Activity of nucleolar organizers in endometrial glandular and surface epithelial cells in patients with external genital endometriosis

Full Text

Введение

Эндометриоз — распространенное гинекологическое заболевание, характеризующееся доброкачественным разрастанием ткани, сходной по морфологическому строению и функции с эндометрием, за пределами полости матки [1]. Широко признанной теорией происхождения наружного генитального эндометриоза является теория, предложенная Sampson в 1927 г., которая объясняет появление эндометриоидных гетеротопий забросом эндометриоидной ткани через маточные трубы во время менструации с их последующей имплантацией в малом тазу [1–3]. Благодаря данной теории сложились предпосылки для изучения различных биологических свойств клеток эутопического эндометрия у женщин с эндометриозом.

Цель исследования — оценить активность районов ядрышковых организаторов эпителиальных клеток эндометрия у женщин с наружным генитальным эндометриозом и без него.

Материалы и методы

Для проведения исследования из патологоанатомического отделения Клиники ЮУГМУ г. Челябинска были взяты парафиновые блоки биоптатов эндометрия, фиксированных в 10 % растворе формалина, от 68 женщин.

Все пациентки находились в репродуктивном возрасте, имели регулярный менструальный цикл, не получали гормонального лечения. На основании данных лапароскопии 38 женщин (группа I) имели признаки наружного генитального эндометриоза I, II, III стадий заболевания согласно классификации Американского общества репродуктивной медицины 1996 г. Средний возраст пациенток составил 33,1 ± 4,3 года. 30 женщин (группа II) без признаков наружного генитального эндометриоза на основании лапароскопического обследования были включены в контрольную группу, средний возраст в которой составил 34,5 ± 6,9 года.

В каждой группе эндометрий был распределен на подгруппы в зависимости от фазы цикла: А — эндометрий ранней стадии фазы пролиферации, В — эндометрий средней стадии фазы пролиферации, С — эндометрий поздней стадии фазы пролиферации, D — эндометрий ранней стадии фазы секреции, Е — эндометрий средней стадии фазы секреции, F — эндометрий поздней стадии фазы секреции. Для определения соответствия эндометрия стадии и фазе менструального цикла (Витт, 1960) был изготовлен серийный набор плоскопараллельных срезов толщиной 5–7 мкм, который был окрашен гематоксилином и эозином. Из исследования был исключен эндометрий с признаками гиперпластических изменений (гиперплазия, полипы эндометрия), острого воспаления и хронического воспаления.

После проведенного отбора для определения активности ядрышковых организаторов с каждого парафинового блока изготавливали другой набор серийных плоскопараллельных срезов толщиной 5–7 мкм, который окрашивали 50 % коллоидным раствором нитрата серебра (Московский химический завод имени Войкова) по методу Дж. Крокера (1983). В клетках железистого и покровного эпителия подсчитывали абсолютное число ядрышек, интрануклеолярных и экстрануклеолярных включений, абсолютное суммарное число включений на клетку при увеличении 1000 с масляной иммерсией и зеленым светофильтром [4].

Содержание ядрышек и интрануклеарных аргентаффинных включений определяли в 250 клетках железистого и в 250 клетках покровного эпителия в каждой фазе менструального цикла в обеих группах, выражая их в абсолютных значениях от общего числа изученных клеток. Также в железистом и покровном эпителии подсчитывали количество эпителиоцитов 1-го типа (клетки без экстрануклеолярных включений) и эпителиоцитов 2-го типа (клетки, содержащие экстрануклеолярные включения) в каждой фазе менструального цикла в обеих группах. Полученные значения сравнивали между основной и контрольной группами в каждой стадии менструального цикла.

Данные подвергали статистической обработке с помощью программы SPSS7. Для оценки достоверности различий использовали критерий Манна – Уитни.

Результаты и обсуждение

Из данных, представленных в табл. 1 и 2, следует, что в железистом и покровном эпителии у женщин с наружным генитальным эндометриозом в поздней стадии фазы пролиферации количество ядрышек, интрануклеолярных включений, суммарное число включений было достоверно выше по сравнению с контрольной группой (р < 0,0001). В клетках покровного эпителия в среднюю стадию фазы пролиферации обнаружено достоверно большее число экстрануклеолярных включений у пациенток с наружным генитальным эндометриозом (р < 0,005), а также достоверно большее количество эпителиоцитов 2-го типа (р < 0,005). На наш взгляд, усиление активности транскрипции ядрышковых организаторов обусловлено повышенной пролиферативной активностью клеток в эндометрии женщин с эндометриозом, что согласуется с данными литературы [5, 6].

 

Таблица 1. Число ядрышек, интрануклеолярных и экстрануклеолярных включений, а также сумма интрануклеарных аргентаффинных гранул в клетках железистого эпителия эндометрия в различные фазы менструального цикла у женщин с наружным генитальным эндометриозом и без него

Table 1. The number of nucleoli and intranucleolar and extranucleolar inclusions, as well as the sum of argentaffin intranuclear granules in endometrial glandular epithelial cells in women with external genital endometriosis and without it at different stages of the menstrual cycle

Показатели активности районов ядрышковых организаторов

Исследуемая группа пациенток

IА (n = 250)

IIА (n = 250)

IВ (n = 250)

IIВ (n = 250)

IС (n = 250)

IIС (n = 250)

ID (n = 250)

IID (n = 250)

IE (n = 250)

IIE (n = 250)

IF (n = 250)

IIF (n = 250)

Число ядрышек на клетку железистого эпителия

2,040 ± 0,051

1,940 ± 0,058

2,740 ± 0,073

2,800 ± 0,056

3,650 ± 0,099**

2,980 ± 0,070**

2,420 ± 0,064

2,260 ± 0,062

2,620 ± 0,050**

2,000 ± 0,041**

2,610 ± 0,047**

2,940 ± 0,058**

Число интрануклеолярных включений на клетку железистого эпителия

3,320 ± 0,098

3,160 ± 0,101

5,420 ± 0,154

5,440 ± 0,137

7,400 ± 0,206**

5,900 ± 0,149**

5,205 ± 1,161**

4,100 ± 0,122**

4,860 ± 0,100**

3,290 ± 0,070**

4,300 ± 0,080**

5,600 ± 0,100**

Число экстрануклеолярных включений на клетку железистого эпителия

0,130 ± 0,023

0,160 ± 0,026

0,120 ± 0,230

0,150 ± 0,025

0,400 ± 0,036

0,310 ± 0,030

0,140 ± 0,028*

0,060 ± 0,017*

0,370 ± 0,035**

0,030 ± 0,011**

0,200 ± 0,260

0,200 ± 0,290

Суммарное число включений на клетку железистого эпителия

3,440 ± 0,106

3,320 ± 0,109

5,540 ± 0,159

5,700 ± 0,145

7,810 ± 0,218**

6,220 ± 0,155**

5,400 ± 0,169**

4,170 ± 0,126**

5,230 ± 0,110**

3,320 ± 0,072**

4,500 ± 0,087**

5,880 ± 0,105**

 

Таблица 2. Число ядрышек, интрануклеолярных и экстрануклеолярных включений, а также сумма интрануклеарных аргентаффинных гранул в клетках покровного эпителия эндометрия в различные фазы менструального цикла у женщин с наружным генитальным эндометриозом и без него

Table 2. The number of nucleoli and intranucleolar and extranucleolar inclusions, as well as the sum of argentaffin intranuclear granules in endometrial surface epithelial cells in women with external genital endometriosis and without it at different stages of the menstrual cycle

Показатели активности районов ядрышковых организаторов

Исследуемая группа пациенток

IА (n = 250)

IIА (n = 250)

IВ (n = 250)

IIВ (n = 250)

IС (n = 250)

IIС (n = 250)

ID (n = 250)

IID (n = 250)

IE (n = 250)

IIE (n = 250)

IF (n = 250)

IIF (n = 250)

