THE EFFECT OF THE COMPLEX TREATMENT INVOLVING AFOBAZOL ON THE CONDITION OF THE IMMUNE SYSTEM OF PSORIASIS PATIENTS

Abstract

The prescription of pscychopharmacological medications belonging to the group of benzimidazole derivatives has a positive effect during a complex treatment for psoriasis patients. It decreases the secretion of TNFa, IL-2, INFy cytokines changing the structure and the subpopulations of T-lymphocytes which leads to a more intensive decrease in immunoregulatory coefficient ОД4+/СД8+.

Full Text

Многие лекарственные препараты, не являясь «истинными иммуномодуляторами», обладают выраженным влиянием на врожденные и адаптивные механизмы функционирования иммунной системы [1]. Данное фармакологическое действие может быть обусловлено как особенностями химической структуры, так и основным терапевтическим эффектом. Практически все производные бензи-мидазола изменяют функционирование иммунной системы, что обусловлено их определенной конформацией, наличием «иммунологически активных» групп в молекуле, особенно при замещении атомов в бензимидазольном кольце [13]. Производные бензимидазола могут проявлять как иммуносупрессивную, так и иммуностимулирующую активность в зависимости от дозы, режима введения, экспериментальной модели или клинической ситуации [9, 17]. Афобазол структурно близок многим иммунологически активным производным бензимидазола, и его иммунологическая характеристика представляет несомненный интерес. С этих позиций особое внимание привлекают сведения о положительном фармакологическом эффекте применения афобазола в комплексном лечении псориаза - распространенного хронического дерматоза, сопровождающегося выраженными изменениями психоэмоционального состояния больных и имеющегося в своей основе иммунологические механизмы развития [11, 14, 15]. Согласно современным представлениям, псориаз рассматривается как папу-лосквамозный дерматоз с наследственной предрасположенностью. Среди наиболее значимых триггерных факторов псориатической болезни подчеркиваются стресс, нервно-психические потрясения, отрицательные эмоции, умственное переутомление, нервное перенапряжение [1, 2, 4, 5, 10, 12, 16]. Показано наличие временной зависимости обострения псориаза с нервно-психическими факторами более чем у 50% больных [4]. Более того, отмечается наличие параллелизма между интенсивностью психоэмоциональных расстройств и тяжестью, активностью и распространенностью течения кожных проявлений патологии [2]. Первичным механизмом развития тяжг-лых психосоматических расстройств может 106 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №3, 2014 г. служить и тревога [7], и нейрофизиологические механизмы тревоги играют существенную роль в дальнейшем развитии и течении псориатической болезни [8]. Основной характеристикой патологического псориатического процесса являются иммунное воспаление, которое сопровождается активацией Т-лимфоцитов, избыточной продукцией медиаторов иммунного ответа - цитокинов, нарушением диф-ференцировки кератиноцитов [6]. Выявление прямой иммунологической активности афобазола представляет несомненный интерес с позиций одновременной коррекции как психоэмоционального, так и иммунного статуса больных этим хроническим дерматозом. Материалы и методы В работе использованы данные обследования 60 взрослых в 2010-2012 гг. Из них мужчины составили 28 (46,7%), женщины 