СТРЕСС-ИНДУЦИРОВАННАЯ АТРОФИЯ ТИМУСА И ТУЧНЫЕ КЛЕТКИ

Аннотация

В работе с использованием гистологических методов оценивали динамику популяции тучных клеток тимуса в ответ на введение белым беспородным мышам гидрокортизона. Установлено, что через 48 ч после введения гормона число тучных клеток возрастает в 10 раз, при этом появляются клетки на всех стадиях созревания. Параллельно повышается уровень дегрануляции тучных клеток. Предполагается созревание тучных клеток в пределах органа и их участие в регуляции клеточной миграции и ремоделировании матрикса тимуса при стрессе.

Полный текст

Введение. Наличие контактов тучныхклеток и нервных терминалей, а также существование популяции тучных клеток (ТК) в тимусе позволяют ставить вопрос о роли нейро-мастоцитарных взаимодействий в иммунофизиологии тимуса в норме и в процессе стресс-индуцированной атрофии (акцидентальной трансформации) этого органа. Данные о внутритимической локализации ТК были получены еще в 1930-е годы и в дальнейшем многократно подтверждены [1], однако морфологические свидетельства контактов ТК тимуса и катехоламинэргических нервных терминалей были получены относительно недавно [4]. В ответ на иммобилизационный стресс анализировалась динамика числа ТК тимуса и уровня их дегрануляции, но результаты были неоднозначными [3]. Однако многие аспекты нейро-мастоцитарных взаимодействий в тимусе в норме и при стрессе остаются неясными. Поэтому целью работы было изучение динамики ТК тимуса и степени их зрелости в ответ на введение гидрокортизона (ГК) экспериментальным животным. Материалы и методы. Материалом для исследования служил тимус самцов белых нелинейных мышей (возраст 3-4 мес, n = 30). Для индукции акцидентальной трансформации тимуса экспериментальным животным однократно внутрибрюшинно вводили раствор гидрокортизона (Gedeon Richter, Венгрия) в дозе 125 мг/кг веса. Животных выводили из эксперимента путем цервикальной дислокации через 12, 24, 48, 72, 96 и 192 ч после инъекции. В качестве контроля использовали интактных мышей (n = 5). Образцы тимуса фиксировали смесью спирт-формалин-уксусная кислота. На ротационном микротоме (Leica RM 2125RT) изготавливали срезы толщиной 5 мкм. Для выявления тучных клеток использовали раствор толуидинового синего (LabPoint, Россия). Для выявления ТК разных стадий зрелости срезы окрашивали раствором альцианового синего G - сафранина O по методике [5]. Для идентификации фибронектина использовали кроличьи поликлональные антитела (Abcam, Великобритания). Для флуоресцентного выявления связавшихся первичных антител использовали HRP Conjugate (Spring Bioscience, США) и козьи антитела против HRP, конъюгированные с флюорохромом Cy3 (Jackson ImmunoResearch, США). Результаты и их обсуждение. Полученные данные об изменениях структуры тимуса в ходе акцидентальной трансформации согласуются с имеющимися в литературе сведениями [2]. На сроках 12-24 ч после введения ГК в кортексе тимуса отмечено обилие апоптотических телец. Через 48 ч после введения ГК корковое вещество тимуса было полностью очищено от них, при этом плотность клеток в кортексе была значительно ниже, чем в медулле. Применение окраски анилиновым синим позволило выявить увеличение плотности соединительной ткани в кортексе тимуса через 48 ч после введения ГК по сравнению с контролем. Через 192 ч после введения ГК общая морфология тимуса соответствовала интактным животным. Результаты выявления фибронектина в тимусе мыши подтвердили данные о существенном увеличении плотности соединительной ткани в кортексе через 48 ч после введения ГК. Через 48 ч после введения ГК отмечается существенное увеличение количества ТК в тимусе, которое более чем в 10 раз превышает значение контроля. В дальнейшем количество ТК в тимусе постепенно снижается через 72 ч и 96 ч после введения ГК и в точке 196 ч достоверно не отличается от значений контроля. Количественная оценка степени дегрануляционной активности в ходе акцидентальной трансформации выявила увеличение индекса дегрануляции ТК в тимусе на всех исследованных сроках после введения ГК, что может быть свидетельством функциональной вовлеченности ТК в процесс акцидентальной трансформации тимуса. В тимусе мышей через 48, 72 и 96 ч после введения ГК было отмечено наличие ТК всех стадий созревания, неравномерно распределенных по компартментам органа: Самые незрелые (гранулы которых окрашены альциановым синим) клетки преобладали в мозговом и корковом веществе тимуса, в то время как более зрелые формы тучных клеток преобладали в составе соединительнотканного компартмента органа. Наибольшее количество самых незрелых ТК и ТК промежуточной степени зрелости было отмечено в тимусе через 48 ч после введения ГК. По мере восстановления тимуса (72-96 ч после введения ГК) доля незрелых и созревающих ТК в тимусе постепенно уменьшалась на фоне увеличения доли самых зрелых ТК. В точке 192 ч, как и в тимусе животных контрольной группы, все выявленные ТК характеризовались наличием исключительно зрелых гранул. Результаты свидетельствуют о том, что появление новых ТК в тимусе в ходе акцидентальной трансформации связано с их созреванием in situ. В ходе созревания после акцидентальной трансформации ТК перемещаются из мозгового вещества тимической дольки и глубоких слоев кортекса к соединительно-тканным междольковым трабекулам и капсуле, где устанавливают связи с катехоламиэргическими нервными терминалями. Не исключено, что дегрануляция ТК тимуса в ходе стресс-индуцированной атрофии может быть вызвана передачей сигнала от нервных терминалей и играет важную роль в экстратимической миграции клеток в ходе ранних стадий ответной реакции на стресс.