Биологические свойства рекомбинантного вируса гриппа A/H1N1pdm09, экспрессирующего фрагмент поверхностного белка Streptococcus pneumoniae

Полный текст

Список сокращений

ЖГВ ― живая гриппозная вакцина; ЭИД₅₀ ― 50 % эмбриональная инфекционная доза; НА ― гемагглютинин.

Обоснование

Инфекция Streptococcus pneumoniae ― наиболее частая причина постгриппозных осложнений [1]. Профилактику пневмококковых инфекций с 2007 г. успешно осуществляют с помощью многокомпонентных конъюгированных полисахаридных вакцин. Тем не менее серотипы пневмококков, не контролируемые вакцинами, начинают доминировать и вызывать заболевания, что требует постоянного повышения валентности пневмококковых вакцин [2]. Помимо бактериальных полисахаридов в качестве мишеней для разработки бактериальных вакцин используют такие факторы как защитные поверхностные белки бактерий, ферменты и адгезины [3, 4].

Для профилактики инфекций дыхательных путей желательно использовать мукозальные вакцины, введение которых обеспечивает формирование системного и местного иммунитета и позволяет быстро добиться резистентности к инфекции [5, 6]. В частности, штаммы живой гриппозной вакцины (ЖГВ) могут служить перспективной системой доставки целевых антигенов в организм, поскольку такая вакцина вводится интраназально и стимулирует различные звенья иммунитета как к целевому патогену, так и к вирусу гриппа ― актуальной инфекции, ежегодно наносящей существенный социально-экономический ущерб всем странам мира [7].

В целях разработки мукозальной вакцины на основе ЖГВ и поверхностных факторов патогенности S. pneumoniae был подготовлен рекомбинантный штамм ЖГВ подтипа А/H1N1pdm09, экспрессирующий фрагмент белка Spr1875, присоединенный гибким линкером к поверхностному белку вируса — гемагглютинину. Поверхностный белок S. pneumoniae Spr1875 (также известный как содержащий домен LysM) [8] является фактором вирулентности пневмококка. Было показано, что белок Spr1875 принимает участие во взаимодействии пневмококка с клетками микроглии, таким образом, возможно, играя определенную роль в развитии пневмококкового менингита [4]. Spr1875 проявляет иммуногенные свойства и экспрессируется на поверхности множества штаммов, принадлежащих к разным серотипам [8]. Фрагмент Spr1875 (Spr-69), соответствующий 69 аминокислотам (от 94 до 162 в исходном белке), лишен участка, расположенного в С-концевой части молекулы, содержащего предполагаемые иммунодоминантные эпитопы, которые не связаны с иммунопротекцией [8].

Цель работы — изучение биологических свойств рекомбинантного штамма ЖГВ подтипа А/H1N1pdm09, экспрессирующего фрагмент поверхностного белка S. pneumoniae.

Материалы и методы

Вирусы. Рекомбинантный штамм вируса гриппа на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) с поверхностными антигенами гемагглютинин (НА) и нейраминидаза от вируса гриппа А/Южная Африка/3626/13 (H1N1)pdm09, где молекула HA была модифицирована для экспрессии антигенного участка белка Spr1875 S. pneumoniae, был получен методом обратной генетики с использованием 8-плазмидной системы [9]. Вакцинный штамм ЖГВ А/17/Южная Африка/2013/01(H1N1)pdm09 с идентичным составом генома, но с немодифицированным НА, был использован в качестве контроля. Композиция генома анализируемых штаммов вирусов гриппа представлена в табл. 1

 

Таблица 1. Состав генома штаммов вирусов гриппа

Table 1. Genome composition of influenza virus strains

Обозначение штамма вируса гриппа	Состав вирусных генов
	гемагглютинин	нейраминидаза	PB2, PB1, PA, NP, M, NS
А/H1N1	А/Южная Африка/3626/13 (H1N1)pdm09	А/Южная Африка/3626/13 (H1N1)pdm09	А/Ленинград/134/17/57 (H2N2)
Н1-SpR	H1-SpR-69	А/Южная Африка/3626/13 (H1N1)pdm09	А/Ленинград/134/17/57 (H2N2)