32 (53,3%) в возрасте от 18 до 60 лет. Критерии включения: в исследовании участвовали дееспособные больные мужского и женского пола, с прогрессирующей стадией вульгарного псориаза, давшие информированное согласие на участие в исследовании. В соответствии с поставленной целью исследование было проведено в качестве слепого рандомизированного контролируемого. По мере поступления больные были разделены на две группы: основную и сравнения по 30 пациентов в каждой. В группе сравнения было 14 мужчин и 16 женщин в возрасте от 19 до 60 лет (средний возраст -38,0±8,6 лет), в основной группе 14 мужчин и 16 женщин в возрасте от 18 до 50 лет (средний возраст - 34,0±6,6 лет), Р=0,5611. Индекс охвата и тяжести псориаза (PASI), у больных группы сравнения при поступлении в стационар составил 26 [24, 0; 28, 0], у пациентов основной группы 24,8 [24, 0; 26, 6], Р=0,1572. Группа условно-здоровых доноров включала 60 человек в возрасте от 20 до 40 лет, из них 35 женщин и 25 мужчин. Критериями исключения доноров явились: 1) наличие острых воспалительных заболеваний, или период реконвалесценции после острых воспалительных процессов; 2) анам нестические сведения об аутоиммунных заболеваниях, аллергопатологии, лимфопро-лиферативных процессах; 3) позитивные результаты при обследовании пациентов на наличие HBV, HCV и HIV инфекций. Лечение псориаза проводилось согласно стандартной схемы (медикоэкономические стандарты - МЭС) с индивидуальным подходом в зависимости от тяжести течения и клинической формы дерматоза. Она включала десенсибилизирующие, антигистаминные, нестероидные противовоспалительные препараты, витамины, препараты, коррегирующие функцию печени, а также наружные противовоспалительные, кератолитические и антибактериальные средства. Больные основной группы, наряду со стандартной терапией, дополнительно получали афобазол - (2-[2-(морфолино)-этил] -тио-5 -этоксибензилимидазола гидрохлорид) по 10 мг три раза в сутки (Фармстандарт-Лексредства). Начальную суточную дозу афобазола выбирали в зависимости от психоэмоционального состояния. Продолжительность терапии составила до 30 дней. В обеих группах все исследования проводили до начала лечения, через 14 дней и по окончании терапии (28-30 дней). Состояние иммунного статуса у пациентов изучалось по содержанию в периферической крови различных субпопуляций Т-лимфоцитов: CD3, CD4, CD8, CD25 и CD95 и уровню в сыворотке крови TNFa, IL-1ß, IL-2, IFNy. Статистическую обработку результатов проводили в рамках программного обеспечения Statistica для Windows, версия 6,0. При анализе данных первоначально осуществляли характеристику распределения. В зависимости от выборки использовали как стандартный метод вариационной статистики, так и непараметрические методы. Определение достоверности различий двух распределений соответственно проводили с использованием парного t-критерия Стьюдента или с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различия между группами считали статистически значимыми при Р<0,05, а при Р<0,1 107 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №3, 2014 г. различия оценивали как статистически вероятными. В таблицах данные представлены как М±SD или Ме (медиана) и интерквартильный интервал [25%; 75%]. Результаты и их обсуждение В прогрессирующей стадии псориа-тической болезни наблюдалось статистически значимое снижение количества