на генетическом анализаторе ABI 3130 Genetic Analyzer (все AppliedBiosystems, США)

Экспрессия генов WNT4, HOXA10 и TWIST1 в образцах эндометрия была исследована методом ОТ-РВ-ПЦР. Материал эндометрия, полученный во время лапаро- и гистероскопии, немедленно помещали в консервант RNA-later (ThermoFisher). Для выделения РНК использовали колонки PureLink RNA Mini Kit (ThermoFisher Scientific, США) и протокол фирмы-производителя. Обратную транскрипцию РНК проводили с помощью набора High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher Scientific, США) в соответствии с инструкциями производителя. ПЦР в реальном времени осуществляли на приборе Real-Time PCR System 7500 (Applied Biosystems, США) с применением расходных материалов производства ThermoFisher — TaqMan Gene Expression Assays: Hs01573505_m1 — для гена WNT4, Hs00361186_m1 — для гена TWIST1 и Hs00172012_m1 — для гена HOXA10. С целью внутреннего контроля использовали ранее валидированный нами набор для гена MRPL19 (Hs00608519_m1).

Пороговые циклы (Ct) и относительный уровень экспрессии рассчитывали в программе Expression Suite Software version 1.1 (ThermoFisher) по методу 2^–ΔΔСt (Livak метод). Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета GraphPad Prizm 6.0. Статистическую значимость различий между количественными критериями оценивали с использованием U-критерия Манна – Уитни. Различия между показателями считали достоверными при p ≤ 0,05. Статистическую обработку данных по анализу частот генотипов выполняли с помощью стандартных подходов, используемых при проведении популяционно-генетических исследований с применением пакета программ GraphPad Prizm6, анализ произвольных таблиц сопряженности — с помощью критерия χ² Пирсона. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Методом ПЦР в реальном времени были генотипированы два полиморфных варианта: rs7521902 [ген WNT4, chr1:22164231 (GRCh38.p12), замена A>C в дистальном промоторе] и rs4721745 [ген TWIST1, chr7:19113889 (GRCh38.p12), замена C>G в 3’-некодирующем регионе] у женщин с предположительно наследственными формами НГЭ, единичной и множественной ММ и в контрольных группах. Результаты приведены в табл. 2, 3.

 

Таблица 2. Частоты аллелей и генотипов по полиморфным вариантам rs7521902 и rs4721745 в исследованных группах

Ген, полиморфный сайт	Группа	Частота минорного аллеля	Частота генотипов
WNT4 (rs7521902)			CC/CA/AA
	Эндометриоз	A = 0,24	25/12/4
	Миома матки (единичная)	A = 0,31	22/25/3
	Миома матки (множественная)	A = 0,3	21/14/5
	Контрольная первая группа	A = 0,25	14/8/2
	Контрольная вторая группа	A = 0,53	4/10/5
	1000 Genomes, европейцы	A = 0,21	–
TWIST1 (rs4721745)			CC/CG/GG
	Эндометриоз	G = 0,15	30/10/1
	Миома матки (единичная)	G = 0,11	21/6/0
	Миома матки (множественная)	G = 0,19	23/9/2
	Контрольная первая группа	G = 0,14	17/6/1
	Контрольная вторая группа	G = 0,26	13/6/0
	1000 Genomes, европейцы	G = 0,126	–

 

Таблица 3. Значения p при сравнении генотипов по полиморфному варианту rs7521902 гена WNT4 между исследованными группами

rs7521902	НГЭ	ММ единичная	ММ множественная	Контрольная первая группа	Контрольная вторая группа
НГЭ	1	p = 0,132	p = 0,741	p = 0,937	p = 0,014*
Миома матки единичная	–	1	p = 0,280	p = 0,402	p = 0,033*
Миома матки множественная	–	–	1	p = 0,843	p = 0,066
Сравнения первая группа	–	–	–	1	p = 0,038*
Сравнения вторая группа	–	–	–	–	1

Примечание. НГЭ — наружный генитальный эндометриоз; ММ — миома матки.

 

Мы не выявили у наших пациенток с распространенными/рецидивирующими/семейными формами НГЭ минорных вариантов в экзоне 2 гена HOXA10. Частота выявленных полиморфных вариантов rs34957925 и rs560654095 не отличалась в группах пациенток с НГЭ, ММ и в контрольных группах (табл. 4).

