ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ОРАЛЬНОГО КОНТРАЦЕПТИВА «ЯРИНА» НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ГЛИКОПРОТЕИНА-Р

Аннотация

В исследовании на кроликах изучено влияние комбинированного орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность эффлюксного белка-транспортера гликопротеина-Р (Pgp). Активность Pgp оценивали методом анализа фармакокинетики маркерного субстрата фексофенадина. Установлено, что введение препарата «Ярина» в течение 14 и 21 дня приводит к ингибированию функциональной активности Pgp.

Полный текст

По данным многочисленных исследований нежелательные лекарственные реакции (НЛР) являются распространенным явлением в клинической практике [2, 3] Традиционно в группу высокого риска по лекарственным взаимодействиям относятся лица пожилого и старческого возраста, нередко применяющие большое число препаратов из-за наличия различных заболеваний. В западной литературе обсуждается проблема НЛР среди лиц молодого возраста. Результаты исследования свидетельствуют о преобладании НЛР среди женщин, относительно мужчин, и эта разница особенно очевидна в возрасте от 15 до 44 лет. Отмеченное явление может быть обусловлено гендерными различиями в функционировании системы биотрансформации и транспортеров лекарственных средств. Ключевая роль в данном процессе связана с половыми гормонами [4, 15, 18]. Помимо действия естественных гормонов, особенно актуально учитывать эффекты экзогенных гормональных препаратов, например, оральных гормональных контрацептивов, которые занимают важное место в про филактике возникновения нежелательной беременности, а также в лечении гинекологических, дерматологических и эндокринных заболеваний. В России, которая традиционно считается страной с выраженной гормонофобией - по данным официальной статистики, их применяют от 8 до 13% женщин репродуктивного возраста [1, 7]. Гормональные контрацептивы, чаще всего, применяются на протяжении нескольких месяцев, а иногда и лет. В период их приема нередко возникает необходимость фармакотерапии остро возникающих или хронических заболеваний. Это, несомненно, влечет за собой риск возникновения межлекарствен-ных взаимодействий и может быть одной из причин изменения эффективности проводимой терапии и проявления нежелательных лекарственных реакций. Гликопротеин-Р (Fgp) или АВСВ1 белок представляет собой эффлюксный АТФ-зависимый белок-транспортер, участвующий в переносе субстратов из клетки, а также препятствующий их всасыванию в кишечнике [21]. Рgp локализован на мембранах энтероцитов, гепатоцитов, эпите- 70 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №2, 2014 г. лиоцитов почечных канальцев и коры надпочечников, эндотелиоцитов гистоге-матических барьеров. Известно, что многие гормональные вещества, например половые стероиды, глюкокортикоиды, тиреоидные гормоны способны модулировать функциональную активность и экспрессию Pgp [5, 10, 12, 13]. Однако влияние комбинированных оральных контрацептивов на белок-транспортер изучено недостаточно. Цель работы - изучить влияние комбинированного орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность Pgp в эксперименте. Материалы и методы Работа выполнена на 10 половозрелых кроликах-самках породы Шиншилла, массой от 4500 до 5100 г., находящихся в состоянии течки. Препарат «Ярина» (0,03 мг этинилэстрадиола и 3,0 мг дроспире-нона; производитель: «BAYER SCHERING PHARMA AG», Германия) вводили животным per os в дозах 6,5 мкг/кг массы этинилэстрадиола и 650 мкг/кг массы дроспиренона 1 раз в сутки в 12 часов дня. За сутки до начала эксперимента, через 14 и 21 день введения препарата у кроликов определяли функциональную активность Pgp по фармакокинетике его маркерного субстрата - фек-софенадина. Фексофенадин (Препарат «Телфаст» 180 мг; производитель: Aventis Pharma, Италия) вводили животным перорально с помощью металлического зонда в дозе 67,5 мг/кг массы [11]. Через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 и 24 часа от момента введения препарата из ушной вены кроликов забирали