Т-лимфоцитов, в то время как общее содержание лимфоцитов не претерпевало изменений по сравнению с контролем (табл. 1). У больных выявилось снижение абсолютного количества Т-цитотоксических лимфоцитов и Т-хелперов, однако процентное содержание Т-хелперов было выше, чем в контроле, а процентное содержание Т-цитотоксических лимфоцитов - статистически значимо ниже. Как результат, величина иммунорегуляторно-го индекса CD4+/CD8+ у больных псориазом была повышена. Если у здоровых лиц медиана этого коэффициента составляла 2,24 [2, 30-2, 59], то у пациентов основной группы она равнялась 2,95 [2, 653, 18] (Р=0,0211), у больных группы сравнения - 2,91 [2, 55-3, 14], (Р=0,0144). Абсолютное количество и процентная доля Т-лимфоцитов с рецепторами к ИЛ-2 (CD25+) у больных псориазом не отличались от соответствующих показателей в контрольной группе. Содержание субпопуляции Т-лимфоцитов, экспрессирующих мембранный клеточный рецептор Fas CD95 - ассоциированный с апоптозом, у больных повышалось, но статистически значимо лишь в процентном отношении. Таким образом, у больных псориазом в прогрессирующей стадии заболевания определялись изменения в структуре лимфоцитов, циркулирующих в периферической крови, которые заключаются в снижении общего количества Т-лимфо-цитов (CD3+), увеличении процентного содержания Т-хелперов (CD4+), в том числе и CD4+CD95+ клеток, и снижении Т-цитотоксических клеток (CD8+). При проведении стандартной терапии у пациентов наблюдалось статистиче ски значимое повышение общего количества Т-лимфоцитов. При этом абсолютное содержание CD4+ и CD8+ оставалось сниженным, хотя процентное соотношение Т-цитотоксических лимфоцитов и Т-хелперов приблизилось к показателям группы контроля. В результате происходило падение иммунорегуляторного коэффициента CD4+ /CD8+ до 2,48 [2, 30-2, 59] (Р=0,0396). После лечения у пациентов группы сравнения выявилось также уменьшение процентного содержания и абсолютного количества CD4+ CD25+ и CD4+CD95+ лимфоцитов. Показатели содержания этих субпопуляций Т-лимфоцитов к концу лечения статистически значимо не отличались от таковых контрольной группы. В основной группе пациентов (табл. 2), получавших на фоне традиционного дер-матотропного лечения афобазол, до начала терапии при поступлении в стационар статистически значимых отличий показателей содержания и структуры субполяции Т-лимфоцитов в периферической крови по сравнению с группой, больных, получавших только стандартную терапию не было установлено (Р2>0,1-0,5). После проведения лечения (28-е сутки) существенных различий в содержании Т-лимфоцитов (CD3+) и T-хелперов (CD4+) между сравниваемыми группами также не выявилось. В то же время уровень Т-цитотоксических клеток (CD8+) у больных, получавших афобазол, был более высоким (Р2=0,0375). Это отразилось на значениях иммунорегуляторного коэффициента CD4+/CD8+, величина которого в основной группе была ниже, чем в группе сравнения и статистически не отличалась от контроля. У пациентов основной группы, также как и группы сравнения после проведенного лечения, наблюдалось снижение содержания CD4+CD25+ и CD4+CD95+ субпопуляции лимфоцитов. При этом процентное соотношение CD25+ Т-лимфоцитов было в выше, чем в группе сравнения (Р2=0,0396), а CD95+ - ниже (Р2=0,0408) (табл. 1, 2). 