 

Все вирусы были получены из коллекции отдела вирусологии им. А.А. Смородинцева ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины». Для экспериментального заражения лабораторных животных использовали пандемический вирус гриппа А/Калифорния/09/07 (H1N1)pdm09-MA (МА ― mouse-adapted, адаптированный к мышам), любезно предоставленный заведующей лабораторией химиотерапии вирусных инфекций ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России, канд. биол. наук А.А. Штро. Все вирусы культивировали в развивающихся куриных эмбрионах.

Молекулярно-генетический анализ. Секвенирование модифицированного участка НА вирусов гриппа осуществляли с использованием автоматического капиллярного секвенатора ABIPrism 3130xl (Applied Biosystems, США) и коммерческих наборов BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit v3.1, согласно инструкциям производителя. Выделение вирусной РНК проводили при помощи набора MagJET^тм Viral DNA and RNA Purification Kit (Thermo Scientific, США). Амплификацию генов перед секвенированием осуществляли одношаговым набором для полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией SuperScript III One-Step RT-PCR with Platinum Taq (Invitrogen, США) с помощью праймеров, перечисленных в табл. 2.

 

Таблица 2. Праймеры, используемые в исследовании участка гена гемагглютинина, содержащего бактериальный фрагмент Spr1875

Table 2. Primers used in the study of the hemagglutinin gene region containing the bacterial fragment Spr1875

Положение на геноме и направленность	Последовательность праймеров 5′ → 3′	Длина фрагмента со вставкой Spr1875, п. н.	Длина фрагмента гемагглютинина А/H1N1 без вставки, п. н.
F-18	GCAACAAAAATGAAGGCAATACTA	429	183
R-174	TAGTTTCCCGTTATGCTTGTC

 

Выделение амплифицированных фрагментов из агарозного геля после электрофоретического разделения проводили при помощи отечественных наборов для очистки ДНК (Диаэм, Россия). Множественное выравнивание нуклеотидных и аминокислотных последовательностей проводили с помощью программного обеспечения UGENE (Unipro, Россия) [10].

Изучение ростовых характеристик химерных вирусов при различных температурах инкубации в куриных эмбрионах. Для определения инфекционной активности предварительно выполняли ряд десятикратных разведений исследуемого вирусного материала, которыми заражали развивающиеся куриные эмбрионы. Эмбрионы инкубировали при оптимальной (33 °С), пониженной (до 25 °С) или повышенной (38‒40 °С) температуре в течение 48 (для 33‒40 °С) или 120 (для 25 °С) ч. 50 % эмбриональную инфекционную дозу (ЭИД₅₀) рассчитывали по методу Рида и Менча [11]. Инфекционную активность выражали в lgЭИД₅₀/мл. К температурочувствительным (имеющим ts-фенотип) относили вирусы, титр которых при повышенной температуре был на ≥5,0 lgЭИД₅₀ ниже, чем при оптимальной температуре. Степень холодовой адаптации вирусов определяли по разнице показателей репродукции при оптимальной (32 °С) и субоптимальной (25 °С) температуре. Если разница титров при оптимальной и пониженной до 25 °С температуре не превышала 3,0 lgЭИД₅₀, вирусы относили к холодоадаптированной группе (ca-фенотип).

Иммунизация животных. Группы из 20 мышей линии BALB/c, самки, средняя масса которых составляла 18 г, были интраназально иммунизированы химерным штаммом Н1-Spr или классическим штаммом ЖГВ А/H1N1pdm09 в дозе 100 50 % мышиных инфекционных доз, что соответствовало 6,0 lgЭИД₅₀ каждого вируса на одно животное. Контрольные мыши получали 50 мкл фосфатно-буферного раствора. Иммунизацию проводили двукратно с интервалом 14 дней. Эвтаназию проводили согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных»¹.

