Целестиновый синий B — зонд для регистрации продукции хлорноватистой кислоты и HOCL-модифицированных белков

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель исследования — изучить продукцию хлорноватистой кислоты (HOCl) и ее производных, обусловленную активностью миелопероксидазы нейтрофилов крови человека, флуоресцентным методом с использованием целестинового синего B.

Материалы и методы. Нейтрофилы выделяли из венозной крови здоровых доноров. В качестве агонистов использовали форбол 12-миристат 13-ацетат, N-формил-метионил-лейцил-фенилаланин, лектины растительного происхождения, белки, модифицированные гипогалоидными кислотами. В качестве ингибиторов активности миелопероксидазы нейтрофилов и/или перехватчиков HOCl использовали N-ацетилцистеин, гидразид 4-аминобензойной кислоты, изониазид и церулоплазмин.

Результаты. В ходе исследований с применением широкого спектра агонистов и ингибиторов активности миелопероксидазы нейтрофилов и/или перехватчиков HOCl было доказано, что целестиновый синий B окисляется в суспензии стимулированных нейтрофилов в результате продукции ими HOCl и ее производных, обусловленной активностью миелопероксидазы. Окисление целестинового синего B наблюдалось и HOCl-модифицированным сывороточным альбумином человека (HSA-Cl). Моноклональные антитела класса IgM против HSA-Cl ингибировали окисление целестинового синего B в растворе модифицированного белка.

Заключение. Разработанный метод позволяет с высокой чувствительностью анализировать HOCl-модифицированные белки (хлорамины и др.), исследовать влияние различных агонистов и лекарственных препаратов на респираторный взрыв нейтрофилов, экзоцитоз и активность миелопероксидазы.

Полный текст

Введение

Хлорноватистая кислота (HOCl) образуется в живых организмах из пероксида водорода (H2O2) и хлорид-ионов в реакции, катализируемой гем-содержащим ферментом азурофильных гранул нейтрофилов — миелопероксидазой (MPO). Критический этап активации нейтрофилов — сборка NADPH-оксидазного комплекса в ответ на провоспалительный стимул, который обеспечивает так называемый «кислородный (респираторный) взрыв». Его результатом является синтез нейтрофилами супероксидного анион-радикала (•О2–), который спонтанно либо с участием ферментов дисмутирует до H2O2 (субстрата MPO) для синтеза HOCl [1].

HOCl представляет собой мощный антимикробный агент, который играет ключевую роль в иммунной системе, способствуя уничтожению патогенов [1]. Однако чрезмерная продукция HOCl сопровождается модификацией белков, липидов, нуклеиновых кислот, приводит к развитию галогенирующего стресса, который ассоциирован с возникновением многочисленных заболеваний [2]. Так, участие MPO и/или наличие HOCl-модифицированных белков, аминокислот, липидов, нуклеотидов и других производных характерно для таких заболеваний, как атеросклероз, астма, сепсис, артрит, метаболический синдром, болезни Альцгеймера и Паркинсона, некоторые виды рака и др. [2, 3].

Вследствие высокой биологической активности MPO разработка высокочувствительных и селективных зондов для регистрации продукции HOCl остается важной задачей в биологии и медицине [4]. При этом флуоресцентный метод с использованием чувствительных молекулярных зондов признан одним из самых мощных инструментов для обнаружения малых количеств HOCl и ее производных в биологических образцах благодаря сочетанию высокой чувствительности, простоты и эффективности [5].

Однако прямая регистрация продукции HOCl в биологических системах затруднена из-за ее высокой реакционной способности. По этой причине для регистрации HOCl используют перехватчик — таурин. Применяемые для регистрации хлораминов таурина ароматические тиолы не позволяют эффективно определять образование хлораминов при нейтральном рН, а также могут служить субстратом пероксидазного цикла MPO [6]. Недавно было показано, что перспективным красителем для регистрации HOCl является целестиновый синий В (CB), который с высокой скоростью образует гликоль розовой окраски, характеризующийся максимумом флуоресценции при 590 нм в случае возбуждения светом с длиной волны 460 нм [7, 8]. В данной работе флуоресцентным методом с использованием CB было изучено влияние стимуляторов различной природы на продукцию HOCl и HOCl-модифицированных белков нейтрофилами.

Цель данной работы состояла в изучении продукции HOCl и ее производных нейтрофилами крови человека с использованием CB в качестве флуоресцентного хемосенсора (тип turn-on).

