Моделирование и динамика развития экзогенного и эндогенного окислительного стресса in vitro


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Актуальность. Влияние прооксидантов на клетку может вызывать разные эффекты в зависимости от дозы и длительности воздействия, поэтому для изучения данных процессов необходимы адекватные экспериментальные модели окислительного стресса (ОС) in vitro.

Цель исследования – изучить динамику развития ОС при эндогенной и экзогенной его моделях in vitro.

Материал и методы. Исследование выполнено на линии клеток Сасо-2. Пероксид водорода (Н2О2) и DL-бутионин-сульфоксимин (БСО) добавляли к клеткам в концентрациях 0,1-100 мкМ и 1-500 мкМ соответственно в течение 3, 24 и 72 ч. По окончании экспозиции определяли процент жизнеспособных клеток (МТТ-тест), уровень активных форм кислорода (MitoTracker Red CM-H2 XRos), количество ядерного фактора эритроидного происхождения (Nrf2) и глутатионпероксидазы (ИФА), концентрацию карбонильных производных белков (фотометрический метод).

Результаты. Показано, что Н2О2 в концентрациях 5, 10, 50 мкМ и БСО – 10, 50, 100 мкМ вызывают повышение уровня карбонильных производных белков, уровня транскрипционого фактора Nrf2 и антиоксидантного фермента – глутатионпероксидазы при сроке воздействия 24 и 72 ч. Концентрации Н2О2 100 мкМ и БСО 500 мкМ являются токсичными для линии клеток Caco-2. Срок инкубации 3 ч не вызывает развитие ОС.

Выводы. Пероксид водорода в концентрациях 5, 10, 50 мкМ и БСО – 10, 50, 100 мкМ при сроках воздействия 24 и 72 ч вызывают развитие компенсированного окислительного стресса (эустресса), а Н2О2 в концентрации 100 мкМ и БСО – 500 мкМ являются токсичными для клеток линии Сасо-2 (дистресс).

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Ю. В. Абаленихина

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: abalenihina88@mail.ru

к.б.н., доцент, доцент кафедры биологической химии с курсом КЛД ФДПО

Россия, г. Рязань

С. К. Правкин

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Email: abalenihina88@mail.ru

к.м.н., доцент, доцент кафедры фармакологии с курсом фармации ФДПО

Россия, г. Рязань

А. В. Щулькин

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Email: abalenihina88@mail.ru

д.м.н., доцент, профессор кафедры фармакологии с курсом фармации ФДПО

Россия, г. Рязань

Е. Д. Рокунов

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Email: abalenihina88@mail.ru

студент, лечебный факультет

Россия, г. Рязань

Д. С. Немтинов

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Email: abalenihina88@mail.ru

студент, лечебный факультет

Россия, г. Рязань

Е. П. Васильева

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Email: abalenihina88@mail.ru

студентка, педиатрический факультет

Россия, г. Рязань

Е. Н. Якушева

ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России

Email: abalenihina88@mail.ru

д.м.н., профессор, зав. кафедрой фармакологии с курсом фармации ФДПО

Россия, г. Рязань

Список литературы

  1. Sies H. Introductory Remarks. Ed. Oxidative Stress, Academic Press, London, 1985; 1–8.
  2. Sies H., Cadenas E. Oxidative stress: damage to intact cells and organs. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 1985; 311: 617–631.
  3. Jones D.P. Redefining oxidative stress. Antioxid Redox Signal. 2006; 8(9-10):1865–1879.
  4. Sies Н. Oxidative Stress: Eustress and Distress in Redox Homeostasis Stress: Physiology. Biochemistry, and Pathology. 2019; 13: 153–163.
  5. Sies H. On the history of oxidative stress: Concept and some aspects of current development. Current Opinion in Toxicology. 2018; 7: 122–126.
  6. Itoh K., Chiba T., Takahashi S., et al. An Nrf2/small Maf heterodimer mediates the induction of phase II detoxifying enzyme genes through antioxidant response element. Biochem Biophys Res Commun. 1997; 236: 313–322.
  7. Schreck R., Albermann K., Baeuerle P.A. Nuclear factor kappa B: an oxidative stress-responsive transcription factor of eukaryotic cells. Free Radic Res Commun. 1992; 17:221–237.
  8. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Мжаванадзе Н.Д. и др. Сравнение цитотоксичности синтетических сосудистых протезов in vitro. Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. 2020; 28(2): 183–192.
  9. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976; 72: 248–54.
  10. Sies H. Hydrogen peroxide as a central redox signaling molecule in physiological oxidative stress: Oxidative eustress. Redox Biology. 2017; 11: 613–619.
  11. Smirnoff N., Arnaud D. Hydrogen peroxide metabolism and functions in plants. New Phytologist. 2019; 2: 1197–1214.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Жизнеспособность клеток линии Сасо-2 при воздействии пероксида водорода (а) и DL-бутионинсульфоксимина (б) в течение 3, 24 и 72 ч (M, n = 3).

Скачать (64KB)
3. Рис. 2. Изменение уровня активных форм кислорода под действием пероксида водорода (Н2О2) и D,L-бутионинсульфоксимина (БСО) в клетках линии Сасо-2: окрашивание с помощью MitoTracker Red CM-H2XRos, ×400

Скачать (264KB)
4. Рис. 3. Концентрация карбонильных производных белков в цитоплазматической фракции гомогената при воздействии пероксида водорода (а) в концентрациях 0,1–100 мкМ и при воздействии D,L-бутионинсульфоксимина (б) в концентрациях 1–500 мкМ и сроке воздействия 3, 24 и 72 ч (M, n = 3); р < 0,05 по сравнению с *контролем; ^ сроком инкубации 3 ч; + сроком инкубации 24 ч (критерий Ньюмана–Кейсла)

Скачать (98KB)
5. Рис. 4. Количество Nrf2 в цитоплазматической фракции лизата клеток линии Сасо-2 при воздействии пероксида водорода в концентрациях 1–500 мкМ (слева) и DL-бутионинсульфоксимина в концентрациях 1–500 мкМ в течение 3, 24 и 72 ч (M ± SD, n = 3)

Скачать (53KB)

© ИД "Русский врач", 2023

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах