Отправить статью по E-mail Выделение антител к гипохлорит-модифицированным липопротеинам низкой плотности из сыворотки крови человека и изучение их специфичности.
- Авторы: Григорьева К.Н.1,2, Дмитриева А.А.2, Иванова А.А.2, Денисенко А.Д.3
-
Учреждения:
- Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого
- Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Институт экспериментальной медицины”
- Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Институт экспериментальной медицины»
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья опубликована: 27.06.2024
- URL: https://journals.eco-vector.com/MAJ/article/view/630075
- DOI: https://doi.org/10.17816/MAJ630075
- ID: 630075
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Обоснование. Модифицированные липопротеины низкой плотности (ЛПНП) обладают иммуногенными свойствами и индуцируют выработку антител. Миелопероксидаза катализирует окисление ионов хлора до хлорноватистой кислоты (НОСl). При этом HOCl способствует образованию активных галогенсодержащих соединений, взаимодействующих с белковой и липидной частями ЛПНП, что приводит к их модификации и продукции антител к ним. Цель данной работы - выделение антител к гипохлорит-модифицированным ЛПНП из сывороток крови человека и исследование их специфичности.
Материалы и методы. Для получения модифицированных ЛПНП использовали малоновый диальдегид (МДА-ЛПНП), уксусный ангидрид (ацет-ЛПНП) и гипохлорит натрия (гипохлорит-ЛПНП). Антитела класса IgG к гипохлорит-ЛПНП были выделены методом аффинной хроматографии. Предварительно из сывороток крови человека была выделена общая фракция IgG с использованием MabSelect Xtra. Из этого пула IgG были выделены специфичные антитела к гипохлорит-модифицированным белкам. В качестве сорбента применялась CNBr-сефароза 4B, конъюгированная с человеческим сывороточным альбумином, модифицированным NaOCl. Специфичность связывания полученных антител против гипохлорит-ЛПНП проверяли с помощью конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА). Конкурентами выступали гипохлорит-ЛПНП, ацет ЛПНП и МДА-ЛПНП в различных концентрациях (1-250 мкг/мл).
Результаты. В крови человека были обнаружены антитела класса IgG против гипохлорит-модифицированных белков, взаимодействующие с гипохлорит-ЛПНП. Связывание антител сыворотки крови человека с гипохлорит-ЛПНП с практически полностью ингибировал только соответствующим образом модифицированные ЛПНП, то есть гипохлорит-ЛПНП, а не нативные ЛПНП или ацет-ЛПНП. МДА-ЛПНП также проявляли некоторую конкурирующую активность, но значительно более слабую, чем гипохлорит-ЛПНП. За связывание с выделеными антителами к гипохлорит-ЛПНП конкурировали сами гипохлорит-ЛПНП и, в меньшей степени МДА-ЛПНП. Ацет-ЛПНП и нативные ЛПНП не уменьшали эффективности связывания антител со своим антигеном.
Выводы. При модификации ЛПНП с помощью гипохлорита натрия формируются эпитопы, отличные от таковых, образующихся при других изучаемых модификациях ЛПНП. Эти эпитопы ответственны за образование специфических антител.
Об авторах
Ксения Николаевна Григорьева
Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого; Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Институт экспериментальной медицины”
Email: ks_grigorieva24@mail.ru
ORCID iD: 0009-0005-3818-9835
студент
Россия, 195251, ул. Политехническая, д. 29 литера Б, Санкт-Петербург; 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12Александра Андреевна Дмитриева
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Институт экспериментальной медицины”
Email: aleksandra-2001@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-2680-4069
SPIN-код: 3009-2698
младший научный сотрудник отдела биохимии
Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12Анна Андреевна Иванова
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Институт экспериментальной медицины”
Автор, ответственный за переписку.
