Отправить статью по E-mail 
Разработка и валидация методики количественного определения аторвастатина в клетках линии HepG2 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
- Авторы: Ерохина П.Д.1, Мыльников П.Ю.1, Ганина С.О.1, Коняхин Е.А.1, Щулькин А.В.1, Слепнев А.А.1, Якушева Е.Н.1
-
Учреждения:
- Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
- Выпуск: Том 30, № 2 (2022)
- Страницы: 149-158
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья получена: 17.02.2022
- Статья одобрена: 13.04.2022
- Статья опубликована: 29.06.2022
- URL: https://journals.eco-vector.com/pavlovj/article/view/100986
- DOI: https://doi.org/10.17816/PAVLOVJ100986
- ID: 100986
Цитировать
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Аннотация
Введение. Полипептид, транспортирующий органические анионы, 1B1 (англ.: organic anion transporting polypeptide, OATP1B1) ― это белок-переносчик, который играет важную роль в фармакокинетике веществ, являющихся его субстратами, регулируя их проникновение в гепатоциты. Функциональная активность данного белка оценивается по транспорту маркерных субстратов, например, аторвастатина, на линиях клеток, гиперэкспрессирующих OATP1B1, таких как HepG2 (гепатоцеллюлярная карцинома человека).
Цель. Разработка и валидация методики количественного определения аторвастатина в клетках линии HepG2 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим (МС/МС) детектированием.
Материалы и методы. Работа выполнена на ВЭЖХ-хроматографе с МС/МС детектором. Условия хроматографического анализа: предколонка Selectra C18 Guard Cartridges SLC-18GDC46-5UM, хроматографическая колонка UCT Selectra C18 4,6 mm × 100 mm 5 um, 100 А, скорость потока ― 0,3 мл/мин, термостатирование колонки 35°С. Объём вводимых проб ― 2 мкл, время анализа ― 10 мин. Использовался градиентный режим элюирования: соотношение раствора 0,1% муравьиной кислоты и ацетонитрила составило на 0 и 0,3 мин 35% и 65% соответственно; 0,6 и 5 мин ― 5% и 95%; 5,05 и 8 мин ― 35% и 65%. Время удерживания аторвастатина составило 4,53 мин. Условия детектирования аторвастатина: положительный режим ионизации; напряжение спрея ― 3500 В; режим детектирования ― мониторинг множественных реакций 559,30 m/z → 466,20 m/z, 559,30 m/z → 440,20 m/z; энергия столкновения ― 17 В, фрагментация источника ― 0; давление газа, индуцирующее диссоциацию, ― 2 мТорр.
Результаты. Разработанная биоаналитическая методика была валидирована по следующим параметрам: линейность, селективность, точность, прецизионность, нижний предел количественного определения, перенос пробы, стабильность образцов, матричный эффект. Подтверждённый диапазон методики в лизате клеток составил 0,5–200 нмоль/л.
Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения аторвастатина в лизате клеток линии HepG2 методом ВЭЖХ-МС/МС.
Ключевые слова
Полный текст
Об авторах
Пелагея Дмитриевна Ерохина
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Email: erokhina.pelageya96@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-4802-5656
SPIN-код: 1480-6854
Россия, Рязань
Павел Юрьевич Мыльников
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Email: dukeviperlr@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-7829-2494
SPIN-код: 8503-3082
Россия, Рязань
Светлана Олеговна Ганина
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Email: svetlanaganina23@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-4408-6454
Россия, Рязань
Егор Андреевич Коняхин
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Email: egor_konyahin@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9025-130X
Россия, Рязань
Алексей Владимирович Щулькин
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Автор, ответственный за переписку.