Материалы и методы

В работе применяли: цитрат натрия, форбол-12-миристат-13-ацетат (PMA), N-формил-метионил-лейцил-фенилаланин (fMLP), целестиновый синий В (CВ), гидразид 4-аминобензойной кислоты (4-ABAH), гистопак-1077, сывороточный альбумин человека (HSA) фирмы Sigma-Aldrich (США); декстран Т70 фирмы Roth (Германия); лектины фирмы НПК Лектинотест (Украина). Остальные реактивы получены от заводов «Реахим» (Россия) и Белмедпрепараты (Беларусь).

Перечень используемых лектинов растений: WGA (Triticum vulgaris агглютинин) — GlcNAc-специфичный лектин зародышей пшеницы; CABA (Caragana arborescens агглютинин) — лектин караганы древовидной, специфичный к остаткам GalNAc; Con A (Canavalia ensiformis агглютинин) — маннозосвязывающий лектин семян канавалии мечевидной; галактозоспецифичный лектин сои SBA (Glycine hispida агглютинин); галактозоспецифичный лектин омелы белой VAA (Viscum Album агглютинин), а также GalNAc/галактозоспецифичный лектин семян фасоли обыкновенной PHA-L (Phaseolus vulgaris агглютинин).

Венозную кровь здоровых доноров, стабилизированную 109 мМ раствором цитрата натрия (9 : 1, v/v), получали из Республиканского научно-практического центра гематологии и медицинских биотехнологий (Минск, Беларусь). 20 мл крови смешивали с 6 % раствором декстрана Т70 (5 : 1, v/v) и осаждали эритроциты в течение 40 мин при комнатной температуре. Слой обогащенной лейкоцитами плазмы собирали в пробирки и центрифугировали в течение 7 мин при 400 g. Далее примесь эритроцитов удаляли гипотоническим лизисом, добавляя к осадку клеток сначала 3 мл охлажденного 0,2 % NaCl, а затем восстанавливали изотоничность путем добавления 3 мл 1,6 % NaCl, содержащего 20 мг/мл D-глюкозы. Полученную суспензию центрифугировали в течение 7 мин при 400 g. Если смесь клеток содержала эритроциты, гипотонический лизис проводили повторно. Осадок клеток ресуспендировали в 6 мл фосфатно-солевого буфера (PBS), содержащего 10 мМ Na2HPO4/KH2PO4, 137 мМ NaCl и 2,7 мМ KCl (рН 7,35), наслаивали на 4 мл гистопака-1077 и центрифугировали в течение 10 мин при 400 g при комнатной температуре. Полученный осадок нейтрофилов отмывали PBS, содержащим 2 мг/мл D-глюкозы, и хранили при 4 °С в течение нескольких часов. Доля нейтрофилов в клеточной суспензии составляла 97–98 %, а доля жизнеспособных клеток по тесту с трипановым синим — не менее 96 %.

Продукцию HOCl и ее производных оценивали флуоресцентным методом с использованием СВ. К 1 мл суспензии нейтрофилов (106 кл/мл в PBS, содержащем 1 мМ CaCl2, 0,5 мМ MgCl2, 20 мМ таурина) добавляли 20 мкМ СВ, активатор и при необходимости 2,5 мкг/мл цитохалазина b (cyth b). Кинетику окисления СВ регистрировали по увеличению интенсивности флуоресценции (длина волны возбуждения — 460 нм, длина волны регистрации — 590 нм) на спектрофлуориметре СМ 2203 (СОЛАР, Минск, Беларусь) при 37 °С и постоянном перемешивании. Для характеристики продукции HOCl и образования хлорированных производных определяли скорость окисления СВ (v) — как тангенс угла наклона начального линейного участка кривой изменения интенсивности флуоресценции и амплитуду реакции (h15) — изменение интенсивности флуоресценции по сравнению с фоновым уровнем через 15 мин после начала активации.

Препарат церулоплазмина (CP) выделяли из цитратной плазмы при помощи ионообменной хроматографии (UNOsphereTMQ, Bio-Rad, США) и аффинной хроматографии (неомицин-агароза). Следы протромбина и тромбина удаляли путем фильтрации препарата через колонки с гепарин- и бензамидин-агарозой [9].