 

Таблица 4. Частота полиморфных вариантов rs34957925 и rs560654095 гена HOXA10 в группе женщин с наружным генитальным эндометриозом и в контрольных группах

Полиморфизм	Эндометриоз (n = 41)		Контрольная первая группа (n = 24)		Контрольная вторая группа (n = 19)		р
rs34957925	3	7,3 %	2	8 %	1	5,3 %	>0,05
rs560654095	5	12 %	2	8 %	3	15 %	>0,05

 

Сравнение экспрессии исследуемых генов в эндометрии показало следующие результаты. Экспрессия гена TWIST1 значимо не отличалась в нашей выборке ни в одной из исследованных групп и не изменялась у пациенток с эндометриозом в зависимости от фазы цикла. Мы обнаружили достоверные различия в уровне экспрессии гена WNT4 в эндометрии между пациентами с ММ и НГЭ как в общей группе, так и с учетом дня менструального цикла (рисунок). В группе с ММ экспрессия гена WNT4 была в среднем в 1,9 раза выше, чем у пациенток с НГЭ (р = 0,0155). При сравнении образцов, полученных на 7–12-й дмц, эти различия также были достоверными (р = 0,0456). Экспрессия WNT4 у пациенток с эндометриозом не отличалась на 7–12-й и 14–17-й дмц, и мы наблюдали тенденцию к снижению примерно в 2 раза экспрессии данного гена к 20–23-му дмц, но эти различия не были статистически значимыми. Различия в уровне экспрессии WNT4 в эндометрии пациенток контрольной группы и пациенток с НГЭ на 20–23-й дмц отсутствовали.

 

Рисунок. Экспрессия генов HOXA10, TWIST1 и WNT4 в эндометрии пациенток c наружным генитальным эндометриозом, миомой матки и контрольной второй группы по дням менструального цикла: LM — миома матки, ЕМ — наружный генитальный эндометриоз, contr — контрольная вторая группа; цифры соответствуют дням менструального цикла

 

Мы не выявили достоверных различий в уровне экспрессии гена НОXA10 в эндометрии между пациентками с ММ и НГЭ. В эндометрии пациенток с эндометриозом экспрессия данного гена постепенно снижалась при переходе от 7–12-го к 14–17-му и 20–23-му дмц; в секреторную фазу цикла, на 20–23-й дмц, экспрессия данного гена у пациенток с эндометриозом была достоверно ниже, чем у женщин контрольной второй группы (р = 0,0317).

ОБСУЖДЕНИЕ

Частота полиморфных вариантов и экспрессия в эутопическом эндометрии была исследована для трех генов — WNT4, TWIST1 и HOXA10. Белки WNT4 (один из лигандов сигнального каскада Wnt) и HOX10A (гомеобоксный белок А10, транскрипционный фактор) являются ключевыми факторами, необходимыми для нормального развития женской половой системы в эмбриогенезе [12, 13] и в постнатальный период, также они нужны для нормальной децидуализации эндометрия и имплантации эмбриона [14, 15]. Ряд исследований, проведенных в различных этнических группах, а также метаанализ данных GWAS продемонстрировали, что локус 1p36 и, более конкретно, полиморфный вариант rs7521902 гена WNT4 — один из наиболее значимых SNP, ассоциированных с вероятностью развития НГЭ и ММ [5, 16–18]. Другим локусом, ассоциированным с развитием эндометриоза по данным GWAS, является 7p13–p15, в котором находится ген HOXA10 [19]. Гены семейства HOX высококонсервативны, и ген HOXA10 не содержит частых SNP. Однако, по данным ряда авторов, у пациенток с эндометриозом в некоторых случаях удается выявить редкие аллельные варианты этого гена, не представленные в контрольной группе. Бóльшая часть таких вариантов локализована в экзоне 2 гена HOXA10 [11, 19]. Мы провели секвенирование экзона 2 гена HOXA10 у пациенток с эндометриозом и у пациенток контрольной группы для поиска редких вариантов данного гена.

При эндометриозе в эктопическом эндометрии ряд исследователей выявили повышенную экспрессию гена TWIST1. Данный белок служит маркером эпителиально-мезенхимального перехода (от англ. epithelial-mesenchymal transition) и повышенной миграционной активности клеток [20]. Известно, что клетки, подвергающиеся эпителиально-мезенхимальному переходу, могут приобретать стволовые свойства, а мезенхимный статус, по-видимому, является условием восстановления плюрипотентности [21]. Таким образом, экспрессия TWIST1 служит потенциальным маркером стволовости некоторых клеток, присутствующих в эутопическом эндометрии человека [22], что, согласно современным представлениям о роли стволовых клеток в патогенезе эндометриоза, может играть важную роль в развитии заболевания. Предполагают, что эпителиально-мезенхимальный переход может также влиять на процесс имплантации и инвазивного роста эндометриоидных гетеротопий [20]. В органах-мишенях (например, брюшине) часть клеток может лишаться эпителиальных свойств, вследствие чего без эпителиально-мезотелиального барьера облегчается адгезия и инвазия попавших в брюшную полость клеток эндометрия (или стволовых клеток) к подлежащей перитонеальной строме и формирование эндометриоидных очагов [23]. В узлах миомы экспрессия гена TWIST1 также значительно повышена по сравнению с миометрием [24]. Полиморфный сайт rs4721745 гена TWIST1 был выбран нами для анализа вследствие того, что согласно многочисленным исследованиям он ассоциирован с риском развития рака эндометрия, что свидетельствует в пользу функциональной значимости данного полиморфного варианта [25].

