ВЛИЯНИЕ ТЕПЛОВОГО ДЕМАСКИРОВАНИЯ АНТИГЕНА НА КАЧЕСТВО ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ОКРАСКИ ДНК В ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ СРЕЗАХ



Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Процедура теплового демаскирования антигена является важным этапом в процессе иммунофлуоресцентного окрашивания тканей, фиксированных в формалин-содержащих растворах. В большинстве случаев при морфологических исследованиях, кроме выявления исследуемого антигена, производят также окраску ядер клеток соответствующими флуорохромами, что позволяет определять положение, форму клеток, фазу митотического цикла, размеры дра и дрышка, состо ние хроматина. Цель на- сто щего исследовани состо ла в изучении вли ни процесса температурного демаскировани антигена на качество окрашивания ДНК флуоресцентными красителями DAPI и 7-Аминоактиномицином D. Установлено, что в ходе морфологического исследовани при выборе протокола иммунофлуоресцентной идентификации антигена необходимо принимать во внимание потенциальное воздействие процесса демаскирования антигена на стабильность и интенсивность окраски ядер клеток с применением флуо-рохромов. Полученные в ходе настоящего исследования данные должны учитываться при проведении многоцветовой флуоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Е А Колос

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»

Д Э Коржевский

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»

Список литературы

  1. Baker-Cairns B., Meyers K, Hamilton R., Smith C., Tornatore C. Immunohistochemical staining of fixed tissue using antigen retrieval and a thermal cycler // Biotechniques. 1996. Vol. 20, No 4. Р. 641-650.
  2. Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Петрова Е.С., Карпенко М.Н., Григорьев И.П., Сухорукова Е.Г., Колос Е.А., Гиляров А.В. Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии: руководство. 2-е изд., испр. и доп. / под ред. Д.Э. Коржевского. СПб.: СпецЛит, 2014. 118 с. [Korzhevskij D.Eh., Kirik O.V., Petrova E.S., Karpenko M.N., Grigor'ev I.P., Suhorukova E.G., Kolos E.A., Gilyarov A.V. Teoreticheskie osnovy i prakticheskoe primenenie metodov im-munogistohimii: rukovodstvo. 2-e izd., ispr. i dop. / pod red. D.Eh. Korzhevskogo. St. Petersburg: SpecLit, 2014. 118 р.].
  3. Shi S-R, Cote R.J., Taylor C.R. Antigen retrieval immunohistochemistry: past, present, and future // J. Histochem. Cytochem. 1997. Vol. 45. Р. 327-343.
  4. Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Сухорукова Е.Г., Колос Е.А., Карпенко М.Н., Суфиева Д.А., Назаренкова А.В. Молекулярная морфология. Методы флуоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии. СПб.: СпецЛит, 2014. 112 с. [Korzhevskij D.Eh., Kirik O.V., Suhorukova E.G., Kolos E.A., Karpenko M.N., Sufieva D.A., Nazarenkova A.V. Molekulyarnaya morfologiya. Metody fluorescentnoj i konfokal'noj lazernoj mikroskopii. St. Petersburg: SpecLit, 2014. 112 р.].
  5. Paulsen I.M.S., Dimke H, Frische S. A single simple procedure for dewaxing, hydration and heat-induced epitope retrieval (hier) for immunohistochemistry in formalin-fixed paraffin-embedded tissue // Eur. J. Histochem. 2015. Vol. 59, No 4. Р. 2532. doi: 10.4081/ejh.2015.2532.
  6. Baschong W, Suetterlin R, Laeng R.H. Control of autofluorescence of archival formaldehyde-fixed, paraffin-embedded tissue in confocal laser scanning microscopy (CLSM) // J. Histochem. Cytochem. 2001. Vol. 49. Р. 1565-1571.
  7. Long D.J. II, Buggs C. Microwave oven-based technique for immunofluorescent staining of paraffin-embedded tissues // J. Mol. Histol. 2008. Vol. 39, No 1. Р. 1$4.
  8. Robertson D., Savage K, Reis-Filho J.S., Isacke C.M. Multiple immunofluorescence labelling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue // BMC Cell Biol. 2008. Vol. 9, No 13. doi: 10.1186/1471- 2121-9-13.
  9. Zheng L, Schwartz C, Magidson V, Khodjakov A., Oliferenko S. The spindle pole bodies facilitate nuclear envelope division during closed mitosis in fission yeast // PLoS Biol. 2007. Vol. 5, No 7. Р. e170. doi.org/10.1371/journal.pbio.0050170.
