RESEARCH OF PHENOLIC COMPLEX OF LEAVES OF MESPILUS GERMANICA L

Full Text

Успешное развитие экономики России связано и с рациональным использованием природного сырья, поиском новых источников биологически активных соединений (БАС). В настоящее время, когда идет стремительное развитие фармакологии и фармацевтической промышленности, внедрение новых лекарственных средств растительного происхождения остается актуальным. Возможность научно обосновать использование лекарственных растений появляется в результате изучения их химического состава, выделения БАС, экспериментального и клинического их исследования. Северный Кавказ, благодаря разнообразию природных условий, является одним из богатейших регионов нашей страны по видовому составу и запасам лекарственных растений. Одним из видов таких растений является Mespilus germanica L. - мушмула германская (кавказская) семейства Rosaceae [1]. Химический состав сырья мушмулы изучен недостаточно, однако лечебное действие народная медицина знает хорошо. В настоящее время сырье мушмулы Mespilus germanica L. применяется в народной медицине при диарее, дизентерии, болезнях почек, геморрое, бронхитах, при воспалительных заболеваниях, для лечения инфицированных ран. Плоды сортовых видов мушмулы в мире являются ценным пищевым продуктом. Однако как официнальное лекарственное растительное сырье оно не используется [2, 3]. Целью данной работы явилось изучение фенольных соединений мушмулы листьев. Объект нашего исследования - мушмулы листья, заготовленные с растений Mespilus germanica L. семейства Rosaceae в районах Кабардино-Балкарии и в Ботаническом саду Пятигорского медико-фармацевтического института. Качественный состав и количественное определение фенольных соединений в исследуемых образцах воздушно-сухого сырья определяли, используя качественные реакции, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Для качественного определения флавоноидов проводили реакции: цианидиновую пробу, с водным раствором железа (III) хлорида, водным раствором натрия гидроксида, раствором ацетата свинца; дубильных веществ: с раствором желатина, хинина сульфата, при добавлении бромной воды наблюдалось появление осадков, с кристаллами нитрата натрия в присутствии хлористоводородной кислоты - коричневое окрашивание, при кипячении со смесью формальдегида и кислоты хлористоводородной образовывался осадок (конденсированные дубильные вещества), а при добавлении к фильтрату 1% раствора железоаммониевых квасцов наблюдалось черно-синее окрашивание (гидролизуемые дубильные вещества). Для более точного определения использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Для этого мушмулы листья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм (ГОСТ 214-83). Измельченное сырье в количестве 2,0 г помещали в колбу вместимостью 200 мл, прибавляли 40 мл спирта этилового 70%. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение часа с момента закипания спиртоводной смеси. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем спиртом этиловым 70% до метки. Параллельно готовили серию растворов стандартных образцов фенольных соединений 0,05% в спирте этиловом 70%: рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, цикориевой кислоты, коричной кислоты, о-кумаровой, эпигаллокатехингаллата, салицина, гиперозида, гесперидина, апигенина, феруловой кислоты, умбеллиферона, эпикатехина, эскулетина, кумарина, дигидрокверцетина, кемпферола, метоксикумарина. По 50 мкл исследуемых растворов и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали. Для анализа фенольных соединений использовали высокоэффективный жидкостный хроматограф «GILSON-305» (Франция) с ручным инжектором RHEODYNE-7125 USA, результаты обрабатывали с помощью компьютерной программы «МультиХром» В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6×250 мм Kromasil С18, размер частиц 5 мкм. Подвижная фаза: метанол - вода - фосфорная кислота концентрированная, в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 70 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151, при длине волны 254 нм. Идентификацию разделенных веществ проводили путем сопоставления времен удерживания пиков, полученных на хроматограмме проб, с временами удерживания стандартных растворов. Оценку количественного соотношения идентифицированных веществ в исследуемых образцах проводили по площади пиков, используя метод внутренней нормализации. Хроматографические характеристики соединений, обнаруженных методом ВЭЖХ в исследованном извлечении, приведены в таблице 1. Таблица 1 - Идентификация фенольных соединений листьев мушмулы методом ВЭЖХ № Время мин ВысотаmV Площадь mV·сек ФО Содержание, % Название 1 3,741 106,04 3809,48 1,000 19,37 галловая кислота 2 4,348 66,88 2565,72 1,000 13,04 ЭГКгаллат 3 5,327 124,98 4769,38 1,000 24,25 хлорогеновая кислота 4 6,712 14,34 1108,78 1,000 5,64 эпикатехин 5 8,654 14,93 777,27 1,000 3,95 н/и* 6 10,23 15,64 1232,66 1,000 6,27 дигидрокверцетин 7 12,93 5,34 493,54 1,000 2,51 н/и 8 13,63 3,35 195,89 1,000 1,00 феруловая кислота 9 15,82 16,61 1222,83 1,000 6,22 лютеолин 10 18,67 4,38 481,49 1,000 2,45 кверцетин 11 32,17 6,74 966,75 1,000 4,92 н/и 12 38,5 3,50 414,49 1,000 2,11 н/и 13 40,92 9,30 1630,79 1,000 8,29 н/и *Примечание: н - неидентифицированное соединение Методом ВЭЖХ в водно-спиртовом (70%) извлечении мущмулы листьев обнаружено 13 соединений, из них идентифицировано 8 веществ фенольной природы: флавоноиды (кверцетин, дигидрокверцетин, лютеолин), гидроксикоричные кислоты (галловая, хлорогеновая, феруловая), полифенольные соединения (эпигаллокатехингаллат, эпикатехин). Содержание суммы идентифицированных фенольных соединений составило 78,24% от всех обнаруженных данным методом соединений (таблица 1, рис. 1). Рисунок 1 - Хроматограмма водно-спиртового извлечения листьев мушмулы Таким образом, в листьях мушмулы методом ВЭЖХ было обнаружено 13 соединений, из них идентифицировано 8 веществ фенольной природы: кверцетин, дигидрокверцетин, лютеолин, галловая, хлорогеновая, феруловая кислоты, эпигаллокатехингаллат, эпикатехин.

About the authors

N. N Vdovenko-Martynova

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute-a branch of Volgograd State Medical University

Email: martynovann@yandex.ru

References

Supplementary files