Мы не обнаружили статистически достоверных различий между большинством сравниваемых групп по частотам аллелей и генотипов исследованных полиморфных локусов. Однако частота минорных вариантов полиморфного локуса rs7521902 (ген WNT4) значимо не отличалась в группах пациенток с НГЭ, ММ и в контрольной первой группе, в то время как в контрольной второй группе частота минорного аллеля оказалась в 2 раза выше и генотипы А/А и А/С в этой группе преобладали. Данные различия были статистически достоверны (см. табл. 3). По-видимому, данный полиморфный вариант гена WNT4 (A в положении chr1:22164231 (GRCh38.p12) не связан с риском развития эндометриоза, но может быть ассоциирован с развитием бесплодия и/или синдрома тазовых болей, хотя на данной выборке нельзя исключить, что различия являются артефактом исследования.

У пациенток с распространенными/ рецидивирующими/семейными формы НГЭ мы не выявили не описанных ранее минорных вариантов в экзоне 2 гена HOXA10, а частота полиморфных вариантов rs34957925 и rs560654095 не отличалась от таковой в группах сравнения. Таким образом, по результатам нашего исследования, варианты rs7521902 (ген WNT4) и rs4721745 (ген TWIST1) в проанализированной выборке не ассоциированы с развитием НГЭ и ММ, а минорные аллельные варианты в экзоне 2 гена HOXA10 в нашей выборке не связаны с развитием тяжелых, ранних и наследственных форм эндометриоза.

Стоит отметить, что, несмотря на многочисленные подтверждения методом GWAS сведений о предполагаемой ассоциации локусов 1р36 и 7p13p15 и находящихся в них генах WNT4 и HOXA10 с развитием НГЭ и ММ, во многих исследованиях эта ассоциация не была подтверждена. Так, в недавно опубликованной работе итальянские авторы не обнаружили связи между НГЭ и аллельными вариантами гена WNT4 [26], а работы, подтверждающие ассоциацию SNP в гене HOXA10 с развитием данной патологии, были выполнены в Азии [11]. Возможно, между вероятностью развития НГЭ и ММ и исследованными SNP существуют только слабые ассоциации, которые можно выявить лишь при анализе очень больших выборок.

При сравнении экспрессии исследуемых генов в эндометрии были получены следующие результаты. Экспрессия гена WNT4, по крайней мере у пациенток с эндометриозом, не зависит от фазы менструального цикла, не отличается у пациенток с эндометриозом и женщин контрольной группы. У пациенток с ММ экспрессия была в среднем в 1,9 раза выше, чем в группе больных НГЭ (р = 0,0155), эти различия были достоверны также при сравнении образцов, взятых на одной и той же фазе менструального цикла. Полученные нами данные в основном соответствуют сведениям других авторов. Так, Буи и соавт. [27] и Тулак и соав. [28] не обнаружили изменения уровня экспрессии в эндометрии здоровых женщин между пролиферативной и секреторной фазами менструального цикла. О снижении приблизительно в 2 раза уровня экспрессии данного гена в эндометрии пациенток с эндометриозом ранее сообщили китайские авторы [29]. К сожалению, наша выборка не позволяет сделать однозначный вывод о том, меняется ли экспрессия WNT4 в эндометрии пациенток с ММ по сравнению с группой контроля в зависимости от фазы менструального цикла, этот вопрос остается открытым.