Определение репродукции вирусов в органах. Для оценки вирусной репродукции на 3-и сутки после иммунизации у пяти мышей из группы забирали легкие и носовые ходы, которые затем гомогенизировали индивидуально в 1 мл холодного фосфатно-буферного раствора c помощью гомогенизатора TissueLyser LT (QIAGEN, США). Гомогенаты центрифугировали при 10 000 об/мин для удаления твердых примесей и хранили при ‒70 °С. Инфекционный титр вирусов в пробах определяли титрованием на 10-дневных куриных эмбрионах и выражали в lgЭИД₅₀/мл. Вычисления проводили по методу Рида и Менча [11].

Изучение иммуногенности. Уровни сывороточных IgG антител к вирусу гриппа определяли с помощью иммуноферментного анализа с использованием 96-луночных планшетов с высокой сорбцией (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, США), предварительно покрытых 20 агглютинирующими единицами вируса А/Калифорния/07/09 (H1N1)pdm09. Для выявления антител к пневмококковой вставке 96-луночные планшеты сенсибилизировали рекомбинантным пептидом PSP (2 мкг/мл), содержащим пептидную последовательность Spr1875. Белок PSP был любезно предоставлен отделом молекулярной микробиологии ФГБНУ «ИЭМ». Планшеты инкубировали в течение ночи при 4 °С, а затем проводили иммуноферментный анализ [12]. За титр антител принимали величину, обратную конечному разведению сыворотки, дающему оптическую плотность при длине волны 490 нм, превышающую среднюю оптическую плотность в контрольных образцах более чем на 3 стандартных отклонения.

Экспериментальное заражение животных. Для оценки защитного действия иммунизации рекомбинантным штаммом против гриппозной инфекции животным вводили интраназально адаптированный к мышам вирус гриппа А/Калифорния/07/09 (H1N1)pdm09-МА в дозе 3 lgЭИД₅₀ на 21-й день после повторной иммунизации. При изучении защитного действия иммунизации учитывали вес мышей на протяжении 8 дней после инфекции и определяли репродукцию инфекционного вируса в легких (n = 3) на 3-й день после заражения по методике, описанной выше.

Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку проводили с использованием пакета программ GraphPad, а также программы Microsoft Excel. Для представления полученных данных использовали следующие показатели описательной статистики: среднее арифметическое m, стандартное отклонение σ, среднегеометрические титры. При сравнении выборок в случае невыполнения предпосылок о нормальности распределения зависимой переменной внутри каждой группы и однородности дисперсии применяли непараметрические критерии (Манна ‒ Уитни). Проверяемые критериями нулевые гипотезы отвергали при p < 0,05.

Результаты и обсуждение

Молекулярно-генетическая характеристика рекомбинантного штамма Н1-Spr. Рекомбинантный штамм Н1-Spr, кодирующий фрагмент белка Spr1895 с N-конца молекулы гемагглютинина вируса гриппа, был получен методами обратной генетики и накоплен в развивающихся куриных эмбрионах. Для подтверждения наличия чужеродной вставки в химерном вирусе был проведен анализ с помощью полимеразной цепной реакции участка молекулы НА с последующим секвенированием амплифицированного фрагмента. На рис. 1 видно, что длина амплифицированного фрагмента штамма Н1-Spr согласуется с длиной искомого фрагмента со вставкой Spr1895 (429 п. н.), при этом секвенирование подтвердило идентичность бактериальной вставки в молекуле НА.

 

Рис. 1. Результаты молекулярно-генетического анализа Н1-Spr: а ― разделение амплифицированных фрагментов в агарозном геле; b ― аминокислотная последовательность встроенного в гемагглютинин бактериального фрагмента

Fig. 1. Results of molecular genetic analysis of H1-Spr: a, separation of amplified fragments in agarose gel; b, amino acid sequence of the bacterial fragment integrated into hemagglutinin

 

Инфекционная активность вирусов гриппа в развивающихся куриных эмбрионах. В результате титрования вирусов А/H1N1 и H1-Spr на куриных эмбрионах определена ЭИД₅₀ вируса гриппа. Полученные результаты представлены на рис. 2. Рекомбинантный штамм H1-Spr характеризуется сниженной репродукцией на куриных эмбрионах (5,5 lgЭИД₅₀/мл) по сравнению с вакцинным штаммом А/H1N1 (8,4 lgЭИД₅₀/мл), что указывает на влияние встроенного фрагмента на репликативные свойства рекомбинантного вируса гриппа. При этом оба изученных вируса характеризуются температурочувствительным фенотипом, свойственным вакцинным штаммам ЖГВ, и холодоадаптированным фенотипом (рис. 2).