Email: alekseyshulkin@rambler.ru
ORCID iD: 0000-0003-1688-0017
SPIN-код: 2754-1702
д.м.н., доцент
Россия, РязаньАлександр Александрович Слепнев
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Email: a.slepnev@rzgmu.ru
ORCID iD: 0000-0003-0696-6554
к.б.н., доцент
Россия, РязаньЕлена Николаевна Якушева
Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
Email: e.yakusheva@rzgmu.ru
ORCID iD: 0000-0001-6887-4888
SPIN-код: 2865-3080
д.м.н., профессор
Россия, РязаньСписок литературы
- Alam K., Crowe A., Wang X., et al. Regulation of Organic Anion Transporting Polypeptides (OATP) 1B1- and OATP1B3-Mediated Transport: An Updated Review in the Context of OATP-Mediated Drug-Drug Interactions // International Journal of Molecular Sciences. 2018. Vol. 19, № 3. P. 855. doi: 10.3390/ijms19030855
- König J., Cui Y., Nies A.T., et al. Localization and genomic organization of a new hepatocellular organic anion transporting polypeptide // The Journal of Biological Chemistry. 2000. Vol. 275, № 30. P. 23161–23168. doi: 10.1074/jbc.M001448200
- Roth M., Obaidat A., Hagenbuch B. OATPs, OATs and OCTs: the organic anion and cation transporters of the SLCO and SLC22A gene superfamilies // British Journal of Pharmacology. 2012. Vol. 165, № 5. P. 1260–1287. doi: 10.1111/j.1476-5381.2011. 01724.x
- Щулькин А.В., Попова Н.М., Черных И.В. Оригинальные и воспроизведенные лекарственные препараты: современное состояние проблемы // Наука молодых (Eruditio Juvenium). 2016. № 1. С. 30–35.
- Черных И.В., Щулькин А.В., Гацанога М.В., и др. Разработка ВЭЖХ методики количественного определения этилметилгидроксипиридина сукцината в плазме крови крыс и кроликов // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2015. № 1. C. 62–66.
- Изучение биоэквивалентности воспроизведенных лекарственных средств. В кн.: Руководство по экспертизе лекарственных средств. Т. I. М.: Гриф и К; 2014. С. 174–215.
- In Vitro Drug Interaction Studies ― Cytochrome P450 Enzyme- and Transporter Mediated Drug Interactions Guidance for Industry. 2020. Доступно по: https://www.fda.gov/media/134582/download. Ссылка активна на 17.02.2022.
- Guidance for Industry. Drug Interaction Studies ― Study Design, Data Analysis, Implications for Dosing, and Labeling Recommendations. 2012. Доступно по: https://www.xenotech.com/wp-content/uploads/2020/ 07/2012-FDA-DDI-Guidance.pdf. Ссылка активна на 17.02.2022.
- Bioanalytical method validation. Guidance for Industry. 2018. Доступно по: https://www.fda.gov/files/drugs/published/Bioanalytical-Method-Validation-Guidance-for-Industry.pdf. Ссылка активна на 17.02.2022.
- Guideline on bioanalytical method validation. 2015. Доступно по: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/ guideline-bioanalytical-method-validation_en.pdf. Ссылка активна на 17.02.2022.
- Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 85 «Об утверждении Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза. Доступно по: https://www.alta.ru/tamdoc/16sr0085/. Ссылка активна на 17.02.2022.
- Stieger B., Hagenbuch B. Organic anion-transporting polypeptides // Current Topics in Memranes. 2014. Vol. 73. P. 205–232. doi: 10.1096/B978-0-12-800223-0.00005-0
- Summary of Product Characteristics. Доступно по: https://www.ema.europa.eu/en/documents/product-information/prezista-epar-product-information_en.pdf. Ссылка активна на 17.02.2022.
- Neuvonen P.J., Niemi M., Backman J.T. Drug interactions with lipid-lowering drugs: Mechanisms and clinical relevance // Clinical Pharmacology & Therapeutics. 2006. Vol. 80, № 6. P. 565–581. doi: 10.1016/j.clpt.2006.09.003
- Wadhwa K., Rana A.C. A review on liquid chromatographic methods for the bioanalysis of atorvastatin // Future Journal of Pharmaceutical Sciences. 2021. Vol. 7. P. 4. doi: 10.1186/s43094-020-00146-7
- Crevar–Sakač M., Vujić Z., Brborić J., et al. An improved HPLC method with the aid of a chemometric protocol: simultaneous determination of atorvastatin and its metabolites in plasma // Molecules. 2013. Vol. 18, № 3. P. 2469–2482. doi: 10.3390/molecules18032469
- Carter S.J., Ferecskó A.S., King L., et al. A mechanistic modelling approach for the determination of the mechanisms of inhibition by cyclosporine on the uptake and metabolism of atorvastatin in rat hepatocytes using a high throughput uptake method // Xenobiotica. 2020. Vol. 50, № 4. P. 415–426. doi: 10.1080/00498254.2019.1652781
- Shu N., Hu M., Liu C., et al. Decreased exposure of atorvastatin in diabetic rats partly due to induction of hepatic Cyp3a and Oatp2 // Xenobiotica. 2016. Vol. 46, № 10. P. 875-881. doi: 10.3109/00498254.2016.1141437
Дополнительные файлы
