Сравнительное определение уровня экспрессии генов MxA, OAS1 и PKR в лейкоцитах пациентов с гриппозной и коронавирусной инфекцией
- Авторы: Клотченко С.А.1, Романовская-Романько Е.А.1, Олейник В.А.1,2, Егорова М.А.1, Монахова В.С.1, Венёв Е.В.1,3, Плотникова М.А.1
-
Учреждения:
- Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
- Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет)
- Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина
- Выпуск: Том 23, № 3 (2023)
- Страницы: 65-75
- Раздел: Оригинальные исследования
- URL: https://journals.eco-vector.com/MAJ/article/view/623374
- DOI: https://doi.org/10.17816/MAJ623374
- ID: 623374
Цитировать
Полный текст
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Обоснование. Первой линией защиты хозяина против инвазии вирусных патогенов служит врожденный иммунный ответ, наиважнейшее звено которого — система интерферонов. Передача сигналов интерфероном индуцирует в клетке-мишени экспрессию широкого спектра специфических противовирусных белков, так называемых интерферон-стимулируемых генов. Наиболее эффективные интерферон-стимулируемые гены напрямую ингибируют репликацию вирусов РНК-центричным образом посредством деградации вирусной РНК, нарушения ее транспорта, ингибирования вирусной трансляции и т.п.
Цель — разработка количественной тест-системы на основе полимеразной цепной реакции для оценки молекулярной регуляции интерферон-стимулируемых генов MxA, OAS1 и PKR человека, а также определение экспрессии этих генов в лейкоцитах крови в ответ на инфицирование РНК-содержащими вирусами.
Материалы и методы. Исследование проводили с использованием лейкоцитов, выделенных из крови пациентов с лабораторно подтвержденными заболеваниями грипп и COVID-19 на 3–4-й день после манифестации болезни. Для ex vivo индукции вирусного инфицирования использовали вирусы гриппа A/California/07/09pdm (H1N1pdm09), B/Malaysia/2506/04 (Викторианской генетической линии), штамм A2 респираторно-синцитиального вируса и вирус SARS-CoV-2 hCoV-19/Russia/SPE-RII-3524V/2020.
Результаты. Разработана мультиплексная тест-система на основе полимеразной цепной реакции для оценки экспрессии генов MxA, OAS1 и PKR, эффективность амплификации которых составила 101,9, 92,5 и 101,5 % соответственно. Разработанная тест-система была предложена для исследования молекулярной регуляции MxA, OAS1 и PKR в лейкоцитах при социально значимых заболеваниях, таких как грипп и COVID-19. Согласно полученным нами результатам у госпитализированных пациентов на 3–4-й день после появления симптомов заболевания уровни экспрессии генов MxA, OAS1 и PKR были значимо повышены на системном уровне в лейкоцитах крови. Показано, что стимуляция лейкоцитов, выделенных от здоровых волонтеров, вирусами гриппа А, B и респираторно-синцитиальным вирусом приводила к значимому увеличению уровней мРНК генов MxA, OAS1 и PKR через 24 ч после инфицирования. В то же время стимуляция лейкоцитов вирусом SARS-CoV-2 не приводила к изменению экспрессии этих генов.
Заключение. Разработанную тест-систему можно использовать для характеристики экспрессии противовирусных эффекторных интерферон-стимулируемых генов, что потенциально поможет в изучении эволюционно выбранных механизмов ускользания вирусов от врожденного иммунного ответа.
Полный текст
Об авторах
Сергей Анатольевич Клотченко
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Email: fosfatik@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0289-6560
SPIN-код: 2632-6195
канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории гриппозных вакцин
Россия, Санкт-ПетербургЕкатерина Андреевна Романовская-Романько
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Email: ekaterina.romanovskaya@influenza.spb.ru
ORCID iD: 0000-0001-7560-398X
SPIN-код: 1012-8043
канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории векторных вакцин
Россия, Санкт-ПетербургВероника Андреевна Олейник
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России; Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет)
Email: working.lyutik@gmail.com
лаборант-исследователь лаборатории гриппозных вакцин, студент
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-ПетербургМарья Алексеевна Егорова
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Email: sci-work_maria@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1408-8413
SPIN-код: 6055-1423
научный сотрудник лаборатории системной вирусологии
Россия, Санкт-ПетербургВарвара Сергеевна Монахова
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Email: varvara.bio@gmail.com
SPIN-код: 2111-8493
научный сотрудник лаборатории генной инженерии и экспрессии рекомбинантных белков
Россия, Санкт-ПетербургЕвгений Валерьевич Венёв
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России; Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина
Email: imberbis@gmail.com
старший преподаватель, врач-инфекционист
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-ПетербургМарина Александровна Плотникова
Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Автор, ответственный за переписку.