 

Рис. 2. Репликативная активность штаммов вирусов гриппа в развивающихся куриных эмбрионах при различных температурах инкубации. * p < 0,05

Fig. 2. Replication activity of influenza virus strains in developing chicken embryos at different incubation temperatures. * p < 0.05

 

Репродукция вакцинных штаммов на экспериментальных животных. Результаты изучения репродуктивной активности вирусов в легких и носовых ходах мышей представлены на рис. 3. Рекомбинантный штамм H1-Spr демонстрировал сниженную репродукцию в легких и не репродуцировался в носовых ходах мышей по сравнению с классическим штаммом ЖГВ (рис. 3).

 

Рис. 3. Репродукция вакцинных вирусов гриппа в верхних и нижних дыхательных путях мышей (n = 5 в группе). ** p < 0,01. Пунктирной линией обозначен порог чувствительности метода

Fig. 3. Reproduction of influenza vaccine viruses in the upper and lower respiratory tract of mice (n = 5 per group). ** p < 0.01. The dotted line indicates the sensitivity threshold of the method

 

Иммуногенность вакцинных штаммов в отношении вируса гриппа. Несмотря на ограниченную репродукцию в дыхательных путях мышей, среднегеометрические титры сывороточных IgG к вирусу гриппа А/Южная Африка/3626/13 (H1N1) после иммунизации рекомбинантным вирусом H1-Spr и немодифицированным вакцинным штаммом статистически значимо отличались от этих показателей в контрольной группе через 14 и 28 дней после первой иммунизации (рис. 4, а).

 

Рис. 4. Результаты изучения иммуногенности: а ― сывороточные IgG к цельному вирусу А/Южная Африка/3626/13 (H1N1), иммуноферментный анализ (n = 5 в группе) на 14 и 28-й день после первой дозы вакцины; b ― сывороточные IgG к рекомбинантному белку PSP на 14-й день после первой иммунизации. * р < 0,05 в сравнении с неиммунизированными животными (ФБ)

Fig. 4. Results of the immunogenicity study: a, serum IgG to the whole virus A/South Africa/3626/13 (H1N1), enzyme-linked immunosorbent assay (n = 5 per group) on Day 14 and Day 28 after the first vaccination; b, serum IgG to the recombinant PSP protein on Day 14 after the first vaccination. * р < 0.05 compared with unvaccinated animals (PBS)

 

Через 14 дней после первой иммунизации в крови мышей обнаружено статистически значимое повышение IgG к рекомбинантному белку PSP (рис. 4, b) по сравнению с контрольной группой.

На рис. 5 представлены результаты изучения защитного действия иммунизации против заражения вирусом гриппа A/Калифорния/07/09 (H1N1)pdm09-МА через 14 дней после повторной иммунизации. По представленным данным видно, что мыши в контрольной группе, получившие фосфатно-буферный раствор, с первого дня наблюдения демонстрировали снижение веса, который продолжали терять в конце периода наблюдения. Иммунизация вакцинным штаммом A/H1N1 приводила к положительной динамике увеличения веса после второго дня наблюдений, выход на плато начался с 3-го дня, когда вес перестал существенно увеличиваться или уменьшаться. Для группы H1-Spr тенденция была менее четкой, зафиксировано уменьшение веса мышей со второго по четвертый день, после чего наблюдалась положительная динамика увеличения веса до конца периода наблюдения. В группе животных, получивших фосфатно-буферный раствор (ФБ), наблюдали наиболее высокую репродукцию заражающего вируса в легких ― до 10^7,7 ЭИД₅₀/мл, при этом в группах, иммунизированных вакцинным штаммом А/H1N1 и рекомбинантным вирусом H1-Spr, показано статистически значимое снижение титров инфекционного вируса по сравнению с неиммунизированными животными до 10^4,9 и 10^5,0 ЭИД₅₀/мл соответственно.