HSA модифицировали при комнатной температуре в течение 1,5–2 ч [10]. 30 мМ HOCl добавляли к раствору HSA (0,3 мМ) в PBS (на 1 молекулу белка приходится 100 молекул HOCl). Отсутствие непрореагировавшей HOCl в растворе модифицированного сывороточного альбумина человека (HSA-Cl) оценивали флуоресцентным методом с использованием скополетина [11].

Для получения моноклональных антител против HSA-Cl применяли метод Мильштейна – Келлера [12]. Для отбора гибридом выбирали клоны, продуцировавшие в культуральную среду антитела против HSA-Cl при негативной реакции с немодифицированным HSA. Отобранный клон 1H2 (класс антител IgM) инокулировали сенсибилизированным пристаном мышам (F2-гибриды BALB/c × DBA, питомник Рапполово) и через 2 нед. собирали асцитную жидкость. Грубую очистку IgM проводили при криопреципитации, а затем фракционировали антитела с помощью гель-фильтрации на колонке с Sephacryl S-400 HR, уравновешенной PBS. Свойства полученных антител проверяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием HSA-Cl.

Статистическую и графическую обработку данных выполняли в пакете программ OriginPro 2016. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. Наблюдаемые эффекты считали достоверными при p < 0,05, рассчитанной по критерию Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

На первом этапе исследования был проведен анализ влияния таких агонистов, как форболовый эфир PMA, а также хемотаксический пептид fMLP (в отсутствие и в присутствии cyth b) на изменение параметров флуоресцентного ответа нейтрофилов с использованием СВ. Полученные данные представлены на рис. 1. Видно, что окисление красителя происходит при активации нейтрофилов PMA и в системе fMLP + cyth b, но не в случае fMLP без cyth b. Следовательно, окисление СВ происходит вследствие продукции HOCl и образования ее производных. Так, PMA напрямую активирует протеинкиназу С, что ведет к сборке и активации NADPH-оксидазы нейтрофилов [13] и дегрануляции азурофильных гранул, содержащих MPO [14]. При этом хемотаксический пептид fMLP взаимодействует с рецепторами, ассоциированными с G-белками, и, запуская каскад реакций через Са2+-зависимый механизм, инициирует сборку и активацию NADPH-оксидазы [15], не влияя на дегрануляцию азурофильных гранул. Для экзоцитоза MPO при активации fMLP необходима предварительная инкубация нейтрофилов с cyth b, который препятствует полимеризации F-актина [16].

 

Рис. 1. Типичные кинетические кривые окисления целестинового синего B (a) и характеризующие данный процесс параметры (b) в суспензии нейтрофилов, активированных форболовым эфиром (PMA, 50 нМ) либо хемотаксическим пептидом (fMLP, 1 мкМ) в отсутствие и в присутствии цитохалазина b (cyth b, 2,5 мг/л)

Fig. 1. Typical kinetic curves of CB oxidation (a) and parameters characterizing this process (b) in suspension of neutrophils activated by phorbol ester (PMA, 50 nM) or chemotactic peptide (fMLP, 1 μM) in the absence and presence of cytochalasin b (cyth b, 2.5 mg/L)

 

Процесс окисления СВ в суспензии нейтрофилов, активированных PMA, исследовали в присутствии ингибиторов MPO и скавенджеров HOCl: гидразида 4-аминобензойной кислоты (4-ABAH), изониазида (INH), N-ацетилцистеина (NAC) и CP (табл. 1).

 

Таблица 1 / Table 1

Влияние ингибиторов миелопероксидазы и скавенджеров хлорноватистой кислоты на параметры окисления целестинового синего B в суспензии нейтрофилов, активированных форбол-12-миристат-13-ацетатом (50 нМ)

The effect of MPO inhibitors and scavengers of HOCl on parameters of CB oxidation in suspension of PMA-stimulated neutrophils (50 nM)

Вещество

Концентрация, мкМ

v, % контроля

h15, % контроля

4-ABAH

50

56 ± 7*

57 ± 8*

INH

500

66 ± 8*

66 ± 7*

NAC

500

56 ± 1*

56 ± 2*

CP

1,1

0**

0**

Примечание. За 100 % принимали v и h15 в суспензии PMA-стимулированных клеток без добавления ингибиторов; * p < 0,05; ** сигнал не превышал фонового уровня.