108 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №3, 2014 г. Таблица 1 Содержание и структура субпопуляций Т-лимфоцитов у больных псориазом, получавших стандартное лечение, Ме [0, 25-0, 75] Показатели Больные, группа сравнения, n=30 Контроль При поступлении На 14 сутки лечения После лечения (здоровые доноры), n=30 Лимфоциты 109/л 1,96[1, 69-2, 20] Р=0,8961 1,72[1, 15-2, 22] Р=0,1896 Р1=0,5608 1,85[1, 41-2, 27] Р=0,3455 Р1=0,7314 2,05[1, 94-2, 25] СД3+, % 58,1[56, 0-59, 20] Р=0,00001 -65,0] 41 120 ^ =0 о" ? t ,0 Р Р1 4, 6 63,2[61, 0-60, 8] Р=0,0464 Р1=0,0001 68,2[65, 4-72, 1] Абс, кл/мкл 1138[870-1360] Р=0,0366 1083[880-1290] Р=0,0288 Р1=0,1974 1206[1030-1362] Р=0,0441 Р1=0,8357 1330[1296-1409] СД4+, % 44,0[37, 6-46, 4] Р=0,0432 45,6[43, 0-46, 0] Р=0,0318 Р1=0,0061 43,6[43, 0-46, 7] Р=0,9406 Р1=0,9315 41,2[40, 1-44, 3] Абс, кл/мкл 802[580-880] Р=0,0418 784[680-840] Р=0,0467 Р1=0,6408 806[670-830] Р=0,0485 Р1=0,9411 855[798-901] СД8+, % 19,4[16, 5-22, 2] Р=0,0001 21,0[20, -24, 1] Р=0,0093 Р1=0,0261 23,0[21, 2-25, 2] Р=0,0317 Р1=0,0001 24,4[23, 1-26, 2] Абс, кл/мкл 280[160-560] Р=0,0245 261[240-292] Р=0,0080 Р1=0,0722 325[230-346] Р=0,0775 Р1=0,0249 381[340-402] СД4+/СД8+ 2,91 [2, 55-3, 14] Р=0,0144 3,06[2, 76-3, 19] Р=0,0093 Р1=0,7307 2,48[2, 30-2, 59] Р=0,0396 Р1=0,0216 2,24[2, 03-2, 41] СД25+, % 21,6[19, 5-24, 0] Р=0,2708 21,1[19, 0-22, 3] Р=0,0817 Р1=0,7354 18,5[17, 0-19, 5] Р=0,0544 Р1=0,0041 20,3[18, 4-22, 0] Абс, кл/мкл 412[410-450] Р=0,9044 363[330-390] Р=0,0618 Р1=0,0724 343[310-386] Р=0,0548 Р1=0,0662 416[403-428] СД95+, % 19,0[17, 0-21, 3] Р=0,0014 18,0[15, 0-19, 2] Р=0,0076 Р1=0,0426 15,6[14, 0-17, 6] Р=0,9914 Р1=0,0007 15,5[14, 0-16, 6] Абс, кл/мкл 356[220-510] Р=0,6274 350[250-440] Р=0,4217 Р1=0,9173 300[250-390] Р=0,8716 Р1=0,5335 318[289-344] Примечание. Р - различия с контролем, Рj - различия до и после лечения по U-критерию Манна-Уитни 109 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №3, 2014 г. Таблица 2 Содержание и структура субпопуляций Т-лимфоцитов у больных псориазом, получавших комплексное лечение с включением афобазола, Ме [0, 25 - 0, 75] Показатели Больные, группа сравнения, n=30 Контроль (здоровые доноры), n=30 При поступлении На 14 сутки лечения После лечения Лимфоциты 109/л 2,00[1, 47-2, 57] Р=0,8917 Р2=0,8815 1,82[1, 28-2, 50] Р=0,2342 Р1=0,8654 Р2=0,4715 2,03[1, 87-2, 36] Р=0,9716 Р1=0,8432 Р2=0,4666 2,05 [1, 94-2, 25] СД3+, % Абс, кл/мкл 58,0[56, 0-58, 9] Р=0,0001 Р2=0,9341 ,0] 62, 72 68 52 ^ § 8Л Ł ? L ° ,0[ Р Р1 Р2 61 65,0[60, 0-69, 0] Р=0,0295 Р1=0,0021 Р2=0,0127 68,2 [65, 4-72, 1] 1162[820-1350] Р=0,0472 Р2=0,9237 983[830-1186] Р=0,0136 Р1=0,6422 Р2=0,0474 1270[940-1300] Р=0,6405 Р1=0,0633 Р2=0,1710 1330 [1296-1409] СД4+, % Абс, кл/мкл 45,0[38, 0-46, 7] Р=0,0326 Р2=0,6202 43,1[42, 8-46, 1] Р=0,8310 Р1=0,0552 Р2=0,0334 ,2] -43, 33 462 906 ч s за ,0[ Р Р1 Р2 2, 4 41,2 [40, 1-44, 3] 832[620-886] Р=0,2872 Р2=0,1151 780[650-940] Р=0,0409 Р1=0,0337 Р2=0,9934 819[677-841] Р=0,0644 Р1=0,0722 Р2=0,5897 855 [798-901] СД8+, % Абс, кл/мкл 20,0[20, 6-23, 2] Р=0,0001 Р2=0,7477 21,2[20, 1-24, 3] Р=0,0176 Р1=0,0742 Р2=0,8315 24,5[19, 3-23, 0] Р=0,9177 Р1=0,0001 Р2=0,0288 24,4 [23, 1-26, 2] 289[240-340] Р=0,0326 Р2=0,9871 280[260-306] Р=0,0316 Р1=0,7241 Р2=0,0784 397[330-414] Р=0,8316 Р1=0,0266 Р2=0,0375 381 [340-402] СД4+/СД8+ 2,95[2, 65-3, 18] Р=0,0211 Р2=0,8741 2,76[2, 09-3, 11] Р=0,0478 Р1=0,6632 Р2=0,2458 1 2 gs s ^ 7[ Р Р1 Р2 2, 2,24 [2, 03-2, 41] СД3+, % Абс, кл/мкл 21,2[19, 0-24, 1] Р=0,2625 Р2=0,6934 418[390-456] Р=0,9156 Р2=0,8742 21,0[19, 0-22, 0] Р=0,0872 Р1=0,9749 Р2=0,9835 360[340-404] Р=0,0604 Р1=0,0590 Р2=0,9038 $ s $ a ss d- g ąsS s Sgs ???