 

Рис. 5. Результаты изучения защитного действия иммунизации рекомбинантным вирусом H1-Spr: a ― динамика изменения средней массы тела мышей после экспериментального заражения (n = 10); b ― репродукция заражающего вируса A/Калифорния/07/09 (H1N1)pdm09-МА в легких мышей на 3-й день после экспериментального заражения (n = 3). ФБ — неиммунизированные животные

Fig. 5. Results of the study of the protective effect of immunization with the recombinant H1-Spr virus: a, changes in the average weight of mice after experimental infection (n = 10); b, reproduction of the infecting virus A/California/07/09 (H1N1)pdm09-MA in the lungs of mice on Day 3 after experimental infection (n = 3). PBS, unvaccinated animals

 

Заключение

Таким образом, в настоящей работе впервые были изучены биологические свойства рекомбинантного штамма вируса гриппа на основе ЖГВ подтипа А/H1N1pdm09, экспрессирующего фрагмент белка S. pneumoniae Spr1875. Рекомбинантный штамм способен к росту в развивающихся куриных эмбрионах и сохранил температурочувствительный фенотип, характерный для вакцинных вирусов. На мышах химерная вакцина с гемагглютинином H1-Spr-69 демонстрировала ограниченную репродуктивную активность по сравнению с исходным вакцинным вирусом A/H1N1, несмотря на это рекомбинантный штамм H1-Spr стимулировал выработку вирус-специфических сывороточных IgG антител на том же уровне, что и классический штамм ЖГВ A/H1N1pdm09, а также вызывал прирост IgG к участку вставки пневмококкового белка. Вакцинный штамм A/H1N1 более эффективно защищал мышей от инфекции адаптированным к мышам вирусом гриппа А/Калифорния/07/09 (H1N1)pdm09 по сравнению с химерным вирусом H1-Spr. При экспериментальном инфицировании показано статистически значимое снижение титров инфекционного вируса в группах мышей, иммунизированных вакцинным штаммом А/H1N1pdm09 и рекомбинантым вирусом H1-Spr-69, по сравнению с неиммунизированными животными. В работе отсутствуют данные о формировании подклассов антител к бактериальному антигену, что является ограничением. Однако в раннее опубликованном исследовании, посвященном защитному действию комбинированной вирус-бактериальной вакцины на основе ЖГВ и рекомбинантных полипептидов стрептококков группы В, было показано, что интраназальное введение мышам бактериальных полипептидов вызывало преимущественно формирование IgG2a к фрагменту иммунодоминантного белка стрептококков группы В (Р6), но при введении смеси ЖГВ и бактериальных полипептидов среди антител к P6 превалировали IgG1 [13]. При этом в группе мышей, иммунизированных комбинированной вирус-бактериальной вакциной, наблюдалась наиболее выраженная защита против постгриппозной бактериальной пневмонии по сравнению с мышами из других вакцинных групп [13]. Необходимы дальнейшие исследования для определения факторов адаптивного иммунитета, необходимых для эффективной вакцинопрофилактики постгриппозной пневмококковой пневмонии, включая подклассы антител к бактериальным антигенам в составе вирусного вектора.