кровь в объеме 5 мл. Для получения плазмы крови пробы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут и хранили до анализа при температуре -290С. Фексофенадин не подвергается метаболизму и его фармакокинетика зависит исключительно от функционирования Pgp, который препятствует его всасыванию в кишечнике и способствует выведению с желчью (90%) и мочой (10%) [17]. Таким образом, по концентрации фексофенадина в крови можно судить о функционировании Pgp, который обеспечивает его более быстрое или медленное выведение, а также препятствует всасыванию в кишечнике. Содержание фексофенадина в плазме крови определяли методом ВЭЖХ в изократическом режиме на хроматографе Stayer («Аквилон», Россия) и колонке Ultrasphere 4,6x250 мм (Beckman Coulter, США) с термостатированием при 45°С. Анализ выполняли при длине волны 220 нм и скорости подвижной фазы 1 мл/мин. Экстракцию и хроматографирование маркерного субстрата осуществляли по методу Раменской Г.В. с соавт. [6] в модификации [9]. Количественное определение фексофенадина выполняли по методу абсолютной калибровки по высоте пиков, с использованием стандарта фексофена-дина (Strasbourg cedex). Расчет концентрации фексофенади-на осуществляли с помощью программы «Мультихром». Фармакокинетические параметры [максимальную концентрацию (Cmax, нг/мл), период полувыведения (Т1/2, ч), площадь под фармакокинетической кривой концентрация-время (AUC0-t, нг*ч/мл; AUCo-m, нг*ч/мл), среднее время удерживания (HRT24, ч; МRT, ч), константу элиминации (Kei, 1/ч), общий клиренс (Cl, л/ч) объем распределения (Vd, л)] рассчитывали модельно-независимым методом с использованием программы Kinetica 5.0. Коэффициент абсорбции (Cmax/AUC0-24) вычисляли с помощью офисного пакета «Excel 2010». Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием программы Statistica 8.0. Характер распределения данных оценивали по критерию Шапиро-Уилка. Наличие статистически достоверных межгрупповых различий определяли по критерию Ньюмена-Кейлса после проведения дисперсионного анализа повторных измерений (тест ANOVA - для показателей, имеющих нормальное распределение, критерий Фридмана - для показателей, имеющих распределение отличное от нормального). Полученные данные представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной ошибки средней арифметиче- 71 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №2, 2014 г. ской в случае нормального распределения признака или в виде медианы, верхнего и нижнего квартиля - при распределении данных отличном от нормального. Результаты и их обсуждение Изучение функциональной активности Pgp на уровне целостного организма проводили по анализу фармакокинетики его маркерного субстрата - фексофенади-на. Высокие концентрации фексофенади-на в плазме крови кроликов и его медленное выведение из организма свидетельствуют о низкой функциональной активности Pgp, а низкое содержание фексофенадина в плазме крови и его быстрое выведение - о высокой функциональной активности белка-транспортера. У интактных животных были получены фармакокинетические параметры фексо-фенадина, представленные в таблице 1. 14-дневное и 21-дневное перораль-ное введение кроликам-самкам препарата «Ярина» в дозе этинилэстрадиола 6,5 мкг/кг и дроспиренона 650 мкг/кг массы приводило к статистически значимому изменению фармакокинетических параметров маркерного субстрата Pgp - фек-софенадина (табл. 1). Таблица 1 Основные фармакокинетические параметры фексофенадина при введении препарата «Ярина» (М±т - при нормальном распределении признаков; медиана, нижний и верхний квартиль - при распределении признака отличном от нормального) Изучаемые параметры Исходные значения n=10 «Ярина» 14 дней n=10 «Ярина» 21 день n=10 Omax, нг/мл 414,50 (224,60;454,66) 708,55* (529,01 ; 1133,42) 711,66* (660,88;775,91) Tmax, ч 4 (3;5) 4 (3;4) 4 (4;4) Ті/2, ч 4,67 (4,23; 9,02) 14,21* (12,33; 17,76) 13,07 (11,46; 14,86) AUC0.24, нг*ч/мл 2470,17±375,22 9132,73±1332,25* 10532,06±1556,02* AUC0.