Antimicrobial action of «instillagel» on the female genital tract microorganisms

Full Text

Введение

Воспалительные заболевания нижних отделов половых органов женщин являются самыми частыми в гинекологии и встречаются у 40-60% сексуально активных женщин. Они представлены вульвовагинитами, вагинитами, цервицитами, бактериальным вагинозом. Этиология этих заболеваний не всегда четко устанавливается, к тому же нередка смешанная инфекция.

Лечение воспалительных заболеваний гениталий обычно комплексное, включает антимикробный компонент. Нередко оно бывает недостаточно эффективным с периодическими рецидивами.

Препарат инстиллагель производства Фарко-Фарма (Германия) представляет собой смазывающее вещество, которое обладает обезболивающим и антимикробным действием. Применяется в урологии, гинекологии, акушерстве при манипуляциях на уретре, влагалище, шейке и полости матки, при эндоскопических исследованиях. Состав на 100 мл: лидокаин 2,0 г, хлоргексидин 0,05 г, метил-4-гидроксибензоат 0,06 г, пропил-4-гид- роксибензоат 0,025 г. Выпускается в одноразовых шприцах по 6 мл и по 11 мл. Область применения инстиллагеля в акушерстве и гинекологии включает предродовую санацию влагалища и шейки матки при диагностическом выскабливании стенок цервикального канала и полости матки, биопсии шейки матки, полипэктомии шейки матки, введении и удалении внутриматочных контрацептивов, лечении вагинитов, эндоцервицитов и эрозии шейки матки [1, 2, 4—6] Некоторые исследователи, такие как Н. Sperling et al., 2002, применяли этот препарат в целях местного лечения негонококковых уретритов у 32 мужчин и показали, что препарат инстиллагель может быть использован как альтернатива системному антибактериальному лечению негонококковых уретритов [7]. Ряд исследователей применяли инстиллагель в качестве местного обезболивающего средства при манипуляциях на уретре, шейке матки, внутриматочных процедурах [5, 8].

Целью нашей работы было изучение антимикробного действия инстиллагеля на свежевыделенные из генитального тракта штаммы бактерий, дрожжеподобных грибов, генитальных микоплазм и оценка лечебного эффекта геля у небеременных женщин с воспалительными заболеваниями влагалища.

Материалы и методы исследования

Антимикробную активность инстиллагеля in vitro исследовали при разведении геля дистиллированной водой в отношении 1:5, 1:10, 1:50, 1:100. Исследуемые культуры бактерий и дрожжеподобных грибов суспендировали в физиологическом растворе до концентрации 108 микробных тел на миллилитр (МТ/мл). К 1 мл разных разведений геля добавляли 0,1 мл приготовленных микробных взвесей. Использованы следующие свежевыделенные микроорганизмы: Streptococcus agalactiae — 8 изолятов, стрептококки других серологических групп — 2 изолята, Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium — 10 изолятов, Е. coli — 5 изолятов? Klebsiella pneumoniae — 4 изолята, Candida albicans — 7 изолятов. Всего исследовано 35 микробных культур.

После контакта микроорганизмов в течение двух, шести и 24 часов с разведениями геля делали высевы на плотные питательные среды (кровяной агар, среда Левина, среда Сабуро), посевы помещали в термостат на 24—36 часов, после этого учитывали рост колоний или отсутствие роста соответствующих видов микробов.

Действие инстиллагеля на генитальные микоплазмы исследовали в жидких и на плотных дифференциальных средах для выращивания микоплазм и уреаплазм. Жидкие питательны среды содержали индикатор феноловый красный и аргинин (для Mycoplasma hominis) или мочевину (для Ureaplasma urealyticum), а также необходимые для роста микоплазм добавки — лошадиную сыворотку и дрожжевой экстракт. Рост микоплазм учитывали по изменению цвета среды вследствие ее ощелачивания при ферментации аргинина или мочевины. Микоплазмоцидное действие инстиллагеля оценивали по отсутствию роста колоний микоплазм при высевах из жидких сред на плотные через 24, 48 и 72 часа из разведений геля 1:5, 1:10, 1:50, 1:100.

Непосредственное действие геля на микоплазмы на плотной среде осуществляли, нанося на поверхность засеянной среды тонкую пленку препарата. После инкубации в термостате в течение 72 часов в микроаэрофильных условиях подсчитывали под малым увеличением микроскопа количество выросших колоний микоплазм.