Вирусы гриппа стали перспективными кандидатами для создания рекомбинантных вакцин после того, как были разработаны системы обратной генетики для сборки вирусов с минус-нитевым РНК геномом [14]. Холодоадаптированные вирусы гриппа, применяемые в качестве вакцинных штаммов для ЖГВ, ― безопасные и эффективные кандидаты для создания векторных вакцин [7]. Особого внимания заслуживает то, что при использовании вирусных векторов гриппа можно индуцировать иммунитет не только против чужеродных антигенов, но и против вируса гриппа, используемого в качестве основы вакцины. Поскольку в репликации вируса гриппа нет цикла ДНК, отсутствует риск интеграции вирусных последовательностей в геном иммунизированных реципиентов. Помимо этого, высокая антигенная изменчивость вирусов гриппа, приводящая к возникновению множества антигенных вариантов, позволяет избегать влияния предсуществующего иммунитета к вирусному вектору у вакцинируемых. И наконец, химерные вирусы гриппа при интраназальном введении способны вызывать локальный иммунный ответ, который важен при инфицировании патогенами, проникающими через верхние дыхательные пути.

Одно из возможных ограничений векторов вируса гриппа ― небольшая емкость генома. Возможность получения стабильных вирусов гриппа, содержащих вставки длиной более 1000 нуклеотидов, ― вопрос, требующий дальнейшего исследования [15]. Вставка фрагментов чужеродных генов в сегменты генов NA, NS1 или полимеразных субъединиц может приводить к снижению аттенуации/репликации [14]. В нашем случае бактериальный фрагмент был встроен в молекулу гемагглютинина, но это также привело к снижению репродукции рекомбинантного вируса при инкубации как при оптимальной, так и при пониженной температуре. Ранее были изучены два рекомбинантных вируса (H7-ScaAB-85 и H7-ScaAB-141) на основе вакцинного штамма ЖГВ A/Ануи/1/2013 (H7N9) [9] с рекомбинантным НА, включающим фрагмент липопротеина ScaAB Streptococcus agalactiae. Несмотря на то что все внутренние и неструктурные белки рекомбинантных штаммов принадлежали холодоадаптированному штамму-донору А/Ленинград/134/17/57(H2N2), внедрение чужеродных бактериальных антигенов в НА вакцинного штамма 17/H7N9 независимо от размера вставки пептида приводило к потере холодоадаптированного фенотипа [9]. Известно, что за адаптацию к пониженной температуре отвечают гены полимеразного комплекса вируса гриппа [16]. Мы предположили, что выявленное в настоящей работе снижение репродуктивной активности при оптимальной и пониженной температуре может быть связано с конформационными изменениями HA, которые могут стерически препятствовать присоединению химерных вирусов к рецепторам на чувствительных клетках, тем самым уменьшая множественность инфекции. Это предположение требует проверки и проведения дальнейших исследований.

Дополнительная информация

Источник финансирования. Работа выполнена за счет бюджетных средств ФГБНУ «ИЭМ» в рамках темы НИР FGWG-2022-0001.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Этический комитет. Работа одобрена локальным этическим комитетом ФГБНУ «ИЭМ», протокол № 1/21 от 28 января 2021 г.

Вклад авторов. Все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией.

Наибольший вклад распределен следующим образом: Ю.А. Дешева — план исследования, анализ полученных данных, написание текста, внесение окончательной правки; И.Н. Исакова-Сивак — разработка рекомбинантных вирусов, редактирование текста; А.Р. Рекстин, И.В. Майорова, Н.В. Копылова — постановка экспериментов на мышах; Д.С. Петрачкова — сбор и обработка материалов, обзор литературы, правки; А.С. Матушкина — разработка рекомбинантных вирусов; Г.Ф. Леонтьева, Т.А. Крамская, О.С. Коптева, Т.А. Котомина — молекулярно-генетический анализ; П.А. Кударь — постановка серологических тестов.

Additional information

Funding source. The work was carried out at the expense of budgetary funds of the Institute of Experimental Medicine within the framework of the research topic FGWG-2022-0001.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

Ethics approval. The work was approved by the local ethics committee of the Institute of Experimental Medicine, Protocol No. 1/21 dated January 28, 2021.

Author contribution. All authors made a substantial contribution to the conception of the study, acquisition, analysis, interpretation of data for the work, drafting and revising the article, final approval of the version to be published and agree to be accountable for all aspects of the study.