  10. Kolthur-Seetharam U, Pradeepa M.M., Gupta N, Narayanaswamy R, Rao M.R. Spatiotemporal organization of AT- and GC-rich DNA and their association with transition proteins TP1 and TP2 in rat condensing spermatids // J. Histochem. Cytochem. 2009. Vol. 57, No 10. Р. 951-962.
  11. Maninova M, Vomastek T. Dorsal stress fibers, transverse actin arcs, and perinuclear actin fibers form an interconnected network that induces nuclear movement in polarizing fibroblasts // FEBS J. 2016. Vol. 283, No 20. Р. 3676-3693.
  12. Eidet J.R., Pasovic L, Maria R., Jackson C.J., Utheim T.P. Objective assessment of changes in nuclear morphology and cell distribution following induction of apoptosis // Diagn. Pathol. 2014. Vol. 9, No 92. doi: 10.1186/1746-1596-9-92.
  13. Тютина K.B., Скопичев В.Г., Боголюбов Д.С., Боголюбова И.О. Структурно-функциональная организация ядер секреторных клеток молочной железы у лактирующих и нелактирующих крыс // Ц и-тология. 2016. Т. 58, No 2. С. 143-149. [Tyutina K.V., Skopichev V.G., Bogolyubov D.S., Bogolyubova I.O. Strukturno-funkcional'naya organizaciya yader sekretornyh kletok molochnoj zhelezy u laktiruyushchih i nelaktiruyushchih krys. Citologiya, 2016, Vol. 58, No 2, рр. 143-149].
  14. Shi S-R, Cote R.J., Wu L, Liu C, Datar R, Shi Y., Liu D, Lim H, Taylor C.R. DNA extraction from archival formalinfixed, paraffin-embedded tissue sections based on the antigen retrieval principle: heating under the influence of pH // J. Histochem. Cytochem. 2002. Vol. 50. Р. 1005-1011.
  15. Коржевский Д.Э., Сухорукова Е.Г., Гилерович Е.Г., Петрова Е.С., Кирик О.В., Григорьев И.П. Преимущества и недостатки цинк-этанол-формальдегида как фиксатора для иммуногистохимических исследований и конфокальной лазерной микроскопии // Морфология. 2013. Т. 143, No 2. С. 81-85. [Korzhevskij D.Eh., Suhorukova E.G., Gilerovich E.G., Petrova E.S., Kirik O.V., Grigor'ev I.P. Preimushchestva i nedostatki cink-ehtanol-formal'degida kak fiksatora dlya immunogistohimicheskih issledovanij i konfokal'noj lazernoj mikroskopii, Morfologiya. 2013. Vol. 143, No 2, рр. 81-85].
  16. Dolman N.J, Kilgore J.A., Davidson MW. A review of reagents for fluorescence microscopy of cellular compartments and structures, part I: BacMam labeling and reagents for vesicular structures // Curr. Protoc. Cytom. 2013. Vol. 66: Unit 12.30. doi: 10.1002/0471142956.cy1230s65.
  17. Kilgore J.A., Dolman N.J., Davidson MW. A review of reagents for fluorescence microscopy of cellular compartments and structures, Part II: reagents for non-vesicular organelles // Curr. Protoc. Cytom. 2013. Vol. 66. Unit 12.31. doi: 10.1002/0471142956.cy1231s66.
  18. Сырцова M.A., Колос Е.А., Снегова B.A., Гусельникова В.В. Применение различных флуорес центных красителей для окраски ядер клеток в фиксированном биологическом материале // Медицинский академический журнал. 2014. Т. 14, № 2. С. 34-39. [Syrcova M.A., Kolos E.A., Snegova V.A., Gusel'nikova VV. Primenenie razlichnyh fluorescentnyh krasitelej dlya okraski yader kletok v fiksirovannom biologicheskom materiale. Medicinskij akademicheskij zhurnal, 2014, Vol. 14, No 2, рр. 34-39].
  19. Петрова Е.С., Исаева Е.Н., Коржевский Д.Э. МСК костного мозга крысы могут дифференцироваться в жировые к летки после аллотрансплантации в поврежденный седалищный нерв // Нейронаука для медицины и психологии: сб. / под ред. Е.В. Лосевой, А.В. Крючковой, Н.А. Логиновой. М.: МАКС Пресс, 2016. C. 328-329. [Petrova E.S., Isaeva E.N., Korzhevskij D.Eh. MSK kostnogo mozga krysy mogut differencirovat'sya v zhirovye kletki posle allotransplantacii v povrezhdennyj sedalishchnyj nerv, Nejronauka dlya mediciny i psihologii: sb. / pod red. E.V. Losevoj, A.V. Kryuchkovoj, N.A. Loginovoj. Moscow: MAKS Press, 2016, рр. 328-329].
  20. Nam S.K., Im J., Kwak Y, Han N, Nam K.H., Seo A.N., Lee H.S. Effects of fixation and storage of human tissue samples on nucleic Acid preservation // Korean J. Pathol. 2014. Vol. 48, No 1. P. 36-42.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Колос Е.А., Коржевский Д.Э., 2018

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 74760 от 29.12.2018 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах