STUDY OF HEPATOPROTECTIVE ACTIVITY OF FLOWERS TANSY POLYSACCHARIDE COMPLEX

Full Text

В настоящее время большое внимание уделяют поиску и разработке высокоэффективных гепатопротекторов среди лекарственного растительного сырья. Учитывая распространенность токсических поражений печени, целесообразным и обоснованным в их лечении считают использование гепатопротекторных лекарственных средств, которые проявляли бы антиоксидантное действие, повышали активность эндогенной антиоксидантной системы и корректировали нарушение метаболических процессов [2, 9]. Весьма перспективную группу соединений в этом отношении представляют растительные полисахариды. Материалы и методы Полисахаридный комплекс цветков пижмы обыкновенной (ПСП) выделяли из воздушно-сухих цветков пижмы обыкновенной («Цветки пижмы», ООО «Здоровье», Россия) трехкратной экстракцией 1%-ным раствором оксалата аммония, осаждение и очистку проводили последовательным добавлением этанола, ацетона и эфира. В предварительных исследованиях был изучен состав, физико-химические свойства и предложен метод стандартизации ПСП [5]. Для изучения гепатопротекторной активности использовали 3%-ный раствор ПСП в дозе 0,3 г/кг массы [5]. Исследование проводили на 28 аутбредных крысах линии CD (Sprague Dawley), массой 150200г, полученных из питомника «Столбовая», содержащихся в стандартных условиях вивария. Исследования на животных выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ РФ 708н от 23.08.2010). Животные были разделены на 4 группы по 7 особей в каждой. Острый токсический гепатозо-гепатит моделировали введением 50% масляного раствора четыреххлористого углерода внутрижелудочно в дозе 0,1 мл на 100 г массы животного двукратно через день (контроль патологии) [8]. Первой группе подопытных животных ежедневно в течение 7 суток (начи- 52 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, № 2, 2015 г. ная через 1 сутки после последнего введения CCl4) вводили ПСП. Эффективность препарата оценивали через 24 часа после заключительного введения препарата (8-е сутки) по следующим показателям: активность АсАТ и АлАТ, щелочной фосфатазы (ЩФ), глутатион^-трансфе-разы (GST), глутатионперксидазы (GPx), а также по уровню малонового диальдегида (МДА) и свободных сульфгидриль-ных групп (GSH) в плазме крови и лизате эритроцитов, как маркеров состояния пе-рекисного окисления липидов (ПОЛ). Исследуемые показатели определяли следующим образом: концентрацию МДА (нмоль/мг белка) по реакции с тиобарби-туровой кислотой (по методу Стальной Д.И., Горишвили Т.Г., 1977), уровень GSH (мкмоль/мг белка) по реакции восстановления дисульфид-5, 5 -дитиобис- 2-нитробензоата (по методу Habeeb, 1972) на спектрофотометре Shimadzu UV-150-02, активность GPх (нмоль НАДФ/мин*мг белка) по реакции ферментативного восстановления глутатиона гидроперекисью третбутила (по методу Paglia D.E., Valentine W.N., 1967 в модификации Ланкина В.З.), активность GST (нмоль ХДБН/мин*мг белка) по методу J.N. Keen, W.B. Iakoby (1978) с использованием биохимического анализатора Humalyzer 2000. Вторая группа животных получала препарат сравнения - расторопши пятнистой плодов экстракт («Карсил», «Со-фарма», Болгария) - эквивалент силима-рина - в дозе 100 мг/кг [3] в режиме на значения полисахарида. Интактные животные и крысы контрольной группы получали воду очищенную в эквиобъеме. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием прикладных программ MSExel 2010 и Statsoft Statistica 8.0. Данные представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной ошибки среднего результата (M±m) при нормальном распределении данных и в виде медианы, верхнего и нижнего квартиля - при распределении данных, отличном от нормального. Характер распределения данных оценивали по критерию Шапиро-Уилка. Наличие статистически достоверных межгрупповых различий определяли c использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA), различия между группами считали достоверными при уровне значимости р<0,05. Результаты и их обсуждение Выделенный полисахаридный комплекс цветков пижмы обыкновенной представляет собой аморфное вещество светло-серого цвета. Методом тонкослойной хроматографии был установлен моносахаридный состав ПСП: глюкоза, галактоза, ксилоза и арабиноза. Высокое содержание уроновых кислот (84,70%) позволяет отнести выделенный комплекс к классу гликуроногликанов типа пектиновых веществ [3]. Показатели функционального состояния, ПОЛ и антиоксидантной защиты печени у интактных животных представлены в таблицах 1 и 2. Таблица 1 Влияние ПСП и силимарина на активность ферментов печени при экспериментальном гепатите Г руппа показатель Интактные n=7 Контроль гепатита n=7 Лечение гепатита ПСП n=7 Лечение гепатита силимарином n=7 АСТ 81,03±6,02 123,50±24,66* 93,95±10,29** 90,18±8,82** АЛТ 23,00±2,00 57,21±5,00* 49,96±7,55 38,75 (34,90:43,00)** ЩФ 306,33±14,74 836,82±286,47* 875,17±255,08 857,70 (528,50:897,00) В таблицах 1 и 2: * - сравнение с интактными животными (р<0,05), ** - сравнение с контролем патологии (р<0,05) 53 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, № 2, 2015 г. Таблица 2 Влияние ПСП и силимарина на состояние ПОЛ и антиоксидантной защиты при экспериментальном гепатите Г руппа ^'''животных показатель Интактные n=7 Контроль гепатита n=7 Лечение гепатита ПСП n=7 Лечение гепатита силимарином n=7 МДА гемолизат 6,90±0,55 13,89±5,50 9,01±1,06 7,48±1,94 плазма 29,12±1,97 45,41±8,57* 31,70 (28,27:39,83)** 33,84 (32,13:37,27)** GSH гемолизат 42,90 (42,74:43,06) 22,63±3,47* 45,18±8,25** 25,65±9,68 плазма 40,99±5,35 26,20±3,92* 29,41±4,40 34,31±4,27** GST гемолизат 12,85±4,53 5,36±0,74* 7,67±2,12** 5,11 (4,46:23,24) плазма 257,85 (238,80:276,90) 210,95±41,30 176,83±31,10 219,63±67,43 ОРх гемолизат 1,22±0,41 0,50±0,17* 0,91±0,34 0,93±0,29 плазма 36,05 (31,50:40,60) 22,18±15,43 19,00±4,57 27,07±2,11 Введение четыреххлористого углерода вызывало у крыс острое токсическое поражение печени, сопровождающееся активацией ПОЛ. Активность ферментов печени достоверно увеличивалась по сравнению с данными интактных животных: АсАТ - в 1,52 раза, АлАТ - в 2,48 раза, ЩФ - в 2,73 раза. Уровень МДА в плазме крови возрос в 1,56 раза (р<0,05), уровень GSH в лизате эритроцитов и в плазме крови снизился в 1,90 и 1,56 раза соответственно (р<0,05), уровень GST и GPx в гемолизате уменьшился в 2,40 и 2,44 раза соответственно (р<0,05). У животных с токсическим гепатитом, получавших ПСП курсом в 7 дней, уровень АсАТ и АлАТ снизился по сравнению с контролем патологии в 1,31 раза (р<0,05) и на 12,67% (р>0,05) соответственно (рис. 1). В гемолизате эритроцитов у крыс с гепатитом, получавших ПСП, содержание МДА уменьшилось на 35,13% (р>0,05), содержание безбелковых тиоловых групп увеличилось на 99,65% (р<0,05), активность GST и GPх повысилась на 43,10% (р<0,05) и 82,00% (р>0,05) соответственно (рис. 2.). В плазме крови наблюдалось снижение содержания МДА на 30,19% (р<0,05). При сравнении полученных результатов с данными интактных животных выявлена нормализация уровней МДА и безбелковых тиоловых групп, активности GST и GPх, что можно расценивать как снижение выраженности процессов ПОЛ и стимуляцию системы антиоксидантной защиты клетки. Рис. 1. Активность (в процентах от нормы) ферментов печени в плазме крови на 8-е сутки у крыс с гепатитом и на фоне его лечения ПСП и силимарином 54 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, № 2, 2015 г. Рис. 2. Содержание (в процентах от нормы) МДА, тиоловых групп и антиоксидантных ферментов в гемолизате эритроцитов на 8-е сутки у крыс с гепатитом и на фоне его лечения ПСП и силимарином У животных, получавших для лечения токсического гепатита силимарин, наблюдалось достоверное снижение активности АсАТ и АлАТ (в 2,56 и 1,48 раза соответственно) по сравнению с данными контроля патологии. Уровень МДА в гемолизате эритроцитов данной серии крыс снизился на 46,14% (р<0,05), в плазме крови - на 25,47% (р<0,05). Содержание тиоловых групп в плазме крови увеличилось на 30,96% (р<0,05), активность GST и GP изменялась разнонаправленно и недостоверно по отношению к контролю патологии (рис. 3). Рис. 3. Содержание (в процентах от нормы) МДА, тиоловых групп и антиоксидантных ферментов в плазме крови на 8-е сутки у крыс с гепатитом и на фоне его лечения ПСП и силимарином На рисунках 1-3: р<0,05*- сравнение с интактными животными, р<0,05**- сравнение с контролем патологии 55 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, № 2, 2015 г. У крыс группы контроля патологии острый токсический гепатит приводил к повышению уровня аминотрансфераз и ЩФ, активации процессов ПОЛ, что согласуется с результатами других авторов [1, 3, 4]. Снижение уровня АсАт в сыворотке крови животных с токсическим гепатозо-гепатитом при лечении ПСП свидетельствует об уменьшении цитолиза и повреждения клеточных мембран гепатоцитов. Однако активность ЩФ при лечении С04-гепатита ПСП и силимарином не уменьшалась, что характерно для сохраняющегося холестаза и/или жировой дистрофии печени. Таким образом, полисахаридный комплекс цветков пижмы обыкновенной, применявшийся для лечения гепатита, оказывает мембраностабилизирующее, гепатопротекторное и анти-оксидантное действие, что подтверждается снижением уровня МДА и увеличением содержания безбелковых тиоловых групп в гемолизате эритроцитов и плазме крови. Механизм антиоксидантного действия ПСП может быть обусловлен как способностью прямо взаимодействовать со свободными радикалами за счет наличия в структуре молекулы полисахарида карбоксильных и гидроксильных групп, так и активацией ферментов, отвечающих за распад перекисных соединений [6], что подтверждают полученные нами данные. Кроме того, полисахаридный комплекс является поверхностно-активным веществом и способен образовывать защитный слой на поверхности молекул, взаимодействуя с гликопротеинами и протеоглика-нами гликокаликса [7], видимо, препятствуя их окислительной модификации. Выводы 1. Гепатит, вызванный у крыс введением четыреххлористого углерода, сопровождается усилением процессов пере-кисного окисления липидов, снижением содержания безбелковых тиоловых групп, активности глутатион^-трансферазы и глутатионпероксидазы в гемолизате и плазме крови. 2. Полисахаридный комплекс цветков пижмы обыкновенной оказывает гепатопротекторное действие за счет уменьшения цитолиза, снижает активность АсАТ в плазме крови, а также проявляет выраженное антиоксидантное действие, характеризующееся уменьшением концентрации МДА в плазме крови, повышением содержания безбелковых тио-ловых групп и активности глутатион-S-трансферазы в гемолизате. 3. Полисахарид цветков пижмы обыкновенной уступает силимарину по гепатопротекторной активности, однако превосходит его по антиоксидантному действию.

References

Supplementary files