Ген HOXA10 кодирует консервативный транскрипционный фактор, играющий важную роль в формировании производных мюллеровых протоков, в том числе матки, а также являющийся одним из общепринятых маркеров рецептивности эндометрия [13]. Тейлор и соавт. показали, что у здоровых женщин ген HOXA10 экспрессируется в эндометрии как в строме, так и в эпителиальных клетках, при этом уровень его экспрессии возрастает преимущественно в клетках эндометриальных желез, к середине секреторной фазы (что примерно соответствует окну имплантации). В эндометрии пациенток с эндометриозом подобного увеличения экспрессии не происходит [30, 31]. В работах других исследователей этот результат был подтвержден [32]. По нашим данным, при эндометриозе в эндометрии наблюдается выраженная тенденция к снижению экспрессии HOX10A при переходе от 7–12-го к 14–17-му и затем к 20–23-му дмц, хотя эти различия недостоверны. При сравнении контрольной группы и пациенток с НГЭ на 20–23-й дмц у женщин с НГЭ мы обнаружили статистически значимое снижение (примерно в 2 раза) экспрессии данного гена (р = 0,0317).

У некоторых пациенток с ММ экспрессия гена HOXA10 также может быть снижена. Так, по данным Ракова и соавт. [33], у пациенток с субмукозными миомами даже в пролиферативной фазе цикла экспрессия гена HOXA10 снижена по сравнению со здоровыми женщинами. Мы не выявили достоверных различий уровня экспрессии гена НОXA10 в эндометрии на 7–12-й дмц между пациентками с ММ и НГЭ. К сожалению, наша выборка не позволила нам исследовать уровень экспрессии данного гена и его динамику в зависимости от фазы менструального цикла у женщин контрольной группы, поэтому вопрос об изменении экспрессии HOXA10 у пациенток с ММ и НГЭ остается открытым.

Наконец, экспрессия гена TWIST1, предполагаемая роль которого в патогенезе НГЭ и ММ обсуждалась выше, значимо не отличалась в нашей выборке ни в одной из исследованных групп и не изменялась у пациенток с НГЭ в зависимости от фазы цикла. Экспрессия данного гена в эндометрии исследована мало; в нескольких работах показано, что в эктопическом эндометрии TWIST1 экспрессируется на более высоком уровне, чем в эутопическом [22, 34, 35]. Ли и соавт. также сообщают, что в эутопическом эндометрии у некоторых пациенток с НГЭ экспрессия TWIST1 несколько повышена по сравнению с пациентками без данной патологии, что приводит к достоверным различиям между этими двумя группами [35]. В нашей выборке были выявлены образцы с увеличенной экспрессией TWIST1 в эндометрии, но эта особенность характерна только для небольшой доли женщин с НГЭ и не может являться универсальным маркером данной патологии.

Таким образом, мы не выявили ассоциации исследованных полиморфных вариантов генов WNT4 и TWIST и минорных вариантов гена HOXA10 с ММ и НГЭ. Экспрессия генов WNT4 и HOXA10 снижена в эндометрии у пациенток с НГЭ, но не у женщин с ММ, при этом у пациенток с НГЭ может быть нарушена регуляция экспрессии гена HOXA10 в эндометрии в течение менструального цикла, что приводит к отсутствию ее подъема в период окна имплантации. Изменения в характере экспрессии в эндометрии изученных генов достоверно отличаются при ММ и НГЭ, по крайней мере у пациенток, некоморбидных по этим заболеваниям. Исследование особенностей экспрессии генов WNT4 и HOXA10 у здоровых женщин и у пациенток с НГЭ и ММ может быть полезно для понимания механизмов бесплодия, часто сопровождающих эту патологию.

Об авторах

Ольга Викторовна Малышева

Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта; Институт физиологии им. И.П. Павлова

Автор, ответственный за переписку.
Email: omal99@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-8626-5071

канд. биол. наук

Россия, Санкт-Петербург

Арсений Сергеевич Молотков

Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта

Email: arseny.molotkov@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-3433-3092
SPIN-код: 6359-6472

канд. мед наук

Россия, Санкт-Петербург

Наталья Сергеевна Осиновская

Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта; Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова

Email: natosinovskaya@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7831-9327
SPIN-код: 3190-2307

канд. биол. наук

Россия, Санкт-Петербург

Наталья Юрьевна Швед

Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта; Городская больница № 40 Курортного района

Email: natashved@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6354-9226
SPIN-код: 8276-1720

канд. биол. наук

Россия, Санкт-Петербург

Мария Игоревна Ярмолинская

Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта; Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова

Email: m.yarmolinskaya@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-6551-4147
Scopus Author ID: 7801562649
ResearcherId: P-2183-2014

д-р мед. наук, профессор, профессор РАН

Россия, Санкт-Петербург

Владислав Сергеевич Баранов

Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта

Email: baranov@vb2475.spb.edu
ORCID iD: 0000-0002-6518-1207
SPIN-код: 9196-7297

д-р мед. наук, профессор, член-корр. РАН, засл. деят. науки РФ

Россия, Санкт-Петербург

Список литературы

Дополнительные файлы