Разработка протокола трансформации Lacticaseibacillus paracasei RG

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Молочнокислые бактерии, традиционно используемые в пищевой промышленности, рассматриваются в качестве платформы для создания рекомбинантных штаммов для экспрессии и доставки протективно-значимых антигенов и других биологически активных молекул в желудочно-кишечный тракт сельскохозяйственных животных и человека. Одним из препятствий для получения рекомбинантных штаммов молочнокислых бактерий является их низкая эффективность трансформации плазмидной ДНК. В качестве объекта исследований был выбран пробиотический штамм Lacticaseibacillus paracasei RG, безопасный и способный преодолевать кислотный барьер желудка. Было исследовано влияние условий выращивания, подготовки компетентных клеток и режима электропорации на эффективность трансформации L. paracasei RG вектором pTRKH2, в результате чего создан протокол эффективной трансформации L. paracasei RG рекомбинантной ДНК.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

П. С. Дудик

ФИЦ Фундаментальные основы биотехнологии РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: polinadu05@gmail.com
Россия, 119071, Москва

Д. К. Армянинова

ФИЦ Фундаментальные основы биотехнологии РАН

Email: polinadu05@gmail.com
Россия, 119071, Москва

А. В. Гончаренко

ФИЦ Фундаментальные основы биотехнологии РАН

Email: polinadu05@gmail.com
Россия, 119071, Москва

Список литературы

  1. Государственная Фармакопея Российской Федерации. 13 изд. Т. 2. Капсулы ОФС. ОФС.1.7.2.0008.15. Россия: Москва, 2015.
  2. Börner R. A., Kandasamy V., Axelsen A. M., Nielsen A. T., Bosma E. F. Genome editing of lactic acid bacteria: opportunities for food, feed, pharma and biotech // FEMS Microbiol. Lett. 2019. V. 366. Art. fny291. P. 1–12. https://doi.org/10.1093/femsle/fny291
  3. LeCureux J.S., Dean G. A. Lactobacillus mucosal vaccine vectors: immune responses against bacterial and viral antigens // MSphere. 2018. V. 3. Art. e00061-18. https://doi.org/10.1128/msphere.00061-18
  4. Morovic W., Roper J., Smith A., Mukerji P., Stahl B., Caverly Rae J., Ouwehand A. C. Safety evaluation of HOWARU® Restore (Lactobacillus acidophilus NCFM, Lactobacillus paracasei Lpc-37, Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bl-04 and B. lactis Bi-07) for antibiotic resistance, genomic risk factors, and acute toxicity // Food Chem. Toxicol. 2017. V. 110. P. 316‒324. https://doi.org/10.1016/j.fct.2017.10.037
  5. Nickoloff J. A. (ed.) Electroporation protocols for microorganisms. USA, New Jersey: Humana Press, 1995. 374 p.
  6. O’Sullivan D.J., Klaenhammer T. D. High- and low-copy-number Lactococcus shuttle cloning vectors with features for clone screening // Gene. 1993. V. 137. P. 227‒231. https://doi.org/10.1016/0378-1119(93)90011-Q
  7. Palomino M. M., Allievi C. M., Prado-Acosta M., Sanchez-Rivas C., Ruzal S. M. New method for electroporation of Lactobacillus species grown in high salt // J. Microbiol. Meth. 2010. V. 83. P. 164–167. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2010.08.017
  8. Song X., Huang H., Xiong Z., Xia Y., Wang G., Yin B., Ai L. Characterization of a cryptic plasmid isolated from Lactobacillus casei CP002616 and construction of shuttle vectors based on its replicon // J. Dairy Sci. 2018. V. 101. P. 2875–2886. https://doi.org/10.3168/jds.2017-13771
  9. Welker D. L., Hughes J.E, Steele J. L., Broadbent J. R. High efficiency electrotransformation of Lactobacillus casei // FEMS Microbiol. Lett. 2015. V. 362. P. 1‒6. https://doi.org/10.1093/femsle/fnu033
  10. Welker D. L., Crowley B. L., Evans J. B., Welker M. H., Broadbent J. R., Roberts R. F., Mills D. A. Transformation of Lactiplantibacillus plantarum and Apilactobacillus kunkeei is influenced by recipient cell growth temperature, vector replicon, and DNA methylation // J. Microbiol. Meth. 2020. V. 175. Art. 105967. https://doi.org/10.1016/J.MIMET.2020.105967
  11. Wyszyńska A., Kobierecka P., Bardowski J., Jagusztyn-Krynicka E. K. Lactic acid bacteria – 20 years exploring their potential as live vectors for mucosal vaccination // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2015. V. 99. P. 2967‒2977. https://doi.org/10.1007/S00253-015-6498-0

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Схема эксперимента по получению компетентных клеток и поиска оптимального протокола трансформации L. paracasei RG.

Скачать (353KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Разработанный комбинированный протокол получения компетентных клеток и трансформации L. paracasei RG.

Скачать (239KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2025