Число ядрышек на клетку покровного эпителия

1,540 ± 0,038

1,520 ± 0,034

2,520 ± 0,057

2,460 ± 0,039

3,310 ± 0,052**

2,890 ± 0,048**

2,080 ± 0,057

2,060 ± 0,051

2,440 ± 0,064**

2,050 ± 0,430**

2,580 ± 0,055**

2,940 ± 0,051**

Число интрануклеолярных включений на клетку покровного эпителия

2,480 ± 0,070

2,570 ± 0,073

4,160 ± 0,098

4,330 ± 0,078

6,310 ± 0,089**

4,840 ± 0,082**

4,200 ± 0,115

4,310 ± 0,086

4,570 ± 0,116**

3,360 ± 0,068**

3,840 ± 0,088**

5,500 ± 0,106**

Число экстрануклеолярных включений на клетку покровного эпителия

0,070 ± 0,019

0,030 ± 0,010

0,200 ± 0,027*

0,140 ± 0,025*

0,230 ± 0,033

0,240 ± 0,027

0,060 ± 0,015

0,080 ± 0,018

0,320 ± 0,034**

0,080 ± 0,017**

0,260 ± 0,040**

0,420 ± 0,038**

Число включений на клетку покровного эпителия

2,560 ± 0,077

2,600 ± 0,077

4,360 ± 0,106

4,460 ± 0,081

6,540 ± 0,105**

5,080 ± 0,091**

4,260 ± 0,119

4,400 ± 0,093

4,880 ± 0,122**

3,440 ± 0,073**

4,100 ± 0,102**

5,920 ± 0,114**

Примечание. ** достоверность различий р < 0,0001; * достоверность различий р < 0,05. I — группа женщин с наружным генитальным эндометриозом. II — контрольная группа. A — ранняя стадия фазы пролиферации; B — средняя стадия фазы пролиферации; C — поздняя стадия фазы пролиферации; D — ранняя стадия фазы секреции; E — средняя стадия фазы секреции; F — поздняя стадия фазы секреции.

 

В клетках железистого эпителия пациенток с наружным генитальным эндометриозом и покровного эпителия средней стадии фазы секреции количество интрануклеолярных включений и экстрануклеолярных включений, эпителиоцитов 2-го типа было достоверно выше (р < 0,0001) по сравнению с контрольной группой. Также в группе женщин с наружным генитальным эндометриозом в железистом и покровном эпителии эндометрия в среднюю стадию фазы секреции обнаружено достоверно большее количество ядрышек, интрануклеолярных и экстрануклеолярных включений, эпителиоцитов 2-го типа (р < 0,0001).

Полагаем, что усиление рибосомального синтеза в клетках эпителия эндометрия в раннюю и среднюю стадии фазы секреции связано с повышенной секрецией матриксных металлопротеиназ, которые могут способствовать миграции, адгезии и инвазии клеток эндометрия за пределами полости матки, что отражено в ряде исследований [2, 7, 8].

В эндометрии поздней стадии фазы секреции количество ядрышек, инрануклеолярных включений и суммарное число включений в клетках покровного и железистого эндометрия было достоверно выше (р < 0,0001) у женщин в контрольной группе, без эндометриоза. В клетках покровного эпителия было выявлено достоверно большее количество экстрануклеолярных включений, клеток 2-го типа в позднюю стадию фазы секреции (р < 0,0001). Мы полагаем, что более высокая активность рибосомального синтеза в позднюю стадию фазы секреции в группе женщин без наружного генитального эндометриоза связана с процессами апоптоза, которые способствуют элиминации клеток эндометрия в позднюю стадию фазы секреции и менструальную фазу. Более низкую активность рибосомального синтеза в клетках эпителия эндометрия у женщин с наружным генитальным эндометриозом мы объясняем снижением апоптотической активности, что согласуется с рядом исследований [3, 7, 9, 10]. Супрессия апоптоза в эпителиальных клетках эндометрия в позднюю стадию фазы секреции у женщин с наружным генитальным эндометриозом обеспечивает сохранение жизнеспособных клеток, которые могут служить потенциальным источником для развития наружного генитального эндометриоза.

Таким образом, представленные различия степени напряженности рибосомального синтеза в клетках покровного и железистого эндометрия у женщин с наружным генитальным эндометриозом, обеспечивающие увеличение общего количества эпителиоцитов эндометрия, повышение их адгезивной, инвазивной способностей [2, 7, 8, 10] и удлинение продолжительности жизни [3, 7, 9, 11], вероятно, создают условия для формирования эндометриоидных гетеротопий и развития наружного генитального эндометриоза.

Полученные различия в активности ядрышковых организаторов клеток железистого и покровного эпителия у женщин с наружным генитальным эндометриозом и без него могут представлять клинический интерес в качестве диагностического критерия наличия наружного генитального эндометриоза.

About the authors

Evgeny L. Kurenkov

South-Urals State Medical University

Author for correspondence.
Email: kurenkovel@chelsma.ru

MD, PhD, DSci (Medicine), Professor, the Head of the Department of Human Anatomy

Russian Federation, Chelyabinsk

Elena V. Igenbaeva

South-Urals State Medical University

Email: bulba2606@mail.ru

MD. The Gynecological Department, the Clinic

Russian Federation, Chelyabinsk

Tatyana V. Uzlova

South-Urals State Medical University

Email: tatiana.uzlova@mail.ru

MD, PhD, DSci (Medicine), Professor. The Department of Obstetrics and Gynecology

Russian Federation, Chelyabinsk

References

Supplementary files