Влияние орального гормонального контрацептива «жанин» на функциональную активность гликопротеина-Р

Аннотация

В исследовании на кроликах изучено влияние комбинированного орального контрацептива «Жанин» на функциональную активность эффлюксного белка-транспортера гликопротеина-Р (Pgp). Активность Pgp оценивали методом анализа фармакокинетики маркерного субстрата фексофенадина. Установлено, что введение препарата «Жанин» в течение 14 и 21 дня приводит к ингибированию функциональной активности Рgp.

Полный текст

По данным Всемирной организации здравоохранения прием оральных гормональных контрацептивов считается одной из самых распространенных форм контрацепции [14]. По различным оценкам в России их применяют от 8 до 13% женщин [1, 8]. Наиболее часто назначаются оральные контрацептивы, в состав которых входят различные комбинации эстрогенов и гестагенов. Эстрогенным компонентом комбинированных оральных контрацептивов чаще всего является этинилэстрадиол. А гестагенный компонент представлен различными синтетическими гестагенами, самыми распространенными из которых являются линэстренол, левоноргестрел, гестоден, ципротерона ацетат, диеногест, дроспиренон [9]. По результатам анализа региональных, национальных и глобальных показателей в большинстве развитых стран в ближайшие годы можно прогнозировать рост приверженности к гормональной контрацепции [17]. Поскольку контрацептивы назначаются длительными курсами, велика вероятность того, что в период их приема может возникнуть необходимость фармакотерапии других заболеваний [6]. Это, несомненно, влечет за собой риск возникновения межлекарственных взаимодей ствий и может быть одной из причин изменения эффективности проводимой терапии при совместном назначении лекарственных средств и проявления нежелательных лекарственных реакций. Основным направлением в решении данной проблемы является оценка возможных фармакокинетических взаимодействий, для чего необходимо учитывать функциональное состояние системы биотрансформации и транспортеров лекарственных средств [4]. Одним из основных транспортеров ксенобиотиков и ряда биобиотиков является гликопротеин-Р ^gp), который представляет собой эффлюксный АТФ-зависимый белок-транспортер, участвующий в переносе субстратов из клетки, а также препятствующий их всасыванию [19]. Рgp локализован на мембране энтеро-цитов, в гепатоцитах, эпителиоцитах почечных канальцев и коры надпочечников, эндотелиоцитах гистогематических барьеров. Известно, что многие гормональные вещества, например половые стероиды, глюкокортикоиды, тиреоидные гормоны способны модулировать функциональную активность и экспрессию Pgp [5, 12, 16]. Однако влияние комбинированных оральных контрацептивов на белок-транспортер изучено недостаточно. 65 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №4, 2013 г. Целью настоящего исследования является изучение влияния монофазного комбинированного орального контрацептива «Жанин» на функциональную активность Pgp в эксперименте. Материалы и методы Работа выполнена на 10 половозрелых кроликах-самках породы шиншилла, массой 4500±200 г., находящихся в состоянии течки. Драже «Жанин» (0,03 мг этини-лэстрадиола и 2,0 мг диеногеста; производитель: «BAYER SCHERING PHARMA AG», Германия) вводили животным per os в дозах 6,5 мкг/кг массы этинилэстрадиола и 450 мкг/кг массы диеногеста 1 раз в сутки в 12 часов дня. За сутки до начала эксперимента, через 14 и 21 день введения препарата у кроликов определяли функциональную активность Pgp по фармакокинетике его маркерного субстрата - фексофе-надина. Фексофенадин («Телфаст» 180 мг; производитель: Aventis Pharma, Италия) вводили животным перорально с помощью металлического зонда в дозе 67,5 мг/кг массы [3, 10]. Через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 и 24 часа от момента введения препарата из ушной вены кроликов забирали кровь в объеме 5 мл. Для получения плазмы пробы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут и хранили до анализа при температуре -290С. Содержание фексофе-надина в плазме крови определяли методом ВЭЖХ на хроматографе «Стайер» с ультрафиолетовым детектором и колонке «Beckman Coulter» 4,6*250 мм, зернением 5 мкм. Экстракцию и хроматографирование маркерного субстрата осуществляли по методу Раменской Г.В. с соавт. [7] в модификации Черных И.