Email: biomalinka@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-8196-3156
SPIN-код: 2986-9850
канд. биол. наук, старший научный сотрудник лаборатории векторных вакцин
Россия, Санкт-ПетербургСписок литературы
- Yang E., Li M.M. All about the RNA: interferon-stimulated genes that interfere with viral RNA processes // Front. Immunol. 2020. Vol. 11. P. 605024. doi: 10.3389/fimmu.2020.605024
- Schneider W.M., Chevillotte M.D., Rice C.M. Interferon-stimulated genes: a complex web of host defenses // Annu. Rev. Immunol. 2014. Vol. 32. P. 513–545. doi: 10.1146/annurev-immunol-032713-120231
- Verhelst J., Hulpiau P., Saelens X. Mx proteins: antiviral gatekeepers that restrain the uninvited // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2013. Vol. 77, No. 4. P. 551–566. doi: 10.1128/MMBR.00024-13
- Al-khatib K., Williams B.R., Silverman R.H. et al. Distinctive roles for OAS and PKR in the in vivo anti-viral effect of an adenoviral vector expressing murine IFN-β // J. Immunol. 2004. Vol. 72, No. 9. P. 5638–5647. doi: 10.4049/jimmunol.172.9.5638
- Meurs E.F., Watanabe Y., Kadereit S. et al. Constitutive expression of human double-stranded RNA-activated p68 kinase in murine cells mediates phosphorylation of eukaryotic initiation factor 2 and partial resistance to encephalomyocarditis virus growth // J. Virol. 1992. Vol. 66, No. 10. P. 5805–5814. doi: 10.1128/JVI.66.10.5805-5814.1992
- Williams B.R. Signal integration via PKR // Sci. STKE. 2001. No. 89. P. re2. doi: 10.1126/stke.2001.89.re2
- Wang S., Wu J., Wang F. et al. Expression pattern analysis of antiviral genes and inflammatory cytokines in PEDV-infected porcine intestinal epithelial cells // Front. Vet. Sci. 2020. Vol. 7. P. 75. doi: 10.3389/fvets.2020.00075
- Бахтеева Л.Б., Хайбуллина С.Ф., Ломбарди В.К. и др. Значение полиморфизма генов фермента 2’,5’-олигоаденилатсинтетазы в прогнозе ВИЧ-инфекции // Современные технологии в медицине. 2016. Т. 8, № 1. С. 99–105. doi: 10.17691/stm2016.8.1.13
- Knapp S., Yee L.J., Frodsham A.J. et al. Polymorphisms in interferon-induced genes and the outcome of hepatitis C virus infection: roles of MxA, OAS-1 and PKR // Genes Immun. 2003. Vol. 4, No. 6. P. 411–419. doi: 10.1038/sj.gene.6363984
- Lozhkov A.A., Plotnikova M.A., Egorova M.A. et al. Simultaneous detection of RIG-1, MDA5, and IFIT-1 expression is a convenient tool for evaluation of the interferon-mediated response // Viruses. 2022. Vol. 14, No. 10. P. 2090. doi: 10.3390/v14102090
- Sheppard P., Kindsvogel W., Xu W. et al. IL-28, IL-29 and their class II cytokine receptor IL-28R // Nat. Immunol. 2003. Vol. 4, No. 1. P. 63–68. doi: 10.1038/ni873
- Stark G.R., Kerr I.M., Williams B.R. et al. How cells respond to interferons // Annu. Rev. Biochem. 1998. Vol. 67, No. 1. P. 227–264. doi: 10.1146/annurev.biochem.67.1.227
- Savvateeva E.N., Rubina A.Y., Gryadunov D.A. Biomarkers of community-acquired pneumonia: a key to disease diagnosis and management // Biomed. Res. Int. 2019. Vol. 2019. P. 1701276. doi: 10.1155/2019/1701276
- Blanco-Melo D., Nilsson-Payant B.E., Liu W. et al. Imbalanced host response to SARS-CoV-2 drives development of COVID-19 // Cell. 2020. Vol. 181, No. 5. P. 1036–1045.e9. doi: 10.1016/j.cell.2020.04.026
- Lei X., Dong X., Ma R. et al. Activation and evasion of type I interferon responses by SARS-CoV-2 // Nat. Commun. 2020. Vol. 11, No. 1. P. 3810. doi: 10.1038/s41467-020-17665-9
- Kazmierski J., Friedmann K., Postmus D. et al. Nonproductive exposure of PBMCs to SARS-CoV-2 induces cell-intrinsic innate immune responses // Mol. Syst. Biol. 2022. Vol. 18, No. 8. P. e10961. doi: 10.15252/msb.202210961
- Hoffmann M., Kleine-Weber H., Schroeder S. et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor // Cell. 2020. Vol. 181, No. 2. P. 271–280.e8. doi: 10.1016/j.cell.2020.02.052
- Song X., Hu W., Yu H. et al. Little to no expression of angiotensin-converting enzyme-2 on most human peripheral blood immune cells but highly expressed on tissue macrophages // Cytometry A. 2023. Vol. 103, No. 2. P. 136–145. doi: 10.1002/cyto.a.24285
- Xiong Y., Liu Y., Cao L. et al. Transcriptomic characteristics of bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood mononuclear cells in COVID-19 patients // Emerg. Microbes Infect. 2020. Vol. 9, No. 1. P. 761–770. doi: 10.1080/22221751.2020.1747363
- Faist A., Schloer S., Mecate-Zambrano A. et al. Inhibition of p38 signaling curtails the SARS-CoV-2 induced inflammatory response but retains the IFN-dependent antiviral defense of the lung epithelial barrier // Antiviral Res. 2023. Vol. 209. P. 105475. doi: 10.1016/j.antiviral.2022.105475