Действие инстиллагеля in vivo изучено при лечении небеременных женщин, страдающих вагинитом и/или бактериальным вагинозом. Под наблюдением было 44 женщины в возрасте от 18 до 42 лет с жалобами на выделения из половых органов, зуд, боли внизу живота, болезненное мочеиспускание. В результате клинико-лабораторного исследования установлен диагноз бактериального вагиноза у 33, неспецифического вагинита — у 6, кандидозного вагинита — у 5. При микробиологическом исследовании у всех 44 женщин были выделены Ureaplasma urealyticum, у 10 — Mycoplasma hominis, у 12 — Gardnerella vaginalis, у 6 — Candida albicans. У 5 женщин установлено с помощью ПЦР присутствие Chlamydia trachomatis, подтвержденное культуральным методом и методом ПЦР.

Для проведения лечения пациентки были разделены на две группы. Первую составили 32 женщины, которым местно применяли инстиллагель, вторую — 12 женщин, получавших традиционную местную терапию. Все пациентки системно получали вильпрафен или доксициклин, а также гепатопротекторы и витамины. В течение 5 дней в зеркалах интравагинально вводили инстиллагель в объеме 6 мл, на 2 часа вводили вагинальный тампон. Контроль эффективности лечения провели через 2 недели и через месяц.

Результаты

Опыты in vitro показали выраженное бактерицидное действие инстиллагеля на большинство исследованных микроорганизмов (табл. 1).

 

Таблица 1. Бактерицидное действие инстиллагеля на бактерии и дрожжеподобные грибы

Виды микро-организмов	Кол-во штаммов	Время контакта с гелем, ч	Бактерицидное действие разведений геля
			1:5	1:10	1:50
Sterptococcus agalactiae	8	2	8*	8	7
		6	8	8	8
		24	8	7	7
Streptococcus spp.	2	2	2	2	1
		6	2	2	2
		24	2	2	2
Enterococcus spp.	9	2	5	0	0
		6	7	2	1
		24	8	8	0
E. coli	5	2	1	1	0
		6	3	3	0
		24	4	2	3
Klebsiella pneumoniae	4	2	0	0	о
		6	4	4	0
		24	4	4	0
Candida albicans	7	2	6	7	3
		6	7	7	6
		24	7	7	7
Всего	35

* — количество штаммов.

 

Так, на 8 штаммов Streptococcus agalactiae разведение инстиллагеля 1:5 действовало бактерицидно через 2, 6 и 24 часа контакта, а разведения 1:10 и 1:50 также подавляло рост 7 из 8 штаммов стрептококка.

Такое же бактерицидное действие инстиллагеля отмечено и на другие виды стрептококков в разведении 1:5 и 1:10 при контакте 2, 6, 24 часа, а в разведении 1:50 бактерицидная активность при контакте в течение 2 часов обнаружена на один из 2-х штаммов стрептококка.

Энтерококки менее чувствительны к действию инстиллагеля, чем стрептококки. Даже разведение геля 1:5 бактерицидное действие оказывало не на все штаммы (на 5 из 9 при контакте 2 часа, на 8 из 9 — при контакте 24 часа). Разведение геля 1:50 практически не оказывало бактерицидного действия на энтерококки.

На грамотринательные бактерии (Е. coli, Кl. pneumoniae) антимикробное действие также было менее выражено, чем на стрептококки, так, например, двухчасовой контакт с любым разведением геля практически бактерицидного действия не оказывал, и лишь 24-часовой контакт с разведениями геля 1:5 и 1:10 подавлял рост грамотрицательных бактерий.

В отношении 7 клинических изолятов Candida albicans отмечено бактерицидное действие геля в разведении 1:5 в течение уже 2-х часов контакта.

Исследование действия инстиллагеля на генитальные микоплазмы показало микоплазмоцидное действие препарата на Ureaplasma urealyticum в разведении геля 1:5 и 1:10, так как не было изменения цвета засеянной среды, а высев через 24, 48 и 72 не дал роста колоний. На плотной среде тонкий слой нанесенного геля на засеянную Ureaplasma urealyticum среду не позволил вырасти колониям этого микроорганизма (табл. 2).

 

Таблица 2. Микоплазмоцидное действие инстиллагеля на генитальные микоплазмы

Виды микоплазм	Кол-во штаммов	Время учета роста микоплазм в высевах на плотные среды, ч	Бактерицидное действие разведений геля
			1:5	1:10	1:50	1:100
М. hominis	9	24	9*	9	0	0
		48	9	9	0	0
		72	9	9	0	0
Ureaplasma urealyticum	10	24	10	10	0	0
		48	10	10	0	0
		72	10	10	0	0

* — количество штаммов микоплазм.

 

Аналогичные результаты были получены при исследовании действия инстиллагеля на Mycoplasma hominis. Исследовано 9 изолятов М. hominis. Рост всех 9 изолятов М. hominis в жидкой среде подавлялся разведением геля 1:5 и 1:10, другие разведения геля не влияли на рост Mycoplasma hominis. По данным высева на плотные питательные среды указанные разведения инстиллагеля оказывали микоплазмоцидное действие на все исследованные изоляты.