В. [11]. Анализ выполняли при длине волны 220 нм и скорости подвижной фазы 1 мл/мин. Количественное определение фексо-фенадина выполняли по методу абсолютной калибровки по высоте пиков с использованием стандарта фексофенадина (Strasbourg cedex). Примененный метод хроматографического анализа обладал следующими характеристиками: время удерживания - 13,1 мин; предел обнаружения фексофенадина в плазме крови 50 нг/мл. Расчет концентрации фексофенадина осуществляли с помощью программы «Мультихром». Фармакокинетические параметры - максимальную концентрацию (Cmax, нг/мл), время достижения максимальной концентрации (ТтЕК, ч), период полувы-ведения (Т1/2, ч), площадь под фармакокинетической кривой концентрация-время (AUC0-t нг*ч/мл; AUCo-M, нг*ч/мл), среднее время удерживания (MRT24, ч; MRT, ч), константу элиминации (Kel, 1/ч), общий клиренс (Cl, л/ч) объем распределения (Vd, л) рассчитывали модельно-независимым методом с использованием программы Kinetica 5.0. Коэффициент абсорбции (Cmax/AUC0-M) рассчитывали с помощью офисного пакета «Microsoft Excel 2010». Уровень половых гормонов определяли радиоиммунным методом в ЦНИЛ ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России. Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием программы Statistica 8.0. Характер распределения данных определяли по критерию Шапиро-Уилка. Наличие статистически достоверных межгрупповых различий определяли по критерию Нью-мена-Кейлса после проведения дисперсионного анализа повторных измерений (тест ANOVA - для показателей, имеющих нормальное распределение, критерий Фридмана - для показателей, распределение которых отличалось от нормального). Полученные данные представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной ошибки средней арифметической в случае нормального распределения признака или в виде медианы, верхнего и нижнего квартиля - при распределении данных отличном от нормального. Результаты и их обсуждение Пероральное введение кроликам-самкам препарата «Жанин» в дозе этинил-эстрадиола 6,5 мкг/кг и диеногеста 450 мкг/кг массы курсом 14 и 21 день приводило к статистически значимому изменению фармакокинетических параметров маркерного субстрата Pgp - фексофена-дина. Полученные результаты представлены в таблице 1. 66 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №4, 2013 г. Таблица 1 Основные фармакокинетические параметры фексофенадина при введении препарата «Жанин» (М±т - при нормальном распределении данных; медиана, нижний и верхний квартиль - при распределении данных отличном от нормального) Изучаемые параметры Исходные значения n=10 «Жанин» 14 дней n=10 «Жанин» 21 день n=10 Стах, нг/мл 248,31 (155,4; 512,4) 901,3* (459,1; 1143,53) 805,83* (601,81; 1343,79) Ттах, ч 4 (3;5) 4 (3;4) 4 (4;4) Ті/2, ч 9,45 (4,04; 15,78) 13,04** (10,32;17,04) 23,90* (18,72; 41,18) АиС0-24, нг*ч/мл 1524,50 (930,41; 3519,59) 10 632,01* (5715,71; 12335,50) 9166,87* (6775,80; 16354,20) АиС0.„, нг*ч/мл 2353,15 (933,73; 5049,7) 17713,10* (9330,24; 21470,5) 23593,26* (18051,90;33272,50) Стах / АиС0-24 0,15 (0,1; 0,21) 0,087* (0,07; 0,1) 0,083* (0,07; 0,1) Стах / АиС0-„ 0,101 (0,076; 0,205) 0,072** (0,047; 0,084) 0,039* (0,032; 0,046) MRT24, ч 8,47±0,965 10,55±0,292* 11,02±0,176* MRT, ч 16,05 (7,17; 22,16) 20,90** (16,31; 26,47) 36,16* (26,49; 57,84) Cl, л/ч 141,99 (48,72; 288,73) 13,56* (12,29; 24,89) 10,91* (7,08;14,46) Vd, л 1948,6±342,26 440,24±71,92** 444,42±59,51* Kei, 1/ч 0,09 (0,06; 0,3) 0,05** (0,04; 0,07) 0,03* (0,02; 0,04) Эстрадиол пг/мл 374,33 (322,84; 407,07) 272,06 (248,23; 327,99) 245,29 (223,4; 357,17) Тестостерон нмоль/л 0,175 (0,1; 0,21) 0,21 (0,14; 0,24) 0,17 (0,14; 0,21) Прогестерон нг/мл 2,685±0,179 2,276±0,185** 1,682±0,134* Примечание: * - p<0,05 - достоверные различия со значениями у интактных животных (исходные значения); ** - p<0,05 - достоверные различия со значениями на 21 день введения препарата. Введение кроликам комбинированного орального контрацептива «Жанин» в течение 14 дней приводило к достоверному (p<0,05) повышению Стах фексофенадина на 263%, AUC0-24 на 597,4%, AUC0-M на 652,7%, MRT24 на 24,6%, снижению Cl на 90,5% и Стах/АИС0-М на 40 % по сравнению с исходными показателями. Применение контрацептивного препарата в течение 21 дня сопровождалось достоверным (p<0,05) изменением ряда изучаемых фармакокинетических показателей фексофенадина: наблюдалось повышение Стах фексофенадина на 224,5%, Т1/2 на 152%, AUQ)-24 на 501,3%, AUCq-m на 902,6%, MRT24 на 30,1%, MRT на 125,3%, снижение Cl на 92,3%, Vd на 77,2%, K на 66,7% и Стах / AUQ)-t на 46,7% в сравнении данными интактных животных. После введения препарата «Жанин» курсом 21 день наблюдалось достоверное (p<0,05) увеличение Т1/2 на 76,7%, MRT на 73% и снижение Kei