THE FARMAKOGNOSTIC STUDY OF GENUS CERASTIUM PLANT OF CENTRAL RUSSIA FLORA

Full Text

Исследования, проводимые с целью изучения различных дикорастущих растений для возможного последующего внедрения их в фармацевтическую практику, являются очень важными. Применение препаратов растительного происхождения в современной медицине не только остается стабильным, но и также имеет тенденцию к увеличению. При этом важнейшим этапом является изучение их морфо-лого-анатомического строения, что обязательно требуется для составления нормативной документации на сырье цельное, измельченное и порошкованное [1, 2]. В настоящий момент актуальным является исследование химического состава растений с выяснением наиболее активных соединений, например, экдистероидов, которые обуславливают широкий спектр фармакологических эффектов и могут стать основой новых препаратов [3-7]. Ясколка полевая (Cerastiumarvense L.) относится к семейству гвоздичные (Caryophyllaceae Juss.) и является малоизученным растением в медицине. Однако установлено, что в ясколке содержатся полисахариды, сапонины, фенолкарбоно-вые кислоты, кумарины и флавоноиды. В народной медицине используют надземную часть как успокаивающее средство в виде настоев [8]. Целью данного исследования является изучение травы ясколки полевой с применением ВЭЖХ и методов микроанализа. Материалы и методы В работе использована трава яскол-ки полевой, собранная в окрестностях города Рязани. Для изучения анатомического строения был использован микроскоп МБУ-4, химический состав спиртового извлечения определялся с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методика: сырьё измельчали до размера частиц, проходя щих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. По (ГОСТ 214-83) 1,04 г сырья помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли по 20 мл спирта этилового 70%, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу объёмом 25 мл и доводили спиртом этиловым 70% до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили серию 0,05% растворов сравнения в 70% спирте этиловом: рутина, кверцетина, лютеолина, лю-теолин-7-гликозида, галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, гиперозида, геспередина, апигенина, кемпферола, феруловой кислоты, ванильной кислоты, вератровой кислоты, п-анисовой кислоты, цикориевой кислоты, умбеллиферона, дигидрокумарина, скопо-летина, скулетина, кумарина, дикумарина, дигидрокверцитина, катехина, эпикатехи-на, эпигаллокатехингаллата (ЭПГКГ), эк-дистерона, виценина, полиподина. По 50 мкл исследуемых растворов и растворов сравнения вводили в хроматограф фирмы «GILSTON», модель 305, ФРАНЦИЯ; инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для «Windows». В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6х250 мм KROMASILC18, размер частиц 5 микрон. В качестве подвижной фазы использовали систему метанол: вода: фосфорная кислота (400:600:5). Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводилось с помощью ультрафиолетового (УФ) детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151, 127 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 при длине волны 254 нм. Хроматографировали в выше приведенных условиях. Результаты и их обсуждение Идентификация экдистерона проводилась путем анализа УФ-спектров, полученных методом ВЭЖХ (табл. 1, рис. 1). Хроматограмма ВЭЖХ (рис. 1) водно-спиртового извлечения ясколки полевой, детектированная при длине волны 254 нм, и интерпретация ее данных (табл. 1) показывает наличие большого количества веществ группы полифенолов.Также нами был обнаружен представитель фитоэкдистероидов - экдистен (экдистерон). Наличие полифенолов и экдистерона обуславливает актуальность дальнейших исследований данного растения. Микроскопия растения. Строение стебля. Стебель ясколки полевой характеризуется воздухоносной полостью на всем его протяжении (рис. 2). Поперечный срез стебля имеет округлую форму, покрытый простыми многоклеточными волосками. Боковые стенки стебля толстые. Между клетками в некоторых местах имеются сочленения, при этом клетки расширены, стенки заметно утолщены. Таблица 1 Данные ВЭЖХ водно-спиртового извлечения ясколки полевой, детектирование при длине волны 254 нм No Время, мин Высота, mV Площадь, mV*сек ФО Концентрация, % Название 1 3.499 40.22 491.52 1.000 