 

Действие 4-ABAH связано с медленной необратимой ковалентной инактивацией соединения I MPO [17]. INH, структурный аналог 4-ABAH, конкурирует с Cl– за окисление в активном центре соединения I MPO с последующим функционированием фермента по путям, включающим соединение II, гем в двухвалентном состоянии и соединение III, которые выводят фермент из цикла галогенирования [18].

CP, медь-содержащий белок плазмы крови, также ингибирует хлорирующую активность MPO за счет образования комплекса, блокируя активный центр фермента [7]. Более того, даже при модификации продуктами катализа MPO (HOCl или HOBr) ингибирующая активность CP сохраняется, в том числе по отношению к подавлению активности нейтрофилов [19, 20]. Из табл. 1 видно, что 4-ABAH, INH и CP приводили к снижению параметров окисления СВ в суспензии РМА-активированных нейтрофилов, что свидетельствует об уменьшении продукции HOCl.

NAC, известный антиоксидант, быстро (k > 108 M–1c–1) окисляется HOCl [21], что отражается и на уменьшении параметров окисления СВ (см. табл. 1). Таким образом, окисление СВ при активации нейтрофилов PMA зависит от высвобождения и активности MPO, а также от наличия перехватчиков HOCl.

Лектины — белки или гликопротеины, обладающие по крайней мере одним некаталитическим доменом, который обратимо и специфически связывает моно- или олигосахариды [22]. К настоящему времени лектины обнаружены во всех живых организмах, однако наибольшее применение получили лектины растительного и животного происхождения. Лектины играют важную роль в различных процессах: межклеточной адгезии, клеточной сигнализации, взаимодействии между организмом и патогеном, а потому являются потенциальными лекарственными препаратами [23].

Ранее было показано, что многие лектины растительного происхождения способны активировать продукцию •О2ˉ и Н2О2 нейтрофилами, а также экзоцитоз содержимого гранул нейтрофилов [24, 25]. В данной работе было исследовано влияние лектинов растительного происхождения WGA, CABA, Con A, PHA-L, SBA (100 мг/л) и VAA (50 мг/л) на продукцию HOCl и ее производных нейтрофилами с использованием CB. Об образовании HOCl и, соответственно, высвобождении MPO судили по изменению интенсивности флуоресценции раствора вследствие окисления СВ (h15, рис. 2).

 

Рис. 2. Влияние лектинов зародышей пшеницы (WGA, 100 мг/л), семян канавалии мечевидной (Con A, 100 мг/л), семян фасоли обыкновенной (PHA-L, 100 мг/л), караганы древовидной (CABA, 100 мг/л), омелы белой (VAA, 50 мг/л), сои (SBA, 100 мг/л) в отсутствие и в присутствии цитохалазина b (cyth b, 2,5 мг/л) на окисление целестинового синего B в суспензии нейтрофилов. * р < 0,05

Fig. 2. The effect of lectins from wheat germ (WGA, 100 mg/L), jack bean seeds (Con A, 100 mg/L), bean seeds (PHA-L, 100 mg/L), caragana tree (CABA, 100 mg/L), mistletoe (VAA, 50 mg/L), soy (SBA, 100 mg/L) in the absence and in the presence of cytochalasin b (cyth b, 2.5 mg/L) on the CB oxidation in neutrophils suspension. * p < 0.05

 

Как видно из приведенных данных, лектины SBA и VAA в используемых концентрациях не влияли на продукцию HOCl, в то время как WGA, CABA, Con A и PHA-L стимулировали продукцию HOCl нейтрофилами. Следует отметить, что все исследуемые лектины вызывали активацию NADPH-оксидазы [26], однако дегрануляция нейтрофилов наблюдалась лишь в присутствии cyth b, что хорошо согласуется с данными литературы [16, 26, 27].

Галогенированные молекулы можно отнести к новому классу регуляторов воспаления, поскольку они способны активировать и/или праймировать нейтрофилы по принципу положительной обратной связи [10, 11, 26, 27]. Так, было показано, что HSA, один из превалирующих белков плазмы крови, при модификации гипогалоидными кислотами (HOCl и HOBr) приобретал способность активировать NADPH-оксидазу, а также инициировать дегрануляцию нейтрофилов [10, 11]. В связи с этим было исследовано влияние HSA-Cl на продукцию HOCl нейтрофилами с применением CB (рис. 3).