Таким образом, небольшие разведения инстиллагеля 1:5 и 1:10 оказывают бактерицидное действие на большинство бактериальных видов, на грибы рода Candida и на генитальные микоплазмы in vitro. Вероятно, бактерицидное действие геля имеет место и in vivo при лечении женщин.

Результаты применения инстиллагеля при лечении 32 женщин были следующими. Боли, зуд, болезненное мочеиспускание прекратились на следующий день после первого же влагалищного введения геля.

После проведенного лечения уже на 2-й день терапии отмечено улучшения самочувствия, исчезновения жалоб на зуд и выделения из половых органов, на боли внизу живота. В контрольной группе жалобы на выделения из половых путей продолжались у 3 женщин, на зуд — у 2. Данные микробиологического исследования после лечения приведены в табл. 3.

 

Таблица 3. Результаты микробиологических исследований у пациенток после проведенного лечения (через 4 недели)

Данные микроскопии и посева	I группа n=32 число (%)	II группа n=12 число (%)	Всего число (%)
Нормальный микробиоценоз	30 (93,7)	11 (91,6)	41 (97,6)
Патологический микробиоценоз	2 (6,2)	1 (8,5)	3 (7,1)
Выделены:
U. urealyticum	1 (3,1)	5 (41,7)	6 (13,6)
М. hominis	0	0	0
G. vaginalis	0	0	0
Streptococcus agalactiae	1 (3,1)	1 (8,3)	2 (4,5)
Candida albicans	0	0	0
Chlamydia trachomatis	0	0	0

 

В результате лечения инстиллагелем улучшился микробиоценоз влагалища (нормальный физиологический микробиоценоз был отмечен у 93,7 % женщин). Не выявлено отрицательного влияния инстиллагеля на нормальную микрофлору влагалища. Особо следует отметить исчезновение после лечения U. urealyticum у 96,9 % пациенток. Отмечено действие инстиллагеля на М. hominis и дрожжеподобные грибы Candida, гарднереллы и стрептококки группы В. Полное клиническое выздоровление установлено у всех 32 пациенток, получавших вагинально инстиллагель.

Обсуждение

Лечение бактериального вагиноза или вагинита, особенно при наличии в отделяемом влагалища одновременно с обильной бактериальной микрофлорой также и генитальных микоплазм (M. hominis, U. urealyticum ), является сложной задачей. Назначение только антибактериальных препаратов нередко не только не купирует клинические симптомы и не приводит к выздоровлению, а, напротив, может усугубить и так нарушенный микробиоценоз влагалища [3]. Поэтому поиск препаратов, активных в отношении большинства микроорганизмов, колонизирующих влагалище при бактериальном вагинозе, и в то же время не нарушающих физиологическое равновесие между микробными видами, всегда было актуальным.

Частое неэффективное лечение воспалительных заболеваний нижних отделов гениталий побуждает расширять круг медикаментов, активных в отношении микроорганизмов — возбудителей этих процессов. Сочетание у препарата инстиллагель антимикробных и анестезирующих свойств привлекает внимание, так как нередко манипуляции в этой области болезненны.

Опыт немецких коллег по местному применению инстиллагеля при негонококковом уретрите у мужчин без системного назначения антибиотиков [7] позволяет рекомендовать этот препарат и при лечении бактериального вагиноза или вагинита, тем более что он не оказывает негативного воздействия на нормальный физиологичкский микробиоценоз влагалища.

Исследование in vitro бактерицидных (фунгицидных, микоплазмоцидных) свойств показало выраженное антимикробное действие инстиллагеля, а клинический эффект применения препарата был полным уже после первого интравагинального введения 6 мл препарата. Последующий микробиологический контроль показал эффективное антимикробное действие и in vivo.

Выводы

1. Препарат инстиллагель оказывает выраженное бактерицидное, фунгицидное и микоплазмоцидное действие на изоляты грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжеподобных грибов, генитальных микоплазм (М. hominis, U. urealyticum).
2. Лечение больных вагинитом, бактериальным вагинозом интаравагинальным введением инстиллагеля высоко эффективно, снимает все симптомы заболевания, при этом прекращается выделение возбудителей из клинических проб.
3. В 96,9% отмечена клиническая и микробиологическая эффективность препарата инстиллагель в отношении U. urealyticum.
4. Препарат инстиллагель не оказывает негативного влияния на микробиоценоз влагалища, в 93,7% нормализует нарушенный микробиоценоз.
5. Препарат инстиллагель ни в одном случае применения не дал побочных явлений.

About the authors

A. М. Savicheva

Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

М. A. Bashmakova

Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

S. L. Zatsiorskaya

Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

L. N. Novikova

Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

Z. M. Martikainen

Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

E. V. Rybina

Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

References

Supplementary files