Personal contribution of each author: Yu.A. Desheva, designed the study, analyzed the data, wrote the manuscript, and made final corrections; I.N. Isakova-Sivak, developed recombinant viruses and edited the text; A.R. Rekstin, I.V. Mayorova, and N.V. Kopylova, performed experiments on mice; D.S. Petrachkova, collected and processed materials, reviewed literature, and edited the text; A.S. Matushkina, developed recombinant viruses; G.F. Leontieva, T.A. Kramskaya, O.S. Kopteva, and T.A. Kotomina, conducted a molecular genetic analysis; P.A. Kudar, performed serological tests.

 

¹ Директива 2010/63/EU Европейского парламента и совета европейского союза по охране животных, используемых в научных целях // Rus-LASA «НП объединение специалистов по работе с лабораторными животными», рабочая группа по переводам и изданию тематической литературы. Санкт-Петербург, 2012. 48 с.

Об авторах

Юлия Андреевна Дешева

Институт экспериментальной медицины; Санкт-Петербургский государственный университет

Email: desheva@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-9794-3520
SPIN-код: 4881-3786

д-р мед. наук, профессор кафедры фундаментальных проблем медицины и медицинских технологий; ведущий научный сотрудник отдела вирусологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12; Санкт-Петербург

Андрей Роальдович Рекстин

Институт экспериментальной медицины

Email: arekstin@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-2156-1635
SPIN-код: 5359-1516

канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник отдела вирусологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Ирина Владимировна Майорова

Институт экспериментальной медицины

Email: mayorovairina0248@gmail.com
ORCID iD: 0009-0009-5130-5000

лаборант-исследователь отдела общей вирусологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Нина Вадимовна Копылова

Институт экспериментальной медицины

Email: KNINA5485@gmail.com
ORCID iD: 0009-0004-1963-0333

лаборант-исследователь отдела общей вирусологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Ольга Сергеевна Коптева

Институт экспериментальной медицины; Санкт-Петербургский государственный университет

Email: olga.s.kopteva@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2645-3433
SPIN-код: 7630-3067

научный сотрудник научного центра мирового уровня «Центр персонализированной медицины», аспирант

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12; Санкт-Петербург

Дарья Сергеевна Петрачкова

Институт экспериментальной медицины

Автор, ответственный за переписку.
Email: ya.dashook@ya.ru
ORCID iD: 0009-0004-0045-4886
SPIN-код: 8464-2810

лаборант-исследователь отдела общей вирусологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Полина Андреевна Кударь

Институт экспериментальной медицины

Email: polina6226@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3342-5828
SPIN-код: 9211-0537

младший научный сотрудник научного центра мирового уровня «Центр персонализированной медицины»

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Татьяна Сергеевна Котомина

Институт экспериментальной медицины

Email: tstretiak@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-9999-089X
SPIN-код: 7613-9715

научный сотрудник лаборатории иммунологии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии им. А.А. Смородинцева

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Анастасия Сергеевна Матушкина

Институт экспериментальной медицины

Email: anastasiia.evsina@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-9045-0683
SPIN-код: 5437-8402

научный сотрудник отдела вирусологии им. А.А. Смородинцева

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Галина Федоровна Леонтьева

Институт экспериментальной медицины

Email: galeonte@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-9876-6594
SPIN-код: 5204-9252

канд. биол. наук, старший научный сотрудник научного центра мирового уровня «Центр персонализированной медицины», старший научный сотрудник отдела молекулярной микробиологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Татьяна Анатольевна Крамская

Институт экспериментальной медицины

Email: Tatyana.kramskaya@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-9408-6647
SPIN-код: 4529-3260

кандидат биологических наук, стаpший научный сотрудник отдела молекулярной микробиологии

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Ирина Николаевна Исакова-Сивак

Институт экспериментальной медицины

Email: isakova.sivak@iemspb.ru
ORCID iD: 0000-0002-2801-1508
SPIN-код: 3469-3600

д-р биол. наук, заведующая лабораторией иммунологии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии им. А.А. Смородинцева

Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Список литературы

Дополнительные файлы