 

Рис. 3. Влияние HSA-Cl (1 г/л) на окисление целестинового синего B в суспензии нейтрофилов (a) и в фосфатно-солевом буфере (b)

Fig. 3. The effect of HSA-Cl (1 g/L) on CB oxidation in the neutrophils suspension (a) and in PBS (b)

 

Как видно из рис. 3, добавление модифицированного HSA (1 г/л) вызывало окисление СВ в суспензии нейтрофилов, что видно по увеличению флуоресценции раствора относительно добавки немодифицированного HSA. Чтобы исключить возможный вклад модифицированного белка в этот процесс, было исследовано влияние HSA-Cl на окисление СВ в растворе. Выяснилось, что добавление HSA-Cl к раствору СВ в отсутствие клеток также вызывало быстрое окисление красителя. Следует отметить, что присутствие непрореагировавшей с HSA HOCl не было выявлено в предварительных экспериментах с использованием скополетина, который окисляется HOCl (данные не представлены).

Было также показано, что моноклональные антитела класса IgM против HSA-Cl (1H2, 0,168 г/л), позволяющие анализировать накопление иммунореактивных групп в HSA после модификации HOCl, ингибировали окисление СВ в растворе HSA-Cl (рис. 4). При этом действие антител 1H2 было специфичным, поскольку добавление в систему немодифицированного HSA (см. рис. 4, кривые 3, 4) не оказывало значимого эффекта на окисление CB, следовательно, речь идет не об эффекте аминокислот антител как скавенджеров HOCl либо ее производных.

 

Рис. 4. Влияние моноклональных антител против HSA-Cl (1H2, 0,168 г/л, кривая 2) на окисление целестинового синего B в растворе HSA-Cl (0,125 г/л, кривая 1). Отрицательный контроль на фоне сывороточного альбумина человека (0,168 и 0,336 г/л, кривые 3 и 4)

Fig. 4. The effect of monoclonal antibodies against HSA-Cl (1H2, 0.168 g/L, curve 2) on CB oxidation in HSA-Cl solution (0.125 g/L, curve 1). Negative control on the background of HSA (0.168 g/L and 0.336 g/L, curves 3 and 4)

 

Среди аминокислотных остатков HSA, реагирующих с HOCl, с помощью техники хроматографии и масс-спектрометрии были идентифицированы Met147, Met353, Met572, Trp238 и др. [28]. В нашей недавней работе по HOCl-модификации HSA было зафиксировано уменьшение флуоресценции остатков триптофана [29]. При сравнении констант скорости реакции CB и аминокислотных остатков с HOCl был сделан вывод, что только цистеин и метионин реагируют с HOCl быстрее, чем CB [7]. Вероятно, продукты реакции лизина, триптофана и гистидина с HOCl в HSA реагируют с CB с образованием флуоресцирующего гликоля.

Таким образом, с помощью CB возможно проведение чувствительного анализа на наличие хлорированных продуктов, комплексное исследование влияния различных агонистов и лекарственных препаратов на выход MPO из азурофильных гранул нейтрофилов, ее активность, а также эффективность сборки и активации NADPH-оксидазного ферментного комплекса.

Флуоресцентный анализ белков с применением красителя СВ может быть использован для разработки новых методов обнаружения галогенированных функциональных групп в белковых молекулах (хлораминов и др.).

Дополнительная информация

Финансирование. Работа выполнена при поддержке грантов БРФФИ № Б18Р-058 и Б19РМ-024, грантов РФФИ № 18-515-00004 и 19-54-04004.

Соблюдение этических норм. Исследование одобрено протоколом локального этического комитета при ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины».

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Список сокращений

4-ABAH — гидразид 4-аминобензойной кислоты; CABA — Caragana arborescens агглютинин; CB — целестиновый синий B; Con A — Canavalia ensiformis агглютинин; CP — церулоплазмин; cyth b — цитохалазин b; fMLP — N-формил-метионил-лейцил-фенилаланин; Н2О2 — пероксид водорода; HOCl — хлорноватистая кислота; HSA — сывороточный альбумин человека; HSA-Cl — модифицированный хлорноватистой кислотой сывороточный альбумин человека; INH — изониазид; MPO — миелопероксидаза; NAC — N-ацетилцистеин; •О2– — супероксидный анион-радикал; PBS — фосфатно-солевой буфер; PHA-L — Phaseolus vulgaris агглютинин; PMA — форбол-12-миристат-13-ацетат; SBA — Glycine hispida агглютинин; VAA — Viscum Album агглютинин; WGA — Triticum vulgaris агглютинин.

