PHYSICAL AND CHEMICAL METHODS FOR FLAVONOIDS CONTENT DETERMINATION IN SOPHORA FLAVESCENS ROOTS

Abstract

The article presents a study on the identification methodology elaboration of flavonoids in Sophora flavescens roots using chemical reaction and TLC method. We have also developed methods of quantitative determination of flavonoids sum into raw materials by differential spectrophotometry method.

Full Text

В настоящее время внимание ученых во всем мире привлекает многовековой опыт восточной медицины, в частности китайской и тибетской, в которой особенно широкое применение находят средства растительного происхождения.Перспективным источником для создания новых эффективных лекарственных средств является софора желтеющая (Sophora flavescens Soland., сем. Fabaceae), многолетнее травянистое растение, имеющее обширный ареал, охватывающий Дальний Восток (Приморскиий край), юго-восток Амурской области, юго-запад Хабаровского края, Читинскую область, введена в культуру в Приморском крае и культивируется в некоторых провинциях Китая [1]. Высушенные корни софоры желтеющей, также известные как «Кушень» имеют долгую историю использования в традиционной китайской медицине для лечения воспалительных заболеваний [7]. Современные исследования фармакологии и клинической практики показали, что биологически активные соединения корня софоры желтеющей обладают широким фармакологическим действием - оказывают выраженное жаропонижающее, противовоспалительное, гастропротекторное, антибактериальное и умеренно анальгезирующее действие[6]. В результате проводимых ранее исследований химического состава софоры желтеющей корней установлено, что основными биологически активными веществами являются хинолизидиновые алкалоиды, флавоноидные соединения и тритерпеновые сапонины [3, 5]. Содержание флавоноидов во многом и обуславливает основное фармакологическое действие сырья софоры желтеющей - противовоспалительное. В связи с вышесказанным, представляется возможным рассмотреть вопрос о проведении стандартизации софоры желтеющей корней по сумме флавоноидов. Сырьем для проведения исследования служили корни софоры желтеющей - Sophora flavescens Soland, сем. Бобовые (Fabaceae L.), в воздушно-сухом состоянии, заготовленные в Забайкальском крае в фазу цветения - плодоношения растения. Определение товароведческих показателей доброкачественности сырья проводилось в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи СССР XI издания [1] и ГФ Российской Федерации ХII издания [2]. Влажность определяли методом высушивания в сушильном шкафу лабораторном ШСС-80 (Россия), золу - в муфельной печи МИМП-3п (Россия). Для метода ТСХ использовали хроматографические пластинки «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ» (Россия). ЛРС просеивали через лабораторные сита С30/50 (ГОСТ 3826-82). Все реактивы и растворители, используемые в исследованиях, отвечали требованиям НД. Регистрацию УФ-спектров проводили на спектрофотометре СФ-2000 (Россия). В качестве стандартного образца (СО) использовали нарингенин. Статистическую обработку полученных результатов проводили согласно требований ГФ Российской Федерации ХII издания [2]. Установлены следующие товароведческие показатели: влажность 5,0±0,41%, зола общая 5,1±0,05%, зола, нерастворимая в 10% кислоте хлористоводородной, 0,99±0,03%, органические примеси 0,03±0,01%, экстрактивные вещества 31,55±0,89%. Идентификацию флавоноидов проводили с помощью химических реакций (цианидиновая проба, с раствором аммиака) и методом ТСХ в системе растворителей: гексан - ацетон (1:1), проявитель: 1% раствор алюминия хлорида, детекция: УФ-свет (длина волны 365 нм). Идентификацию проводили по значениям величин Rf пятен, их окраске и в сравнении со стандартным образцом. Дифференциальный спектр 70% спиртового извлечения софоры желтеющей корней положению длинноволнового максимума поглощения совпадает со спектром нарингенина (λmax = 330±2 нм). Количественное содержание суммы флавоноидов в 70% спиртовом извлечении софоры желтеющей корней определяли дифференциальным спектрофотометрическим ΔЕ методом по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом (табл. 1). В качестве стандартного вещества предложено использовать нарингенин. Таблица 1 - Метрологические характеристики метода количественного определения суммы флавоноидов f S S2 P,% t(p,f) ΔX RSD 10 2,14 0,06835 0,00467 95% 2,26 0,06 ±3,1 Выводы Установлены основные товароведческие показатели софоры желтеющей корней. С помощью качественных реакций и методом ТСХ установлено наличие флавоноидов в софоры желтеющей корнях. Разработана альтернативная методика количественного определения суммы флавоноидов в софоре желтеющей корнях методом дифференциальной спектрофотометрии и установлено содержание суммы флавоноидов не менее 2% в пересчете на нарингенин, относительная погрешность метода не превысила 3,5%