ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В АНАЛИЗЕ СЕСКВИТЕРПЕНОВЫХ ЛАКТОНОВ ЛАВРА БЛАГОРОДНОГО (LAURUS NOBILIS L.)


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Разработана методика количественного определения сесквитерпеновых лактонов (костунолида и дегидрокостуслактона) в листьях лавра благородного с использованием метода обращенно-фазовой ВЭЖХ. Были определены оптимальные условия экстракции изучаемых веществ из сырья. С использованием разработанной методики установлено, что содержание костунолида и дегидрокостуслактона в образцах лавра, в пересчете на абсолютно сухое сырье, достигает 0,99 и 0,26% соответственно.

Полный текст

Laurus nobilis L. (лавр благородный, сем. Lauraceae) представляет собой вечнозеленый кустарник или дерево высотой 15-20 м., широко распространен в Средиземноморском регионе и Европе [4]. Его листья традиционно используются в народной медицине при астме, болезнях сердца, нарушении пищеварения, диарее, мигрени, дисменорее и ревматических болях. В качестве основных действующих веществ в растении описаны сесквитерпеновые лактоны [1], важнейшими из которых являются костунолид и дегидрокостуслактон. Данные соединения показали высокую активность при лечении рака, вирусных и микробных инфекций, язв и обладают антисептическими, противовоспалительными, ранозаживляющими и глистогонными свойствами [2, 3, 5, 6]. Наличие столь ценных фармакологических соединений в листьях лавра благородного предполагает рассматривать данное сырье как перспективное для внедрения в медицинскую практику. При создании нормативной документации на сырье важнейшим этапом является разработка методики количественного определения основных биологически активных веществ. В этой связи, целью настоящей работы является разработка ВЭЖХ-методики количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона в листьях лавра благородного. В работе использовали высушенные листья лавра благородного, собранные на территории Краснодарского края (г. Геленджик) и в Республике Абхазия (г. Сухуми) в 2014 году. В качестве стандартных образцов использовали костунолид и дегидрокостуслактон производства компании Sigma, с содержанием действующих веществ не менее 97% и 98% соответственно. Для количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона использовался метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Работу проводили на системе для ВЭЖХ «Стайер» (компания «Аквилон», Россия). В работе применялась колонка Luna С 8 «Phenomenex, USA». Размер колонки 250x4,6 мм. Ввод пробы осуществлялся с помощью петлевого дозатора. Объем пробы 20 мкл. Элюирование проводилось в изократическом режиме. Элюент А - ацетонитрил, элюент B - 0,05 М раствор кислоты фосфорной, в соотношении 60:40. Расход подвижной фазы 1мл/мин. Детектирование проводилось спектрофотометрически при 210 нм. Предварительно было установлено, что двойная экстракция метанолом при соотношении сырье:экстрагент 1:250 обеспечивает максимальный выход определяемых веществ. Методика количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона. Точную навеску (около 0,1 г) высушенных и измельченных до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром пор 3 мм, листьев лавра благородного помещали в коническую колбу, прибавляли 25 мл метанола и кипятили с обратным холодильником в течение 30 мин. Полученное извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл. Операцию повторяли, объединяя полученные извлечения, и доводили тем же растворителем до метки. Затем 1 мл полученного извлечения переносили в пробирки типа Эппендорф, центрифугировали при 8000 мин-1 в течение 10 мин и использовали для хроматографирования. Типичная хроматограмма извлечения из листьев лавра благородного представлена на рисунке 1. Рисунок 1 - Хроматограмма метанольного извлечения из листьев лавра благородного Количественное определение изучаемых сесквитерпеновых лактонов в исследуемых образцах проводили методом сравнения со стандартными образцами Результаты количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона в листьях лавра благородного, собранных в Абхазии (г. Сухуми) и Краснодарском крае (г. Геленджик), в пересчете на абсолютно сухое сырье, представлены в таблице 1. Таблица 1 - Результаты количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона в разных образцах листьев лавра благородного в пересчете на абсолютно сухое сырье Место сбора Содержание, % ±SD Костунолид Дегидрокостуслактон г. Геленджик 0,99±0,05 0,11±0,01 г. Сухуми 0,99±0,05 0,26±0,01 Выводы Таким образом, разработана методика количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона в листьях лавра благородного с использованием ВЭЖХ. В ходе эксперимента оптимизированы условия экстракции изучаемых веществ. Установлено, что содержание костунолида и дегидрокостуслактона в листьях лавра различных мест сбора существенно не отличается и достигает 0,99 и 0,26% соответственно.
×

Об авторах

С. П Сенченко

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск

Email: asp_nauka@mail.ru

Н. М Насухова

Дагестанский государственный университет, г. Махачкала

Л. А Агова

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск

Д. А Коновалов

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск

Email: konovalov_da@pochta.ru

Список литературы

  1. Коновалов Д.А., Насухова Н.М. Cеcквитерпеновые лактоны листьев и плодов лавра благородного (Laurus nobilis L.) // Фармация и фармакология. 2014. №2. С. 23-33.
  2. Antimicrobial sesquiterpenoids from Laurus nobilis L. / N. Fukuyama, Ch. Ino, Y. Suzuki et al. // Natural Product Research. - 2011. - Vol. 25, N 14. - P. 1295-1303.
  3. Sesquiterpene Lactones Downregulate G2/M Cell Cycle Regulator Proteins and Affect the Invasive Potential of Human Soft Tissue Sarcoma / B. Lohberger, B. Rinner, N. Stuendl et al. // Cells PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8(6)/ - P. 1-9.
  4. Sesquiterpenes from the leaves of Laurus nobilis L. / E. Julianti, K. H. Jang, S. Lee et al. // Phytochemistry. - 2012. - Vol. 80. - P. 70-76.
  5. Sesquiterpenes (costunolide and zaluzanin D) isolated from laurel (Laurus nobilis L.) induce cell death and morphological change indicative of apoptotic chromatin condensation in leukemia HL-60 cells / H. Hibasami, Y. Yamada, H. Moteki et al. // International Journal of Molecular Medicine. - 2003. - Vol. 12. - P. 147-151.
  6. Synergistic antimycobacterial activities of sesquiterpene lactones from Laurus spp. / J. Luna-Herrera, M.C. Costa, H.G. Gonzalez et al. // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. - 2007. - Vol. 59, Is. 3. - P. 548-552.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Сенченко С.П., Насухова Н.М., Агова Л.А., Коновалов Д.А., 2015

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС 77 - 67428 от 13.10.2016.