Отправить статью по E-mail 
Влияние экстракта Phlomoides tuberosa (L.) Moench на структуру селезенки мышей при иммуносупрессии
- Авторы: Цыренова Д.З.1, Гуляев С.М.1, Хобракова В.Б.1
-
Учреждения:
- ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН
- Выпуск: Том 15, № 1 (2017)
- Страницы: 53-57
- Раздел: Статьи
- Статья получена: 17.04.2017
- Статья опубликована: 15.03.2017
- URL: https://journals.eco-vector.com/RCF/article/view/6175
- DOI: https://doi.org/10.17816/RCF15153-57
- ID: 6175
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Введение. Иммунная система чрезвычайно восприимчива к неблагоприятным внешним и внутренним факторам. В этой связи необходима коррекция иммунодепрессивных состояний иммунных органов с помощью комплексных и безопасных средств, таких как извлечения из лекарственных растений. Интерес в этом плане представляют растения, содержащие фенилпропаноиды. Ранее нами было показано, что экстракт из клубней зопника клубненосного (Phlomoides tuberosa L. Moench) проявляет иммуностимулирующую активность благодаря содержанию фенилпропаноидов.
Цель настоящего исследования — оценить влияние экстракта P. tuberosa на структуру селезенки при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии.
Материалы и методы. Эксперименты были проведены на мышах-самцах линии СВА масой 20–22 г. Иммунодефицит был смоделирован внутрижелудочным введением азатиоприна в дозе 50 мг/кг однократно в течение 5 дней. Экспериментальная группа животных получала исследуемый экстракт 1 раз в сутки внутрижелудочно в дозе 1 мг/кг в течение 14 дней на фоне азатиоприновой иммуносупрессии. Интактная группа получала очищенную воду в соответствии с аналогичной схемой. Данные были получены с использованием гистологического, морфометрического и статистического анализа.
Результаты. Установлено, что азатиоприн вызывал деструктивные изменения структуры лимфоидной ткани селезенки: площадь белой пульпы и толщина периартериальной лимфоидной муфты (ПАЛМ) были одинаково меньше — в 1,7 раза, диаметры лимфоидных узелков и герминативных центров были меньше соответственно в 2,6 и 1,7 раза по сравнению с негативным контролем. Введение животным исследуемого средства достоверно ограничивало развитие супрессивного действия цитостатика азатиоприна: площадь белой пульпы и толщина ПАЛМ селезенки мышей, получавших экстракт, были в 1,5 и 1,4 раза больше, диаметры лимфоидных узелков и герминативных центров были в 2,1 и 1,2 раза больше позитивного контроля.
Заключение. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что сухой экстракт P. tuberosa обладает выраженной иммуномодулирующей активностью, что обосновывает целесообразность его дальнейшего исследования с целью создания новых эффективных иммуномодуляторов.
Ключевые слова
Полный текст
Введение
Иммунная система чрезвычайно восприимчива к неблагоприятным внешним и внутренним факторам, а также ко многим лекарственным средствам [9]. Так, цитостатическая терапия злокачественных новообразований, аутоиммунных заболеваний, после трансплантации нередко приводит к дисфункции иммунной системы. В этой связи необходима коррекция иммунодепрессивных состояний тимуса и селезенки с помощью комплексных и безопасных средств. Такими средствами вполне могут служить извлечения из лекарственных растений. Они содержат, как правило, целый ряд биологически активных веществ, способных оказывать лечебное и восстановительное воздействие на организм, в частности органы иммунной системы [14]. Интерес в этом плане представляют растения, содержащие фенилпропаноиды. Они обладают широким спектром фармакологических свойств, в том числе иммуномодулирующей активностью [5]. Так, извлечения из зопника клубненосного (Phlomoides tuberosa) применяют в традиционной медицине как ранозаживляющее и общеукрепляющее средства [10]. Показано, что экстракт из клубней данного растения проявляет иммуностимулирующую активность благодаря содержанию фенилпропаноидов [2, 11]. Однако влияние экстракта Phlomoides tuberosa на структуру селезенки при иммуносупрессии не изучено.