×

Об авторах

Вероника Евгеньевна Луценко

ГУ ВО «Белорусский государственный университет»

Автор, ответственный за переписку.
Email: nika.lutsenko@tut.by
SPIN-код: 1647-2893

аспирант кафедры биофизики физического факультета

Белоруссия, Минск

Дарья Владимировна Григорьева

ГУ ВО «Белорусский государственный университет»

Email: dargr@tut.by
ORCID iD: 0000-0003-0210-5474
SPIN-код: 2479-7785

канд. биол. наук, старший научный сотрудник НИЛ биофизики и биотехнологии кафедры биофизики физического факультета

Белоруссия, Минск

Ирина Владимировна Горудко

ГУ ВО «Белорусский государственный университет»

Email: irinagorudko@gmail.com
SPIN-код: 8968-3125

канд. биол. наук, доцент, доцент кафедры биофизики физического факультета

Белоруссия, Минск

Сергей Николаевич Черенкевич

ГУ ВО «Белорусский государственный университет»

Email: cherenkevich@bsu.by
SPIN-код: 6493-9551

д-р биол. наук, профессор, академик НАН Беларуси, профессор кафедры биофизики физического факультета

Белоруссия, Минск

Николай Петрович Горбунов

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»

Email: niko_laygo@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-4636-0565
SPIN-код: 6289-7281

аспирант, научный сотрудник отдела молекулярной генетики

Россия, Санкт-Петербург

Валерия Александровна Костевич

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»; ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины ФМБА»

Email: hfa-2005@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-1405-1322
SPIN-код: 2726-2921

канд. биол. наук, старший научный сотрудник отдела молекулярной генетики; научный сотрудник отдела биофизики 

Россия, Санкт-Петербург; Москва

Олег Михайлович Панасенко

ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины ФМБА»; ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России

Email: o-panas@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5245-2285
SPIN-код: 3035-6808

д-р биол. наук, профессор, заведующий отделом биофизики; старший научный сотрудник отдела медицинской физики 

Россия, Москва

Алексей Викторович Соколов

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»; ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины ФМБА»; ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет»

Email: biochemsokolov@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-9033-0537
SPIN-код: 7427-7395

д-р биол. наук, заведующий лабораторией биохимической генетики отдела молекулярной генетики; старший научный сотрудник отдела биофизики ; профессор кафедры фундаментальных проблем медицины и медицинских технологий 