3.43 О-кумаровая кислота 2 3.785 70.46 1129.05 1.000 7.89 Аскорбиновая кислота 3 4.04 51.55 395.79 1.000 2.76 Танин 4 4.191 58.22 1372.24 1.000 9.59 Галловая кислота 5 4.587 36.75 417.41 1.000 2.92 Эгкгаллат 6 4.753 31.00 438.34 1.000 3.06 Хлорогеновая кислота 7 5.064 25.11 518.42 1.000 3.62 Неизвестное вещество 8 5.508 19.04 350.81 1.000 2.45 Эпикатехин 9 5.796 18.94 336.87 1.000 2.35 Неизвестное вещество 10 6.044 18.00 166.33 1.000 1.16 Ванильная кислота 11 6.357 24.40 806.20 1.000 5.63 Цикориевая кислота 12 6.971 14.31 389.78 1.000 2.72 Кофейная кислота 13 7.493 11.84 208.75 1.000 1.46 Неохлорогеновая кислота 14 7.865 13.46 429.20 1.000 3.00 Неизвестное вещество 15 8.559 18.52 738.85 1.000 5.16 Неизвестное вещество 16 9.562 11.03 644.28 1.000 4.50 Дигидрокверцетин 17 10.66 7.76 281.51 1.000 1.97 Вератровая кислота 18 11.39 12.07 526.04 1.000 3.67 Феруловая кислота 19 12.44 10.56 632.23 1.000 4.42 Кумарин 20 13.56 6.62 208.67 1.000 1.46 Неизвестное вещество 21 14.35 13.26 407.00 1.000 2.84 Лютеолин-7-гликозид 22 14.87 17.50 829.94 1.000 5.80 Неизвестное вещество 23 15.7 8.74 730.86 1.000 5.11 Экдистен 24 17.46 3.90 312.60 1.000 2.18 Рутин 25 19.71 2.81 221.96 1.000 1.55 Неизвестное вещество 26 21.33 1.77 184.94 1.000 1.29 Неизвестное вещество 27 23.47 6.39 543.42 1.000 3.80 Неизвестное вещество 28 25.4 3.51 391.94 1.000 2.74 Неизвестное вещество 29 29.05 0.44 27.27 1.000 0.19 Неизвестное вещество 30 31.21 1.14 111.84 1.000 0.78 Коричная кислота 31 33.16 0.76 71.97 1.000 0.50 Неизвестное вещество 55.27 560.07 14316.04 0.020 100.00 128 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 Рис. 1. Хроматограммы ВЭЖХ водно-спиртового извлечения ясколки полевой, детектирование при длине волны 254 нм Покровная ткань (эпидерма) представлена слоем тонкостенных, удлиненных прямоугольных клеток. Под эпидермой располагается слой склеренхимы, клетки которой имеют форму многогранника, располагающиеся в 3-4 слоя по кругу. Межклетники в слое склеренхимы образуют систему полостей и ходов. Проводящие пучки открытые коллатеральные, среднего размера, располагающиеся по периферии. Клетки ксилемы четко выражены. Каждый пучок окружен кольцом механической ткани. Клетки ме ханической ткани мелкие, тонкостенные, пропитанные лигнином. Клетки паренхимы крупные, многогранные, тонкостенные, плотно расположены. Частично окружают проводящие пучки (рис. 3). Строение листа. Поверхность листовой пластинки покрыта простыми многоклеточными тонкостенными волосками, состоящими из 3-5 клеток. По краю листа и жилкам также встречаются простые волоски. У основания таких волосков лежат несколько клеток эпидермиса, слегка при- 129 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 Рис. 2. Поперечный срез стебля: 1 - простой волосок, 2 - эпидерма, 3 - склеренхима, 4 - проводящий пучок, 5 - паренхима, 6 - воздухоносная полость / ! Рис. 4. Препарат края листа с поверхности: 1 - простой волосок, 2 - жилка, 3,4 - друзы оксалата кальция Рис. 6. Препарат мезофилла листа: 1, 2 - друзы оксалата кальция, 3 - простой волосок, 4 - проводящий сосуд і Рис. 3. Фрагмент поперечного среза стебля: 1 - эпидерма, 2 - коровая паренхима, 3 - склеренхима, 4 - флоэма, 5 - сосуды Рис. 5. Простой волосок листа ! \ Рис. 7. Устьице аномоцитного типа: 1 - устьичная щель, 2 - замыкающие клетки, 3 - эпидермальные клетки 130 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 поднимающихся над поверхностью листа (рис. 4, 5). Клетки эпидермиса слегка вытянутые с обеих сторон по длине листовой пластинки, в очертании извилистые. Нижний эпидермис отличается клетками с сильно извилистым контуром. Устьица с нижней стороны листа овальной формы, достаточно множественные, аномоцитного типа, с широкой открытой устьичной щелью окружены 4-5 клетками эпидермиса (рис. 7). В мезофилле листа много друз оксалата кальция разнообразных форм (рис. 6). Выводы 1. Определен химический состав некоторых фенольных и стероидных соединений ясколки полевой. Методом ВЭЖХ доказана идентичность экдистена (экдистерона) стандартному образцу. 2. Установлены характерные мик-родиагностические признаки ясколки полевой: наличие простых волосков, друз оксалата кальция, устьиц аномоцитного типа, открытого коллатерального пучка. Конфликт интересов отсутствует

References

Supplementary files