Разработка подходов к стандартизации листьев ореха черного методом ВЭЖХ

Актуальность. Орех черный (Juglans nigra L., сем. ореховые - Juglans) - листопадное дерево, являющееся одним из перспективных видов лекарственного растительного сырья. Кроме ведущей группы биологически активных соединений (нафтохинонов) в данном сырье содержатся и другие химические соединения, в том числе флавоноиды (кверцитрин, мирицитрин), которые могут вносить существенный вклад в антимикробную и общеукрепляющую активность указанных лекарственных растительных препаратов. Несмотря на содержание большого числа биологически активных соединений и высокую фармакологическую активность, листья ореха черного не включены в Государственную фармакопею РФ. Возникает необходимость в стандартизации листьев ореха черного, в том числе и разработке методик количественного определения с использованием современных методов анализа. Цель исследования. Разработка методик количественного анализа биологически активных соединений листьев ореха черного - мирицитрина и кверцитрина. Материал и методы. Объект исследования - образцы листьев ореха черного, заготовленные в марте-апреле 2018-2020 гг. на территории Ботанического сада Самарского университета (г. Самара), выделенные авторами стандартные образцы мирицитрина и кверцитрина с чистотой не менее 98%. В качестве методов анализа извлечений выбрана высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которую осуществляли с использованием хроматографа «Милихром-6» (НПАО «Научприбор»). Расчет содержания мирицитрина и кверцитрина проводили методом внешнего стандарта. Пригодность хроматографической системы оценивали в соответствии с ОФС.1.2.1.2.0001.15 «Хроматография». Результаты. Из водно-спиртового извлечения листьев ореха черного выделены доминирующие флавоноиды - мирицитрин (мирицетин-3-O-α-L-рамнопиранозид) и кверцитрин(кверцетин-3-O-α-L-рамнопиранозид), идентифицированные на основании данных УФ-, ЯМР-спектров, масс-спектров, а также результатов кислотного гидролиза. Разработаны методики количественного определения мирицитрина и кверцитрина в листьях ореха черного методом микроколоночной ВЭЖХ в условиях изократического режима (подвижная фаза - ацетонитрил : 1%-ный раствор уксусной кислоты в воде в соотношении 2:8). Ошибка единичного определения содержания мирицитрина в листьях ореха черного с доверительной вероятностью 95% составила ±4,91%. Содержание мирицитрина варьировало от 2,58±0,15 до 2,67±0,13%, кверцитрина - от 1,36±0,12 до 1,45±0,15%. Ошибка единичного определения содержания кверцитрина в листьях ореха черного с доверительной вероятностью 95% составила ±5,18%. Выводы. Результаты проведенных исследований показали удовлетворительные метрологические характеристики предлагаемых для стандартизации сырья листьев ореха черного ВЭЖХ-методик определения количественного содержания мирицитрина и кверцитрина

орех черный, листья, флавоноиды, мирицитрин, кверцитрин, высокоэффективная жидкостная хроматография, стандартизация