Diagnosticheskaya tsennost' molekulyarnogo metoda issledovaniya eyakulyata na mikrobnuyu kontaminatsiyu pri leykotsitospermii

Abstract

Full Text

Введение. Инфекционно-воспалительный процесс полового тракта может быть причиной снижения фертильности у мужчины. Индикатором воспаления считается повышение концентрации лейкоцитов в эякуляте >1 · 106. Назначение антибактериальной терапии и выбор линейки антимикробного препарата напрямую зависит от видоспецифичности и вирулентности инфекционного агента. Культуральный метод остается стандартом диагностики для идентификации флоры, тем не менее он не всегда позволяет определить возбудителя, что может быть обусловлено биологическими особенностями микроорганизмов (строгие анаэробы), конкурентным ингибированием в процессе роста микроколоний, формированием L-форм бактерией и биопленок. Ряд работ продемонстрировал высокую диагностическую ценность молекулярно-генетических тестов при воспалительных заболеваниях мочеполовой системы. Метод амплификации нуклеиновых кислот («Андрофлор», компания «ДНК-Технология») позволяет проводить качественную и количественную оценку микробиома половой системы. Сравнительные исследования видоспецифичности и чувствительности посева эякулята на флору и ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) при лейкоцитоспермии ограничены. Цель исследования. Сравнить чувствительность и видоспецифичность бактериологического метода и ПЦР-РВ («Андрофлор») при исследовании эякулята на микрофлору у субфертильных пациентов с лейкоцитоспермией. Материалы и методы. Обследованы 80 мужчин c патоспермией на фоне бессимптомной лейкоцитоспермии (>1 · 106), подтвержденной двукратным исследованием. Средний возраст пациентов - 35,3 ± 7,5 года (24-47 лет). Критерии исключения - гонококковый и негонококковый уретрит, ИППП, инфекция мочевых путей, прием антибиотиков менее чем за 4 недели до исследования. За 3 дня до сдачи эякулята пациентам рекомендовалось половое воздержание или барьерная контрацепция во избежание излишней контаминации уретры вагинальной флорой половой партнерши. Эякулят собирали после микции путем мастурбации в стерильный контейнер с предварительным туалетом наружных половых органов. Анализ проводили методами ПЦР-РВ и посева спермы на питательные среды. Значимой контаминацией считался титр более 103. Результаты. При посеве рост флоры обнаружен в 54 (67,5 %) образцах, средняя степень бактериальной нагрузки составила 104,9. В 15 (18,7 %) образцах высевалась грамположительная факультативная анаэробная флора, относящаяся к нормоценозу. В 18 (22,5 %) образцах наблюдался рост E. coli, в 13 (16,2 %) - Enterococcus spp., в 6 (7,5 %) наблюдениях отмечена ассоциация вышеуказанными бактериями, в 2 (2,5 %) - Corynebacterium sp. При ПЦР-РВ флора выявлена в 63 (78,7 %) образцах. Средняя степень бактериальной нагрузки составила 104,6. В 11 (13,7 %) случаях обнаружена изолированная нормофлора, в 35 (43,7 %) - Enterobacteriaceae/Enterococcus spp., в 5 (6,2 %) - Аnaerococcus sp. и в 12 (15,0 %) - сочетанная контаминация сапрофитной флоры и представителей семейства Enterobacteriaceae/Enterococcus. В 4 наблюдениях культуральное исследование демонстрировало наличие E. coli, не подтвержденное результатами «Андрофлор». Не было установлено корреляции между степенью лейкоцитоспермии и частотой выявления патогенов. Выводы. Результаты исследования показали высокую чувствительность метода ПЦР-РВ. «Андрофлор» позволяет с большей вероятностью выявить наличие анаэробной флоры, как правило, в ассоциации с условно-патогенной. Тест может быть рекомендован к использованию наряду с культуральным методом при обследовании пациентов с лейкоцитоспермией. Требуются дальнейшие исследования для определения клинической значимости молекулярно-генетического скрининга в диагностическом арсенале мужского бесплодия.