Email this article Chlamydia Trachomatis detection in different urogenital samples
- Authors: Shalepo К.V.1, Shinitsyna E.V.1, Savitsheva A.N.1, Domeika M.2
-
Affiliations:
- Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS
- Institute of Clinical Bacteriology Sweden
- Issue: Vol 51, No 1 (2002)
- Pages: 95-100
- Section: Laboratory diagnostics
- URL: https://journals.eco-vector.com/jowd/article/view/90049
- DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD90049
- ID: 90049
Cite item
Abstract
The results of Chlamydia trachomatis detection in different urogenital samples (vagina, cervix, urethra, urine) are presented in this report. The study was carried out for the period of 1999 to 2000. A total of 397 women and 253 men were examined. Cervical, urethral and vaginal swabs from women, and urethral, first voided urine (FVU) specimens from men were tested.
For diagnosis of Chlamydia, trachomatis the following methods were used: polymerase chain reaction (PCR), direct immunofluorescence test (DIF) and cell culture (CC). In male samples, more often chlamydiae were detected in the urethra (11,6%), more rarely - in the FVU (6%). When female samples were tested, more often C. trachomatis was found in the vagina (18,4%), and less often - in the cervix (14. 4) and the urethra (8. 8%).
The sensitivity and specificity of the methods used to test urogenital samples were determined. The PCR sensitivity and specificity was shown to be 75 and 100% for C. trachomatis detection in the cervix, 75 and 97. 5% - in the female urethra, and 63 and 99% - in the vagina, respectively. The PCR sensitivity and specificity was found to be 78 and 100% in the male urethral specimens and 100 and 99. 6% in the FVU, respectively.
The sensitivity of cell culture method used for chlamydiae detection in cervical, female and male urethral samples was low - 33. 9, 47. 1 and 50% respectively. The CC specificity was 100%.
Full Text
До недавнего времени для обнаружения хламидий у женщин использовали Соскоб эпителиальных клеток цервикального канала, реже - Соскоб из уретры, у мужчин - только Соскоб эпителиальных клеток уретры. В последние годы наблюдается тенденция к поиску и дальнейшему использованию неинвазивных (нетравматичных) способов взятия материала для исследования.
Как показывают последние публикации [8, 11, 16, 17], первая порция мочи и материалы из влагалища могут быть использованы для диагностики генитальной хламидийной инфекции мужчин и женщин, особенно при исследовании их молекулярно-биологическими методами. В предыдущей статье мы описали чувствительность и специфичность разных методов, используемых для выявления хламидий [4].
Целью настоящей работы было изучение эффективности использования различных клинических материалов для обнаружения Chlamydia trachomatis.
Работа выполнялась в лаборатории микробиологии НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН (Санкт-Петербург, Россия) в рамках договора о сотрудничестве между НИИ АГ и Институтом медицинских наук Уппсальского университета (Уппсала, Швеция) в 1999-2001 годах.
Материалы и методы
Обследованные пациенты
Были исследованы клинические материалы от 397 женщин и 253 мужчин репродуктивного возраста, проходивших обследование в НИИ АГ им. Д. О. Отта РАМН, которые были разделены на три группы. Первую составили 197 женщин и 50 мужчин с ранее установленным в различных клиниках города диагнозом «хламидиоз». Вторую группу 200 женщин и 203 мужчины составили случайно выбранные пациенты, для которых проводилось скрининговое исследование. В третью группу вошли все пациенты, участвовавшие в программе обследования. Материалами для исследования служили отделяемое влагалища, соскобы эпителия цервикального канала и соскобы эпителия уретры у женщин и первая порция мочи и соскобы из уретры у мужчин.
Процедура взятия клинического материала у мужчин
При взятии клинического материала из уретры для метода прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) специальный ватный тампон вводили в мочеиспускательный канал на 2-4 см, вращали его в течение 15 секунд, вынимали и затем вращательным движением наносили материал на два предметных стекла с лунками.