Целью настоящего исследования явилось определение влияния сухого экстракта Phlomoides tuberosa на структуру селезенки мышей при иммуносупрессии.
Материалы и методы исследования
Эксперименты проводили на мышах-самцах линии CBA массой 20–22 г (питомник РАМН «Столбовая») в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986), приказом МЗ РФ № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики» (19.06.2003). Протокол исследований был согласован с локальным этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол № 2 от 05.09.2013).
Животные были распределены на три группы: 1) интактные мыши, 2) мыши с иммуносупрессией — контрольная группа (азатиоприн), 3) мыши с иммуносупрессией, получавшие экстракт P. tuberosa в дозе 200 мг/кг внутрижелудочно однократно в течение 14 дней — опытная группа. Животные 1-й и 2-й групп получали воду, очищенную по аналогичной схеме. Иммуносупрессивное состояние у животных 2-й и 3-й групп вызывали путем введения азатиоприна в дозе 50 мг/кг внутрижелудочно однократно в течение 5 дней [6]. На 20-е сутки животных выводили из эксперимента путем декапитации под эфирным наркозом, извлекали селезенку и помещали в 10 % раствор нейтрального формалина. Фиксированные образцы после гистологической обработки заливали в парафин [8]. Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 5 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином. Гистологические исследования проводили с помощью световой микроскопии (микроскоп Motic), морфометрию — с помощью программного обес печения Motic Images, 2000: определяли относительную площадь белой пульпы, толщину периартериальных лимфоидных муфт (ПАЛМ), средние диаметры лимфатических узелков (ЛУ) и герминативных центров [1].
Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами вариационной статистики с использованием параметрического t-критерия Cтьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При гистологическом исследовании селезенки мышей, получавших азатиоприн, обнаружены выраженные структурные изменения: ПАЛМ были асимметричной формы и неравномерной толщины; ЛУ принимали тоже неправильную форму (рис. 1, б).
Рис. 1. Селезенка мыши: а — интактная группа (фолликулярная артерия — 1, герминативный центр — 2, мантийная зона — 3, маргинальная зона — 4); б — контрольная группа (азатиоприн), неравномерные по толщине периартериальные лимфоидные муфты, асимметричные лимфоидные узелки. Увеличение × 100. Окраска гематоксилином и эозином
При морфометрическом анализе выявлено уменьшение объема лимфоидной ткани в белой пульпе: площадь и толщина ПАЛМ были одинаково меньше — в 1,7 раза, средние диаметры лимфоидных узелков и герминативных центров были меньше соответственно в 2,6 и 1,7 раза по сравнению с таковыми интактной группы (табл. 1).
Таблица 1. Влияние экстракта Phlomoides tuberosа на структуру селезенки мышей при азатиоприновой иммуносупрессии (M ± m), n = 10
Группы животных | Площадь белой пульпы, % | Толщина периартериальной лимфоидной муфты, мкм | Диаметр лимфоидных узелков, мкм | Диаметр герминативных центров, мкм |
Интактная | 18,3 ± 1,2 | 65,7 ± 3,2 | 238,3 ± 18,8 | 76,41 ± 5,9 |
Контрольная (азатиоприн) | 11,0 ± 0,9* | 44,8 ± 2,6* | 92,4 ± 4,8* | 45,3 ± 2,1* |
Опытная (азатиоприн + экстракт P. tuberosa) | 16,5 ± 1,2** | 62,3 ± 3,7** | 194,0 ± 12,3** | 53,9 ± 3,8 |
Примечание. Различия достоверны по сравнению с показателями: * интактной группы, ** контрольной группы, р < 0,05 | ||||
Введение животным экстракта P. tuberosа после иммуносупрессии азатиоприном восстанавливало лимфоидные структуры селезенки: в лимфоидных узелках обнаруживали центры размножения (рис. 2). Площадь белой пульпы и толщина ПАЛМ селезенки мышей, получавших экстракт, были в 1,5 и 1,4 раза больше, диаметры лимфоидных узелков и герминативных центров были в 2,1 и 1,2 раза больше таковых в контрольной группе.