на 40% по сравнению с фармакокинетическими параметрами фексофенадина полученными на 14 день введения контрацептива. На фоне введения орального гормонального контрацептива «Жанин» изучалась динамика уровня половых гормонов кроликов: эстрадиола, прогестерона и те 67 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №4, 2013 г. стостерона (табл. 1). Результаты исследования свидетельствуют о достоверном (p<0,05) снижении концентрации прогестерона на 21 день введения препарата на 37,4% от исходных значений. В отношении эстрадиола выявлена тенденция к снижению концентрации, которая, однако, не имела достоверного характера и составляла 34,5% на 21 день введения препарата. Уровень тестостерона в ходе исследования практически не изменялся. На рис. 1 представлена оценка корреляционных зависимостей изучаемых фармакокинетических параметров от показателей гормонального статуса кроликов. Выявлена обратно пропорциональная связь (p<0,05) между уровнем эстрадиола и T1/2 (Rs= - 0,37), MRT24 (Rs= - 0,37), MRT (Rs= - 0,37) и концентрацией прогестерона и AUC0-24 (Rs= -0,39), а также прямо пропорциональная связь между уровнем эстрадиола и Cmax/AUC0-24 (Rs= 0,40), прогестерона и Cmax/AUC0-24 (Rs= 0,43), Cmax/AUC0-M (Rs= 0,58), Cl (R*= 0,39) и Vd (Rs=0,50). Таким образом, полученная корреляционная зависимость свидетельствует о том, что при снижении концентрации половых гормонов - прогестерона и эстрадиола в организме животных, снижается выведение фексофеналина, а следовательно и функциональная активность Pgp. Примечание: Непрерывной линией показана прямо пропорциональная связь, пунктирной линией - обратно пропорциональная связь. Рис. 1. Зависимость изучаемых фармакокинетических параметров фексофенадина от гормонального статуса кроликов при введении препарата «Жанин» (коэффициент корреляции Спирмена - Rs) В проведенном исследовании изучено влияние орального контрацептива «Жанин» на функциональную активность Pgp. Достоверное повышение значений Cmax, AUC0-24, AUC0-m, T1/2, MRT, MRT24, а также снижение значений Cl, Kel и Vd фексофе-надина могут служить доказательством ингибирующего влияния комбинации эти-нилэстрадиола и диеногеста на функциональную активность Pgp в печени и почках - органах, ответственных за выведение фексофенадина. Достоверное снижение Cmax/AUC0-t до и после введения препарата «Жанин» позволяет предположить отсутствие ингибирующего влияния комбинации этинилэстрадиола и диеногеста на активность Pgp в слизистой оболочке кишечника, что подтверждает тканеспецифич-ность влияния ряда лекарственных средств на белок-транспортер [13]. 68 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №4, 2013 г. Введение препарата «Жанин» на протяжении 21 дня привело к увеличению Т1/2, MRT и снижению Kel фексофенадина по сравнению с соответствующими фармакокинетическими параметрами при 14-дневном применении контрацептива. Этот факт может свидетельствовать о более выраженном ингибировании активности Pgp при использовании комбинации этинилэстрадиола и диеногеста более длительным курсом. По современным представлениям этинилэстрадиол является субстратом Pgp, но не изменяет его активность [15]. В других исследованиях было выявлено, что в печеночном поглощении этинилэстрадио-ла участвуют три транспортера (OATP1B1, OATP2B1 и NTCP), а его экскрецию в желчь осуществляет, вероятно, транспортер BCRP, а не Pgp [20]. В изученной нами литературе не было обнаружено информации о характере влияния диеногеста на функциональную активность белка-транспортера. Известно, что диеногест является синтетическим прогестином, обладающим структурным сходством с тестостероном и прогестероном. По химическому строению он является 19-норгестагеном, но вместо этинильной группы в положении 17α находится цианометильная группа [2], содержащая третичный атом азота, наличие которого в молекуле характерно для структуры ингибиторов Pgp [18]. Таким образом, можно предположить, что ингибирующее влияние препарата «Жанин» на функциональную активность Pgp связано, видимо, с наличием в его составе диено-геста. Выводы Внутрижелудочное введение кроликам комбинированного орального контрацептива «Жанин» в дозах 6,5 мкг/кг массы этинилэстрадиола и 450 мкг/кг массы ди-еногеста в течение 14 и 21 дней вызывает ингибирование функциональной активности белка-транспортера гликопротеина-Р печени и почек, установленное по фармакокинетике его маркерного субстрата -фексофенадина, что подтверждается достоверным повышением Cmax, AUC0-24, AUC0-M, T1/2 ,MRT24 и MRT и снижением Cl, Vd и Kel.