Для методов полимеразной цепной реакции (ПЦР) и культуры клеток (КК) другим тампоном брали следующую порцию материала и опускали его в пробирку с транспортной средой (2-SP).
Первая порция свободно выпущенной мочи в количестве 10 мл помещалась в специальную пробирку.
Процедура взятия клинического материала у женщин
Отделяемое влагалища брали ватным тампоном с боковой и/или передней стенки, помещали его в пробирку с транспортной средой (2-SP) и исследовали методом ПЦР.
Материал из уретры исследовали методами ПИФ, ПЦР и КК, для чего специальный тампон вводили на 1,5-2 см в мочеиспускательный канал и вращали его в течение 15 секунд. При использовании метода ПИФ материал наносили вращательным движением тампона на два предметных стекла, для ПЦР и КК брали следующую порцию материала и опускали его в пробирку с транспортной средой (2-SP).
Соскоб из цервикального канала исследовали методами ПИФ, ПЦР и КК. Для удаления слизи из экзоцервикса шейку матки интенсивно протирали ватным тампоном. Специальный тампон вводили в цервикальный канал на 1-2 см и вращали несколько раз, нажимая на эндоцервикальную стенку. Для метода ПИФ вращательным движением наносили материал на два предметных стекла, а для методов ПЦР и КК брали следующую порцию материала и помещали его в пробирку с транспортной средой (2-SP).
Хранение проб
Стекла с исследуемым материалом высушивали на воздухе, фиксировали ацетоном при температуре 6±2°C и хранили в холодильнике (±2°C) не более 7 дней до исследования.
Пробирки с материалом для культурального и ПЦР исследования хранили при 2-8°C не более 24 часов. Для выделения ДНК и проведения ПЦР из пробирок отбирались аликвоты по 100 мкл. В случае необходимости более длительного хранения пробы замораживали при -70°C до проведения исследования.
Клинические материалы и методы, с помощью которых проводили выявление Chlamydia trachomatis, представлены в таблице 1.
Таблица 1. Лабораторные методы и клинические материалы, используемые для диагностики урогенитальной хламидийной инфекции
| женщины | мужчины | |||
вагина | цервикс | уретра | уретра | моча | |
ПЦР | / | / | / | V | / |
ПИФ |
| / | / | / |
|
КК |
| / | / |
|
|
Исследования методами ПЦР, ПИФ и КК, а также оценку диагностических тестов проводили способами, описанными ранее [4].
Результаты
При обследовании пациентов первой группы с ранее установленным диагнозом «хламидиоз» C. trachomatis были обнаружены у женщин в 34,5% (68/197) случаев, у мужчин - в 32% (16/50). У 22,8% (45/197) женщин хламидии выявлены в цервикальном канале, у 14,2% (28/197) в уретре, у 29,4% (50/197) в вагине. У мужчин положительные результаты получены при исследовании уретры - в 32% (16/50) случаев, а при исследовании первой порции мочи - в 22% (11/50). Результаты исследований представлены в таблице 2.
Таблица 2. Комбинации истинно положительных результатов обнаружения хламидий в различных материалах у пациентов I группы (197 женщин,50 мужчин)
Женщины | Число комбинаций | Мужчины | Число комбинаций | |||
Цервикс | Вагина | Уретра | Уретра | Моча | ||
— | — |
| 129 | — | — | 34 |
— | — | + | 6 | + | — | 5 |
— | + | — | 13 | + | + | 11 |
— | + | + | 4 |
|
|
|
+ | — | — | 4 |
|
|
|
+ | + | — | 23 |
|
|
|
+ | + | + | 18 |
|
|
|
Всего истинно положительных результатов | ||||||
45 | 58 | 28 | 68 | 16 | 11 | 16 |
При обследовании пациентов второй группы хламидии обнаружены у женщин в 10,5% (21/200) случаев, у мужчин - в 6,4% (13/ 203). При исследовании соскобных материалов из цервикального канала частота выявления хламидий составила 5,5% (11/ 200), из уретры - 3,5% (7/200), из влагалища - 7,5% (15/200). У 5,9% (12/203) мужчин хламидии обнаружены в уретре, у 2% (4/ 203) - в первой порции мочи. Результаты исследований представлены в таблице 3.