Россия, Санкт-Петербург; Москва; Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Winterbourn CC, Kettle AJ. Redox reactions and microbial killing in the neutrophil phagosome. Antioxid Redox Signal. 2013;18(6):642-660. https://doi.org/10.1089/ars. 2012.4827.
  2. Panasenko OM, Gorudko IV, Sokolov AV. Hypochlorous acid as a precursor of free radicals in living systems. Biochemistry (Mosc). 2013;78(13):1466-1489. https://doi.org/10.1134/S0006297913130075.
  3. Aratani Y. Myeloperoxidase: its role for host defense, inflammation, and neutrophil function. Arch Biochem Biophys. 2018;640:47-52. https://doi.org/10.1016/j.abb. 2018.01.004.
  4. Liu SR, Wu SP. Hypochlorous acid turn-on fluorescent probe based on oxidation of diphenyl selenide. Org Lett. 2013;15(4):878-881. https://doi.org/10.1021/ol400011u.
  5. Zhang R, Song B, Yuan J. Bioanalytical methods for hypochlorous acid detection: recent advances and challenges. Trends Analyt Chem. 2018;99:1-33. https://doi.org/10.1016/j.trac.2017.11.015.
  6. Bertozo LC, Zeraik ML, Ximenes VF. Dansylglycine, a fluorescent probe for specific determination of halogenating activity of myeloperoxidase and eosinophil peroxidase. Anal Biochem. 2017;532:29-37. https://doi.org/10.1016/j.ab.2017.05.029.
  7. Sokolov AV, Kostevich VA, Kozlov SO, et al. Kinetic method for assaying the halogenating activity of myeloperoxidase based on reaction of celestine blue B with taurine halogenamines. Free Radic Res. 2015;49(6):777-789. https://doi.org/10.3109/10715762.2015.1017478.
  8. Козлов С.О., Кудрявцев И.В., Грудинина Н.А., и др. Активированные нейтрофилы, продуцирующие HOCL, выявляющиеся при проточной цитометрии и конфокальной микроскопии с помощью целестинового синего В // Acta Biomedica Scientifica. – 2016. – Т. 1. – № 3–2. – С. 86–91. [Kozlov SO, Kudryavtsev IV, Grudinina NA, et al. Activated producing HOCL neutrophils revealed by flow cytometry and confocal microscopy with celestine blue B. Acta Biomedica Scientifica. 2016;1(3-2):86-91. (In Russ.)]. https://doi.org/10.12737/article_590823a4895537.04307905.
  9. Sokolov AV, Acquasaliente L, Kostevich VA, et al. Thrombin inhibits the anti-myeloperoxidase and ferroxidase functions of ceruloplasmin: relevance in rheumatoid arthritis. Free Radic Biol Med. 2015;86:279-294. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2015.05.016.
  10. Михальчик Е.В., Смолина Н.В., Астамирова Т.С., и др. Альбумин сыворотки крови, модифицированный в условиях окислительного/галогенирующего стресса, усиливает люминолзависимую хемилюминесценцию нейтрофилов человека // Биофизика. – 2013. – Т. 58. – № 4. – C. 681–689. [Mikhalchik EV, Smolina NV, Astamirova TC, et al. Human serum albumin modified under oxidative/halogenative stress enhances luminol-dependent chemiluminescence of human neutrophils. Biophysics. 2013;58(4):530-536. (In Russ.)]. https://doi.org/10.1134/S0006350913040118.
  11. Gorudko IV, Grigorieva DV, Shamova EV, et al. Hypohalous acid-modified human serum albumin induces neutrophil NADPH oxidase activation, degranulation, and shape change. Free Radic Biol Med. 2014;68:326-334. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2013.12.023.
  12. Freysd’ottir J. Production of monoclonal antibodies. Methods Mol Med. 2000;40:267-279. https://doi.org/10.1385/ 1-59259-076-4:267.
  13. Keshari RS, Verma A, Barthwal MK, Dikshit M. Reactive oxygen species-induced activation of ERK and p38 MAPK mediates PMA-induced NETs release from human neutrophils. J Cell Biochem. 2013;114(3):532-540. https://doi.org/10.1002/jcb.24391.
  14. Ganji SH, Kamanna VS, Kashyap ML. Niacin decreases leukocyte myeloperoxidase: mechanistic role of redox agents and Src/p38MAP kinase. Atherosclerosis. 2014;235(2):554-561. https://doi.org/10.1016/j.atherosclerosis.2014.05.948.
  15. Lindemann O, Strodthoff C, Horstmann M, et al. TRPC1 regulates fMLP-stimulated migration and chemotaxis of neutrophil granulocytes. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 2015;1853(9):2122-2130. https://doi.org/10.1016/j.bbamcr.2014.12.037.
  16. Grigorieva DV, Gorudko IV, Kostevich VA, et al. Myeloperoxidase exocytosis from activated neutrophils in the presence of heparin. Biochemistry (Moscow). Supplement Series B: Biomedical Chemistry. 2018;12(2):136-142. https://doi.org/10.1134/S199075081802004X.
  17. Huang J, Smith F, Panizzi P. Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs. Arch Biochem Biophys. 2014;548:74-85. https://doi.org/10.1016/j.abb.2014.02.014.
  18. Forbes LV, Furtmüller PG, Khalilova I, et al. Isoniazid as a substrate and inhibitor of myeloperoxidase: identification of amine adducts and the influence of superoxide dismutase on their formation. Biochem Pharmacol. 2012;84(7):949-960. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2012.07.020.
  19. Sokolov AV, Kostevich VA, Varfolomeeva EY, et al. Capacity of ceruloplasmin to scavenge products of the respiratory burst of neutrophils is not altered by the products of reactions catalyzed by myeloperoxidase. Biochem. Cell Biol. 2018;96(4):457-467. https://doi.org/10.1139/bcb-2017-0277.
  20. Varfolomeeva EY, Semenova EV, Sokolov AV, et al. Ceruloplasmin decreases respiratory burst reaction during pregnancy. Free Radic Res. 2016;50(8):909-919. https://doi.org/10.1080/10715762.2016.1197395.
  21. Storkey C, Davies MJ, Pattison DI. Reevaluation of the rate constants for the reaction of hypochlorous acid (HOCL) with cysteine, methionine, and peptide derivatives using a new competition kinetic approach. Free Radic Biol Med. 2014;73:60-66. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2014.04.024.
  22. Van Damme EJ. History of plant lectin research. Methods Mol Biol. 2014;1200:3-13. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-1292-6_1.
  23. Кобелев А.В., Сироткин А.С. Лектины: обзор свойств и перспектив использования в биотехнологии // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. – 2018. – Т. 14. – № 2. – С. 60–67. [Kobelev AV, Sirotkin AS. Lectins: a review of properties and prospects for use in biotechnology. Yu.A. Ovchinnikov bulletin of biotechnology and physical and chemical biology. 2018;14(2):60-67. (In Russ.)]
  24. Pereira-da-Silva G, Caroline FC, Roque-Barreira MC. Neutrophil activation induced by plant lectins: modulation of inflammatory processes. Inflamm Allergy Drug Targets. 2012;11(6):433-441. https://doi.org/10.2174/ 187152812803589985.
  25. Timoshenko AV, Gorudko IV, Gabius HJ. Lectins from medicinal plants: Bioeffectors with diverse activities. In: Phytochemicals – Biosynthesis, Function and Application. Ed. by R. Jetter. Vol. 44. Cham: Springer; 2014. P. 43-56. https://doi.org/10.1007/978-3-319-04045-5_3.
  26. Луценко В.Е., Григорьева Д.В., Черенкевич С.Н., и др. Флуоресцентный метод оценки функциональной активности нейтрофилов // Актуальные вопросы биологической физики и химии. – 2018. – Т. 3. – № 3. – С. 612–618. [Lutsenko VE, Grigorieva DV, Cherenkevich SN, et al. Fluorescent method for estiment neutrophils functional activity. Aktual’nye voprosy biologicheskoj fiziki i khimii. 2018;3(3):612-618. (In Russ.)]
  27. Gorudko IV, Vakhrusheva TV, Mukhortova AV, et al. The priming effect of halogenated phospholipids on the functional responses of human neutrophils. Biochemistry (Moscow). Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2010;4(3):262-271. https://doi.org/10.1134/S1990747810030037.
  28. Salavej P, Spalteholz H, Arnhold J. Modification of amino acid residues in human serum albumin by myeloperoxidase. Free Radic Biol Med. 2006;40(3):516-525. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2005.09.007.
  29. Vlasova II, Sokolov AV, Kostevich VA, et al. Myeloperoxidase-induced oxidation of albumin and ceruloplasmin: role of tyrosines. Biochemistry (Moscow). 2019;84(6):652-662. https://doi.org/10.1134/S0006297919060087.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Типичные кинетические кривые окисления целестинового синего B (a) и характеризующие данный процесс параметры (b) в суспензии нейтрофилов, активированных форболовым эфиром (PMA, 50 нМ) либо хемотаксическим пептидом (fMLP, 1 мкМ) в отсутствие и в присутствии цитохалазина b (cyth b, 2,5 мг/л)