„, нг*ч/мл 3248,12 (1595,31 ;3520,56) 11199,4* (8956,55;19594,5) 13763,7* (10042,7;17671,7) ^max / AUC0-24 0,18 (0,11; 0,19) 0,09 (0,08; 0,1) 0,08 (0,07; 0,1) £max / AUC0-» 0,16 (0,11; 0,18) 0,06 (0,05; 0,07) 0,06 (0,05; 0,06) MRT24, ч 8,22 (6,95; 9,45) 10,66* (10,05; 11,21) 10,44* (10,34; 11,18) MRT, ч 10,53 (6,98; 12,78) 21,52* (19,04; 25,81) 20,87* (18,17; 22,61) Cl, л/ч 94,21 (73,61; 162,8) 24,11* (15,31; 29,62) 20,05* (16,98; 25,91) Vd, л 1291,52±163,95 511,31±54,78* 427,81±44,54* Kel, 1/ч 0,13±0,025 0,05±0,008* 0,05±0,007* Примечание:* - p<0,05 - достоверные различия со значениями у интактных животных (исходные значения); n - количество животных в серии. Введение кроликам комбинированного орального контрацептива «Ярина» в течение 14 дней приводило к достоверному (p<0,05) повышению С^ фексофенадина на 70,9 %, AUC0-24 на 269,7 %, AUC0-M на 244,8 %, Т1/2 на 204,3 %, MRT24 на 29,7 %, MRT на 104,4 %, снижению Cl на 74,4 %, Vd на 60,4 % и Kel на 61,5 % по сравнению с исходными показателями. Применение контрацептивного препарата в течение 21 дня также сопровождалось достоверным (p<0,05) и по ряду показателей более выраженным изменением изучаемых фармакокинетических 72 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №2, 2014 г. показателей: наблюдалось повышение Стах фексофенадина на 71,7 %, Т1/2 на 179,9%, AUC0-24 на 326,4%, AUC0-M на 323,7%, МRT24 на 27 %, МRT на 98,2%, снижение Cl на 78,7 %, Vd на 66,9 % и Kel на 61,5% в сравнении с данными интакт-ных животных. В проведенном исследовании изучено влияние орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность Pgp. Достоверное повышение значений Cm^ AUC0-24, AU^-w T1/2 ,MRT24 и MRT и снижение Cl, Vd и Kel фексофенадина характеризуют замедленное выведение маркерного субстрата из организма животного и могут являться доказательством ингибирующего влияния комбинации этинилэстрадиола и дроспиренона на функциональную активность Pgp в печени и почках - органах, обеспечивающих выведение фексофенадина. По современным представлениям в печеночном поглощении этинилэстрадио-ла участвуют три транспортера (OATP1B1, OATP2B1 и NTCP), а его экскрецию в желчь осуществляет, вероятно, транспортер BCRP, а не Pgp [22]. В своих исследованиях, Kim W.Y. с коллегами изучали влияние на модуляцию Pgp различных стероидных гормонов, в том числе и эти-нилэстрадиола. Исследование проводилось на культуре клеток карциномы ободочной кишки человека - LS180. Результаты показали, что этинилэстрадиол повышает уровень белка-транспортера Pgp в 3 раза по сравнению с контролем. По мнению авторов, необходимы дальнейшие исследования в условиях целостного организма [16]. В изученной нами литературе не было обнаружено информации о характере влияния дроспиренона на функциональную активность изучаемого белка-транспортера. Известно, что дроспиренон является производным спиронолактона обладающим гестагенным, антигонадо-тропным, антиандрогенным и антимине-ралокортикоидным эффектами [8]. Данные научной литературы о характере влияния спиронолактона на Р-gp противоречивы: по одним источникам спиро-налактон является субстратом и ингиби тором Р-gp [19], по другим он повышает экспрессию Р-gp в тонком кишечнике крыс [14], и клеточной линии гепатокар-циномы человека HepG2 через прегнан X ядерный рецептор [20]. Таким образом, можно предположить, что ингибирующее влияние препарата «Ярина» на функциональную активность Pgp связано, видимо, с наличием в его составе гестогенного компонента дроспиренона. Концентрация гестагена в препарате в 100 раз выше, чем эстрогенного компонента этинилэстрадиола, что определяет доминирование его эффекта на функциональную активность Pgp. Выводы Внутрижелудочное введение кроли-кам-самкам комбинированного орального контрацептива «Ярина» в дозах 6,5 мкг/кг массы этинилэстрадиола и 650 мкг/кг массы дроспиренона в течение 14 и 21 дней вызывает ингибирование функциональной активности белка-транспортера гликопро-теина-Р, что установленно по фармакокинетике его маркерного субстрата - фексофе-надина, и подтверждается достоверным повышением Cmax, AUC0-24, AUC()-M, T1/2 ,MRT24, MRT и снижением Cl, Vd и Kel.