Таблица 3. Комбинации истинно положительных результатов обнаружения хламидий в различных материалах у пациентов II группы (200 женщин,203 мужчины)
Женщины | Число комбинаций | Мужчины | Число комбинаций | |||
Цервикс | Вагина | Уретра | Уретра | Моча | ||
— | — | — | 178 | — | — | 190 |
— |
| + | 3 | — | + | 1 |
— | + | — | 7 | + | — | 9 |
— | + | + | 1 | + | + | 3 |
+ | — | — | 4 |
|
|
|
+ | + | — | 4 |
|
|
|
+ | + | + | 3 |
|
|
|
Всегоистинно положительных результатов | ||||||
11 | 15 | 7 | 21 | 12 | 4 | 13 |
В третьей группе пациентов Chlamydia trachomatis были обнаружены у 22,6% (90/397) женщин и у 11,5% (29/253) мужчин. При исследовании разных клинических материалов получены следующие результаты: в соскобе эпителия цервикального канала хламидии обнаружены в 14,1% (56/397) случаев, в эпителии женской уретры - в 8,8% (35/ 397), в вагине - в 18,4% (73/397); в соскобе эпителия мужской уретры хламидии выявлены в 11,6%
(28/253) случаев, а в первой порции мочи — в 6% (15/253). Результаты исследований приведены в таблице 4.
Таблица 4. Комбинации истинно положительных результатов обнаружения хламидий в различных клинических материалах пациентов III группы (397 женщин,253 мужчины)
Женщины | Число комбинаций | Мужчины | Число комбинаций | |||
Цервикс | Вагина | Уретра | Уретра | Моча | ||
— | — | — | 307 | — | — | 224 |
— | — | + | 9 | — | + | 1 |
— | + | — | 20 | + | — | 14 |
— | + | + | 5 | + | + | 14 |
+ | — |
| 8 |
|
|
|
+ | + | — | 27 |
|
|
|
+ | + | + | 21 |
|
|
|
Всего истинно | положите. | льных резу | льтатов |
| ||
56 | 73 | 35 | 90 | 28 | 15 | 29 |
В таблицах 5,6,7 показана эффективность использования разных методов выявления Chlamydia trachomatis при исследовании разных клинических материалов: в таблице 5 приведены данные по чувствительности, специфичности, прогностической значимости положительного и отрицательного результата для пациентов I группы; в таблице 6 — для пациентов II группы; в таблице 7 — для всех обследованных пациентов.
Таблица 5. Эффективность выявления Chlamydia trachomatis в I группе пациентов (197 женщин,. 50 мужчин)
| Методы
| Чувствительность (%) | Специфичность (%) | ПЗ+ (%) | ПЗ- (%) |
Женщины | Цервикс ПЦР Crypt | 72,1 | 100 | 100 | 92,8 |
Цервикс ПЦР Pd1/Pd2 | 69,8 | 100 | 100 | 92,2 | |
Цервикс ПИФ Syva | 55,6 | 99,3 | 96,1 | 88,4 | |
Цервикс ПИФ Orion | 57,8 | 100 | 100 | 89,0 | |
Цервикс КК | 35,6 | 100 | 100 | 84,1 | |
Вагина ПЦР Crypt | 53,6 | 99,2 | 96,8 | 83,5 | |
Вагина ПЦР Pd1/Pd2 | 60,3 | 98,6 | 94,6 | 85,8 | |
Уретра ПЦР Crypt | 63,2 | 98,6 | 92,3 | 91,0 | |
Уретра ПЦР Pd1/Pd2 | 78,9 | 98,6 | 93,7 | 94,7 | |
Уретра ПИФ Syva | 59,6 | 100 | 100 | 94,0 | |
Уретра ПИФ Orion | 63,0 | 100 | 100 | 94,5 | |
Уретра КК | 50,0 | 100 | 100 | 88,7 | |
Мужчины | Уретра ПЦР Crypt | 75,0 | 100 | 100 | 89,5 |
Уретра ПЦР Pd1/Pd2 | 68,7 | 100 | 100 | 87,2 | |
Уретра ПИФ Syva | 93,7 | 97,1 | 93,7 | 97,1 | |
Уретра ПИФ Orion | 93,7 | 100 | 100 | 97,1 | |
Уретра КК | 68,7 | 100 | 100 | 87,2 | |
Моча ПЦР Crypt | 90,9 | 97,4 | 90,9 | 97,4 | |
Моча ПЦР Pd1/Pd2 | 100 | 97,2 | 90,9 | 100 |
Параллельно проводилось сравнение чувствительности и специфичности различных методов лабораторной диагностики при исследовании разных материалов. Самые высокие показатели чувствительности и специфичности показал метод ПЦР. Он универсален и может быть использован для любых материалов и проб. В качестве клинических материалов для обнаружения хламидий, как и следовало ожидать, лучше всего по чувствительности и специфичности подходят соскобы эпителия цервикального канала и уретры у женщин, и соскоб эпителия уретры у мужчин. Эти материалы при их правильном взятии содержат большое количество эпителиальных клеток, что необходимо для метода ПИФ, мало слизи, которая обычно мешает проведению ПЦР. Поэтому, при использовании этих материалов применимы все методы диагностики (ПИФ, ПЦР, КК), которые были высоко чувствительны и специфичны.
Отделяемое влагалища содержит большое количество слизи и разнообразных микроорганизмов, что мешает проведению диагностики с помощью методов КК и ПИФ. Чувствительность и специфичность ПЦР при исследовании вагинальных проб была 75% и 100% соответственно. Однако процедура взятия пробы из влагалища менее травматична. При проведении больших эпидемиологических исследований возможно использование для исследования на хламидии и отделяемого влагалища.
Первая порция мочи также вызывает некоторые сложности при исследовании ее на наличие Chlamydia trachomatis. Она содержит мало эпителиальных клеток, может содержать соли, слизь и некоторые микроорганизмы. При исследовании мочи хламидии выявлялись в небольшом проценте случаев и исключительно методом ПЦР. Чувствительность и специфичность ПЦР при исследовании мочи были довольно высокими 100% и 99,6% соответственно. Поэтому исследование первой порции мочи с использованием метода ПЦР возможно, тем более, что способ ее получения является нетравматичным и может быть выполнен пациентом самостоятельно.
Обсуждение
Известно что, Chlamydia trachomatis тропны к цилиндрическому эпителию. Поэтому наиболее часто хламидии у людей локализуются в органах, покрытых столбчатым эпителием: в уретре, цервикальном канале у женщин, в уретре у мужчин, в носоглотке у детей [2].
У женщин хламидии вызывают цервицит, уретрит, при восходящей инфекции развивается эндометрит, сальпингит, сальпингоофорит, которые могут приводить к развитию трубного бесплодия, а у беременных - к невынашиванию беременности [1, 3, 5].
У мужчин хламидии, в первую очередь, вызывают уретриты, реже - простатиты. При отсутствии адекватного лечения инфекция распространяется на смежные органы - семенные пузырьки, придатки яичка [9].
Таблица 6. Эффективность выявления Chlamydia trachomatis во II группе пациентов (200 женщин,203 мужчины)
| Методы | Чувствительность (%) | Специфичность (%) | ПЗ+ (%) | ПЗ- (%) |
Женщины | Цервикс ПЦР Crypt | 90,9 | 100 | 100 | 99,5 |
Цервикс ПЦР Pd1/Pd2 | 100 | 97,9 | 73,3 | 100 | |
Цервикс ПИФ Orion | 0 | 98,4 | 0 | 94,4 | |
Цервикс КК | 27,3 | 100 | 100 | 95,9 | |
Вагина ПЦР Crypt | 53,3 | 99,5 | 88,9 | 96,3 | |
Вагина ПЦР Pd1/Pd2 | 73,3 | 98,4 | 78,6 | 97,8 | |
Уретра ПЦР Crypt | 57,1 | 99,5 | 82,0 | 98,5 | |
Уретра ПЦР Pd1/Pd2 | 85,7 | 97,4 | 55,5 | 99,5 | |
Уретра ПИФ Orion | 0 | 99,0 | 0 | 96,5 | |
Уретра КК | 14,3 | 100 | 100 | 97,0 | |
Мужчины | Уретра ПЦР Crypt | 83,3 | 100 | 100 | 99,0 |
Уретра ПЦР Рd1/Рd2 | 75,0 | 97,4 | 64,3 | 98,4 | |
Уретра ПИФ Orion | 41,7 | 98,4 | 62,5 | 96,4 | |
Уретра КК | 25,0 | 100 | 100 | 95,5 | |
Моча ПЦР Crypt | 100 | 100 | 100 | 100 | |
Моча ПЦР Pd1/Pd2 | 100 | 100 | 100 | 100 |
Использование других клинических материалов, возможность получения их самостоятельно, привлекательны как для пациента, так и для врача, особенно при проведении скрининговых эпидемиологических исследований. Зарубежными авторами проведены различные исследования по определению пределов чувствительности и специфичности при использовании разных клинических материалов.
А. Bianchi и др. (1998) сравнили 28 коммерческих наборов для обнаружения Chlamydia trachomatis. Используя лабораторный штамм С. trachomatis серовар D, они показали, что ПИФ имеет предел обнаружения от 100 IFU (единиц) на 1 мл, ИФА - 500 IFU/мл. Тест-системы Vidas Chlamydia (ВіоМérіеих) и IDEIA (Dako) более чувствительные ИФА-наборы с пределом обнаружения 100 IFU/мл. Моментальные тесты, основанные на ИФА-технологии, имеют предел обнаружения более 10 000 IFU/мл (в диапазоне от 1000 до 100000), тогда как ПЦР-метод имеет предел обнаружения 10 IFU/мл [6].
Метод культуры клеток для обнаружения хламидий в первой порции мочи показал низкую чувствительность. Появление новых современных, в частности, молекулярно-биологических технологий привело к переоценке использования этого материала. Чувствительность, специфичность, прогностическая значимость положительного и отрицательного результата для диагностики Chlamydia trachomatis в первой порции мочи у женщин была оценена как 88,6%,99,7%,96,9% и 99,0% соответственно [8].
При исследовании цервикальных образцов в качестве референс-метода был выбран метод КК, чувствительность которого была 88%, специфичность 100%. При исследовании первой порции мочи в этой же исследуемой группе метод ЛЦР (Abbott Laboratories Chicago, III) имел чувствительность 94%, специфичность 100%, а метод ПЦР (Roche Атріісог PCR) 100% и 99,7% соответственно, а ПЦР (Cobas Атрlіcor СТ/NG) 94% и 99,2% [11].
Метод ЛЦР (Abbott Park, III) был высоко чувствителен при исследовании всех типов образцов (85,2% для образцов из влагалища, цервикального канала и мочи,92,6% - для образцов из уретры). Чувствительность методов КК (MicroTrak Syva, Palo Alto, Calif.) и ИФА (MicroTrak EIA, Syva), c последующим подтверждением методом ПИФ (MicroTrak, DFA), для образцов из цервикального канала составляла 74,1% и 74% соответственно. Однако для образцов из влагалища чувствительность методов КК и ИФА/ПИФ составляла 22,2% и 40,7% соответственно [17].