Скачать (237KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Влияние лектинов зародышей пшеницы (WGA, 100 мг/л), семян канавалии мечевидной (Con A, 100 мг/л), семян фасоли обыкновенной (PHA-L, 100 мг/л), караганы древовидной (CABA, 100 мг/л), омелы белой (VAA, 50 мг/л), сои (SBA, 100 мг/л) в отсутствие и в присутствии цитохалазина b (cyth b, 2,5 мг/л) на окисление целестинового синего B в суспензии нейтрофилов. * р < 0,05

Скачать (114KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Влияние HSA-Cl (1 г/л) на окисление целестинового синего B в суспензии нейтрофилов (a) и в фосфатно-солевом буфере (b)

Скачать (145KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Влияние моноклональных антител против HSA-Cl (1H2, 0,168 г/л, кривая 2) на окисление целестинового синего B в растворе HSA-Cl (0,125 г/л, кривая 1). Отрицательный контроль на фоне сывороточного альбумина человека (0,168 и 0,336 г/л, кривые 3 и 4)

Скачать (133KB)
Метаданные

© Луценко В.Е., Григорьева Д.В., Горудко И.В., Черенкевич С.Н., Горбунов Н.П., Костевич В.А., Панасенко О.М., Соколов А.В., 2019

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 74760 от 29.12.2018 г.