£ ??? ,3[ Р Р1 Р2 52 Р Р1 Р2 7, 35 20,3 [18, 4-22, 0] 416 [403-428] СД25+, % Абс, кл/мкл 21,0[17, 0-21, 0] Р=0,0008 Р2=0,1809 17,2[15, 6-18, 8] Р=0,0022 Р1=0,0341 Р2=0,0809 14,0[14, 0-17, 1] Р=0,0572 Р1=0,0005 Р2=0,0408 15,5 [14, 0-16, 6] 380[250-520] Р=0,0815 Р2=0,3544 290[180-368] Р=0,0814 Р1=0,0889 Р2=0,0452 259[200-310] Р=0,5244 Р1=0,0160 Р2=0,0516 318 [289-344] Примечание: Р - различие с контролем, Р1 - различие до и после лечения, Р2 - различие между группой сравнения и основной группы по U-критерию Манна-Уитни 110 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №3, 2014 г. В прогрессирующей стадии заболевания содержание провоспалительных цитокинов TNFa, IL-1ß, IL-2, INFy в сыворотке крови было резко увеличено, а уровень IL-4 - снижен (рис. 1). После завершения лечения стандартными методами, содержание исследуемых провоспалительных цитокинов в группе сравнения, несмотря на снижение, оставалось значимо более высоким, чем в контрольной группе. Уровень ИЛ-4 повышался, однако даже при завершении лечения оставался сниженным, составляя 1,3 [0, 22-2, 9] пг/мл при 1,6 [1, 3-2, 1] пг/мл у здоровых доноров (Р=0,0475). По окончании лечения с применением афобазола, уровни TNFa, IL-1ß, IL-2 и INFy снизились в значительно большей степени, чем при стандартной терапии. Если снижение IL-Ιβ в основной группе было статистически незначимо по сравнению с группой сравнения, то содержание остальных цитокинов провоспалительной направленности различалось существенно. При этом медиана концентрации IL-1β и IFNy после лечения у пациентов основной группы практически достигала соответствующих показателей контроля. Содержание IL-4 у пациентов основной группы и группы сравнения статистически значимо в динамике лечения не различалось. Рис. 1. Динамика уровня цитокинов у больных, получивших стандартную терапию и комплексное лечение с афобазолом (в % к контролю, принятому за 100%. 1 - до начала лечения, 2 - на 14-е сутки лечения, 3 -после лечения Обобщая результаты исследований аза, можно констатировать, что изменения клинико-иммунологических параметров у иммунной системы под влиянием афобазо-больных распространенной формой псори- ла отражались в виде статистически значи- 111 Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова, №3, 2014 г. мого снижении у больных уровня таких провоспалительных цитокинов как TNFa, IL-2 и INFy. Содержание и структура субпопуляции Т-лимфоцитов изменялись менее выражено: отмечались статистически значимые различия в процентном содержании и/или абсолютном количестве СД3+, СД8+, СД25+ и СД95+. Содержание СД3+, СД25+ и СД95+ снижалось, а СД8+ повышалось. Однако терапевтический эффект применения афобазола на цитокиновый статус у больных псориазом возможно связан не только с иммунотропным влиянием препарата, но и с его основным фармакологическим действием как анксиолитика и нейропротектора. Выводы Применение афобазола в комплексном лечении больных псориазом повышает эффективность традиционного дер-матотропного лечения, улучшая показатели иммунного статуса, значительно ускоряя снижение выраженности клинических проявлений заболевания.