Особый интерес представляет использование первой порции мочи при бессимптомном хламидиозе у мужчин [13]. При исследовании материалов из цервикального канала и уретры методом КК для выявления Chlamydia trachomatis совокупность положительных результатов составила 87,3%, а при исследовании материалов из цервикального канала и мочи методом ЛЦР - 94,1% [12]. Некоторые авторы указывают на то, что исследование более одного материала от каждого пациента увеличивает точность постановки диагноза [16].
Наши данные свидетельствуют о том, что традиционно используемые материалы для выявления Chlamydia trachomatis (соскоб из цервикального канала, уретры у женщин и уретры у мужчин) возможно исследовать разными методами (ПИФ, КК, ПЦР). Причем достаточно высокими были показатели чувствительности и специфичности методов ПЦР и ПИФ. Культуральный метод диагностики при 100% специфичности имел низкую чувствителъ-
ностъ. При исследовании первой порции мочи у мужчин во всех группах чувствительность и специфичность методов ПЦР были высокими (приблизительно 100%), что позволяет рекомендовать использование этого клинического материала для выявления хламидий. Использование отделяемого влагалища в качестве материала для диагностики хламидийной инфекции ограничено, так как при высокой специфичности метода ПЦР при исследовании этих проб чувствительность его была низкой (в пределах 53%-73%). Но при проведении скрининговых эпидемиологических исследований эти материалы также могут бытъ использованы.
Таблица 7. Эффективность методов выявления. Chlamydia trachomatis в клинических материалах обследованных пациентов III группы (397 женщин,253 мужчины)
| Методы | Чувствительность (%) | Специфичность (%) | ПЗ+ (%) | ПЗ - (%) |
Женщины | Цервикс ПЦР Crypt | 75,9 | 100 | 100 | 96,3 |
Цервикс ПЦР Pd1/Pd2 | 75,9 | 98,8 | 91,1 | 96,3 | |
Цервикс ПИФ Syva | 49,0 | 99,4 | 96,1 | 87,1 | |
Цервикс ПИФ Orion | 46,4 | 99,1 | 89,7 | 91,9 | |
Цервикс КК | 33,9 | 100 | 100 | 90,3 | |
Вагина ПЦР Crypt | 53,5 | 99,4 | 95,0 | 90,5 | |
Вагина ПЦР Pd1/Pd2 | 63,0 | 98,5 | 90,2 | 92,2 | |
Уретра ПЦР Crypt | 69,2 | 99,4 | 92,3 | 96,8 | |
Уретра ПЦР Pd1/Pd2 | 75,0 | 97,5 | 76,5 | 97,3 | |
Уретра ПИФ Syva | 67,3 | 99,7 | 97,2 | 94,8 | |
Уретра ПИФ Orion | 61,7 | 99,1 | 88,1 | 96,2 | |
Уретра КК | 47,1 | 100 | 100 | 94,7 | |
Мужчины | Уретра ПЦР Crypt | 78,6 | 100 | 100 | 97,4 |
Уретра ПЦР Pd1/Pd2 | 71,4 | 97,8 | 80,0 | 96,5 | |
Уретра ПИФ Syva | 90,5 | 99,2 | 95,0 | 98,5 | |
Уретра ПИФ Orion | 71,4 | 98,7 | 87,0 | 96,5 | |
Уретра КК | 50,0 | 100 | 100 | 94,1 | |
Моча ПЦР Crypt | 93,3 | 99,6 | 93,3 | 99,6 | |
Моча ПЦР Pd1/Pd2 | 100 | 99,6 | 100 | 93,7 |
About the authors
К. V. Shalepo
Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS
Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg
E. V. Shinitsyna
Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg
A. N. Savitsheva
Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg
M. Domeika
Institute of Clinical Bacteriology Sweden
Email: info@eco-vector.com
Sweden, Uppsala
References
Supplementary files