Рис. 2. Селезенка мыши, получавшей экстракт P. tuberosa: герминативный центр — 1, мантийная зона — 2. Увеличение × 100. Окраска гематоксилином и эозином
Введение животным азатиоприна приводит к гипоплазии белой пульпы селезенки в результате усиления свободнорадикальных реакций, процессов апоптоза лимфоцитов, снижения уровня пролиферативной активности [3]. Наши данные по влиянию азатиоприна на морфофункциональное состояние селезенки согласуются с данными в работе В.Л. Лимонова и др. (2005), в которой показано снижение массы органа и процента фолликулов белой пульпы с герминативными центрами [7]. В результате проведенных исследований установлено, что введение экстракта P. tuberosа ограничивало иммуносупрессивное воздействие азатиоприна, сохраняло пролиферативную лимфоидную активность селезенки. Иммуномодулирующий эффект экстракта P. tuberosа обусловлен антиоксидантной, иммунотропной активностью фенилпропаноидов при азатиоприновой иммуносупрессии [4, 13, 15]. Полученные нами данные согласуются с результатами исследования А.Р. Шевцова и др. (2006), в котором показано восстановление морфофункционального состояния селезенки при экспериментальном синдроме длительного сдавления на фоне применения полифенолов манжетки обыкновенной (Alchimilla vulgaris L.) [12].
Выводы
- Введение мышам азатиоприна вызывает иммунодепрессивное воздействие на структуру селезенки, заключающееся в снижении уровня пролиферативной активности и уменьшении массы лимфоидных структур органа.
- Экстракт tuberosа ограничивает иммунодепрессивное влияние азатиоприна: стимулирует пролиферативную активность селезенки, восстанавливает нормальную структуру ее лимфоидных компонентов.
Об авторах
Дарима Золтоевнa Цыренова
ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН
Автор, ответственный за переписку.
Email: dtsyrenova@mail.ru
аспирант лаборатории экспериментальной фармакологии
Россия, Улан-УдэСергей Миронович Гуляев
ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН
Email: s-gulyaev@inbox.ru
канд. мед. наук, старший науч. сотр. лаборатории экспериментальной фармакологии
Россия, Улан-УдэВалентина Бимбаевна Хобракова
ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН
Email: val0808@mail.ru
д-р биол. наук, доцент, старший науч. сотр. лаборатории экспериментальной фармакологии
Россия, Улан-УдэСписок литературы
- Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии: учебное пособие. – М.: Медицина, 2002. [Bases of quantitative pathological anatomy: a textbook. Moscow: Meditsina; 2002. (In Russ.)]
- Гуляев С.М., Цыренова Д.З., Хобракова В.Б. Влияние Phlomoides tuberosa на структуру тимуса мышей при иммуносупрессии // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. – 2016. – № 12. – С. 41–44. [Gulyaev SM, Tsyrenova DZ, Khobrakova VB. [The influence of Phlomoides tuberosa extract on morhofunctional state of thymus in immunosupressive mice. Voprosy biologicheskoy, meditsinskoy i farma tsevticheskoy khimii. 2016;(12):41-44. (In Russ.)]
- Кащенко С.А., Золотаревская М.В. Изменения морфометрических показателей белой пульпы селезенки крыс под воздействием иммунотропных препаратов // Укр. мед. альм. – 2011. – Т. 14. – № 5. – С. 74–77. [Kashchenko SA, Zolotarevskaya MV. The changes of morphometric indexes of white pulp of rats’ spleen under influence of immunomodulate drugs. Ukr med al’m. 2011;14(5):74-77. (In Russ.)]
- Куркин В.А., Авдеева Е.В., Суворова А.В., Дубищев А.В. Актуальные проблемы и перспективы развития фитофармакологии и фитотерапии // Мед. альманах. – 2008. – № 4. – С. 41–44. [Kurkin VA, Avdeeva EV, Suvorova AV, Dubishchev AV. [Acute problems and development prospects of phytopharmacology and phytotherapy. Med. al’manakh. 2008;(4):41-44. (In Russ.)]
- Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Ежков В.Н. Фенилпропаноиды лекарственных растений. – Самара: Офорт, 2005. [Kurkin VA, Zapesochnaya GG, Ezhkov VN. Phenylpropanoids from medicinal plants. Samara: Ofort; 2005. (In Russ.)]
- Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. – М.: Медицина; 1985. [Lazareva DN, Alekhin EK. Immune stimulants. Moscow: Meditsina; 1985. (In Russ.)]
- Лимонов В.Л., Шурлыгина А.В., Робинсон М.В., и др. Морфологическое исследование почек и селезенки у мышей с иммунокомплексным гломерулонефритом, интактных и на фоне иммуносупрессивной терапии // Бюллетень СО РАМН. – 2005. – № 2. – С. 50–54. [Limo nov VL, Shurlygina AV, Robinson MV, et al. [Morphological re search of the kidneys and spleen in mice with immune complex glomerulonephritis, intact and in immunosuppression therapy. Byulleten’ SO RAMN. 2005;(2):50-54. (In Russ.)]
- Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. – Л.: Медицина, 1969. [Merkulov GA. Course of pathologic-histological technology. Leningrad: Meditsina; 1969. (In Russ.)]
- Сепиашвили Р.И. От иммунотерапии к персонализированной таргетной иммуномодулирующей терапии и иммунореабилитации // Аллергология и иммунология. – 2015. – Т. 16. – № 4. – С. 323–327. [Sepiashvili RI. From immunotherapy to personalized targeted immunomodulating therapy and immunorehabilitation. Aller gologiya i immunologiya. 2015;16(4):323-327. (In Russ.)]
- Хайдав Ц., Меньшикова Т.А. Лекарственные растения в монгольской медицине: Историко-медицинские исследования. – Улаанбаатар, 1985. [Khaydav Ts, Men’shikova TA. Medicinal plants in Mongolia: historical and medical research. Ulaanbaatar; 1985. (In Russ.)]
- Цыренова Д.З., Хобракова В.Б. Влияние сухого экстракта зопника клубненосного на фагоцитарную активность макрофагов при экспериментальной иммуносупрессии: Материалы международного форума «Клиническая иммунология и аллергология — междисциплинарные проблемы». – Казань, 2014. – С. 276–277. [Tsyrenova DZ, Khobrakova VB. [The influence of the dry extract from Phlomis tuberosa (L.) Moench on the phagocytic activity of macrophages in experimental immunosupression. (Conference proceedings) Materialy mezhdunarodnogo foruma “Klinicheskaya immunologiya i allergologiya – mezhdistsiplinarnye problem”. Kazan’; 2014. P. 276-277. (In Russ.)]
- Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Голубева И.А. Морфология селезенки в норме, при моделировании синдрома длительного сдавления и в условиях применения полифенолов манжетки обыкновенной // Вестник НГУ. Серия «Биология, клиническая медицина». – 2006. – Т. 4. – № 3. – С. 62–5. [Shevtsov AR, Golovnev VA, Golubeva IA. [The spleen morphology in normal state, during modelling of compression syndrome and under application of Alchemilla vulgaris polyphenols. Vestnik NGU. Seriya «Biologiya, klinicheskaya meditsina». 2006;4(3):62-5. (In Russ.)]
- Ahmad W, Jantan I, Kumolosasi E, Abbas Bukhari SN. Immunostimulatory effects of the standardized extract of Tinospora crispa on innate immune responses in Wistar Kyoto rats. Drug Des Devel Ther. 2015;9:2961-73.
- Sultan MT, Butt MS, Qayyum MM, Suleria HA. Immunity: plants as effective mediators. Crit Rev Food Sci Nutr. 2014;54(10):1298-308. doi: 10.1080/10408398.2011.633249.
- Harmatha J, Zidek Z, Kmonickova E, Smidrkal J. Immunobiological properties of selected natural and chemically modified phenylpropanoids. Interdisc Toxicol. 2011;4(1):5-10. doi: 10.2478/v10102-011-0002-1.