Email: anna.ivantcova@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-8673-9628
SPIN-код: 5306-1995
научный сотрудник отдела Биохимии
Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12Александр Дорофеевич Денисенко
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Институт экспериментальной медицины»
Email: add@iem.sp.ru
ORCID iD: 0000-0003-1613-0654
SPIN-код: 7496-1449
дмн, профессор, заведующий лабораторией регуляции липидного обмена
Россия, 197022, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12Список литературы
- 1. Денисенко А. Д. Аутоиммунные комплексы липопротеин-антитело и их роль в атерогенезе // Медицинский академический журнал. 2007. Т. 7, № 1. С. 38-44
- 2. Пигаревский П. В., Архипова О. Ю, Денисенко А. Д. Иммуногистохимическое обнаружение модифицированных липопротеинов в атеросклеротических поражениях аорты человека // Медицинская иммунология. 2006. Т. 8, № 5-6. С. 637-644. doi.org/10.15789/1563-0625-2006-5-6-637-644
- 3. Belik I. V., Ivantsova A. A., Mamedova Z. E., et. al. Antibodies against modified low-density lipoproteins and their complexes in blood of patients with various manifestations of atherosclerosis // Biochemistry Suppl. Ser. B: Biomed. Chem. 2016. Vol.10, N 4, P. 346-350. doi: 10.1134/S1990750816040028
- 4. Denisenko A.D. Vinogradov A.G., et. al. Antilipoprotein autoantibodies (Aab), lipoprotein-antibody immune complexes (Lp-Ab IV) and atherosclerosis // Advances in Lipoprotein and Atherosclerosis Research, Diagnostics and Treatment. Proceedings of the 10th International Dresden Lipid Symposium. Eds. W. Jaross, M. Hanefeld, S. Bergmann, M. Menschikovski, Dresden. 1999. P. 75-79
- 5. Malle E., Waeg G., Schreiber R., et. al. Immunohistochemical evidence for the myeloperoxidase/H2O2/halide system in human atherosclerotic lesions: colocalization of myeloperoxidase and hypochlorite-modified proteins // Eur J Biochem. 2000. Vol. 267, N 14. P. 4495-503. doi: 10.1046/j.1432-1327.2000.01498.x.
- 6. Schindhelm R.K., van der Zwan L.P., Teerlink T., et. al. Myeloperoxidase: a useful biomarker for cardiovascular disease risk stratification? // Clin Chem. Vol. 55, N 8. P. 1462-1470. doi: 10.1373/clinchem.2009.126029.
- 7. Sokolov A.V., Kostevich V.A., Runova O.L., et. al. Proatherogenic modification of LDL by surface-bound myeloperoxidase // Chem Phys Lipids. 2014. Vol.180. P.72-80 doi: 10.1016/j.chemphyslip.2014.02.006.
- 8. Hazell L.J., van den Berg J.J., Stocker R. Oxidation of low-density lipoprotein by hypochlorite causes aggregation that is mediated by modification of lysine residues rather than lipid oxidation // Biochem J. 1994. Vol. 302, N. Pt 1. P.297-304. doi: 10.1042/bj3020297.
- 9. Kopprasch S., Leonhardt W., Pietzsch J., et. al. Hypochlorite-modified low-density lipoprotein stimulates human polymorphonuclear leukocytes for enhanced production of reactive oxygen metabolites, enzyme secretion, and adhesion to endothelial cells // Atherosclerosis. 1998. Vol.136, N. 2. P. 315-324. doi: 10.1016/s0021-9150(97)00233-5
- 10. Havel R.J., Eder H.A., Bragdon J.H. The distribution and chemical composition of ultracentrifugally separated lipoproteins in human serum // J Clin Invest. 1955. Vol. 34, N. 9. P. 1345-53. doi: 10.1172/JCI103182.
- 11. Markwell M.A., Haas S.M., Bieber L.L., et. al. A modification of the Lowry procedure to simplify protein determination in membrane and lipoprotein samples // Anal Biochem. 1978. Vol. 87, N. 1. P. 206-210. doi: 10.1016/0003-2697(78)90586-9.
- 12. Palinski W., Ylä-Herttuala S., Rosenfeld M.E., et. al. Antisera and monoclonal antibodies specific for epitopes generated during oxidative modification of low density lipoprotein // Arteriosclerosis. 1990. Vol. 10, N. 3. P. 325-335. doi: 10.1161/01.atv.10.3.325.
- 13. Fields R. The rapid determination of amino groups with TNBS // Methods Enzymol. 1972. Vol. 25. P. 464-468. doi: 10.1016/S0076-6879(72)25042-X.
- 14. Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., et. al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem // 1985. Vol. 150, N. 1. P. 76-85. doi: 10.1016/0003-2697(85)90442-7.
- 15. Hawkins C.L., Pattison D.I., Davies M.J. Hypochlorite-induced oxidation of amino acids, peptides and proteins // Amino Acids. 2003. Vol. 25, N. 3-4. P. 259-274. doi: 10.1007/s00726-003-0016-x.
Дополнительные файлы
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).