МикроРНК как перспективные биомаркеры при раке
- Авторы: Тармаев А.А.1, Бейлерли О.А.2
-
Учреждения:
- Харбинский медицинский университет
- ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России
- Выпуск: Том 11, № 3 (2019)
- Страницы: 5-12
- Раздел: Научный обзор
- Статья получена: 18.06.2019
- Статья одобрена: 18.06.2019
- Статья опубликована: 18.11.2019
- URL: https://journals.eco-vector.com/vszgmu/article/view/13500
- DOI: https://doi.org/10.17816/mechnikov20191135-12
- ID: 13500
Цитировать
Полный текст
Аннотация
К 2004 г. в результате международного проекта по секвенированию генома человека было проанализировано около 20 000 кодирующих белок генов, что соответствует 2 % общей геномной последовательности. Подавляющее большинство транскриптов генов фактически характеризуются как некодирующие РНК (нкРНК) и представляют собой кластеры РНК, которые не кодируют функциональные белки. Они могут быть небольшими, длиной примерно 20 нуклеотидов, и известны как микроРНК (miRNAs), или транскриптами длиной более 200 нуклеотидов, определяемыми как длинные нкРНК (lncRNAs). miRNA — это короткие нкРНК, участвующие в посттранскрипционной регуляции экспрессии генов. Обнаруженные более 15 лет назад эти молекулы признаны в качестве одних из основных регуляторных молекул в геноме человека. Они играют важную роль во всех биологических процессах и модулируют экспрессию эукариотических генов. Ориентируясь на транскрипты, кодирующие белки, miRNA влияют на клеточный транскриптом, тем самым помогая определить судьбу клетки. Была замечена аберрантная экспрессия miRNA у больных раком. Оказалось, что тканевые концентрации специфических miRNA связаны с опухолевой инвазивностью, метастатическим потенциалом и другими клиническими характеристиками для многих типов рака. По сравнению с традиционными биомаркерами, такими как белки, miRNA имеют ряд преимуществ, которые позволяют использовать их в качестве новых потенциальных биомаркеров при раке. В этом обзоре рассмотрен биогенез, функции, технологии, применяемые для обнаружения miRNA, и ассоциации микроРНК с раком человека, в частности колоректальным раком.
Ключевые слова
Полный текст
Введение
Если ранее рак был связан с острым процессом, приводящим к быстрой смерти, то сегодня благодаря современным представлениям о биологии опухолевых клеток рак рассматривают как хроническое заболевание, при этом разработка терапевтических мишеней, предназначенных для опухолей, регулярно повышает шансы на выживание онкологических больных. Рак человека включает в себя генетические (врожденные или приобретенные) и эпигенетические модификации. Многие супрессорные гены и онкогены были описаны, и сейчас очень активно открываются новые биомаркеры опухолевых процессов [1]. Недавно была идентифицирована новая группа биологических маркеров — микроРНК (miRNA). Эти молекулы специфичны для раковых клеток, в отличие от большинства других биомаркеров, доступных в настоящее время. miRNA, безусловно, будут занимать важное место в клинической биологии как новые диагностические и прогностические маркеры и индикаторы терапевтического ответа, а также как новые терапевтические мишени. В этом обзоре обобщены современные знания о биогенезе, функциях и методах обнаружения miRNA, а также о роли miRNA при раке, в частности колоректальном раке.
Биогенез и функция miRNA
Первым этапом биогенеза miRNA является транскрипция ДНК, которую, как правило, осуществляет РНК-полимераза II — тот же фермент, который транскрибирует «стандартные» белок-кодирующие гены. Более того, очень часто участки, кодирующие miRNA, находятся внутри белок-кодирующих генов. Таким образом, во многих случаях первичным продуктом может выступать обычная мРНК. Однако, как правило, РНК-транскрипт, служащий предшественником miRNA, обозначают как примикроРНК (pri-miRNA).
МикроРНК чаще закодированы в интронах, но экзон-локализованные miRNA также широко распространены. Единственный обязательный критерий — наличие самокомплементарного участка, способного формировать шпильку на транскрибированной РНК. Такая структура pri-miRNA еще в ядре распознается и отрезается от остального транскрипта ферментным комплексом, включающим белки Drosha и Pasha. В качестве вспомогательных компонентов этого комплекса могут присутствовать хеликазы и гетерогенные ядерные рибонуклеопротеины (hnRNP). Менее распространенный путь — процессинг без участия комплекса, то есть за счет механизма сплайсинга. Это происходит в тех случаях, когда область шпильки совпадает с границами вырезаемого интрона. Результатом процессинга pri-miRNA является фрагмент РНК длиной 60–70 нуклеотидов, называемый пре-микроРНК (pre-miRNA). Этот фрагмент содержит в своем составе двухцепочечный участок: две самокомплементарные области, соединенные петлей (terminal loop), и небольшой одноцепочечный участок на 3ʹ-конце. Совокупность этих элементов распознает белок экспортин-5 в комплексе с малой ГТФазой Ran.
После образования комплекса Ran/ГТФ/экспортин-5/pri-miRNA происходит его перенос через поры ядерной мембраны в цитоплазму. Здесь после гидролиза ГТФ-комплекс распадается с высвобождением молекулы РНК [2]. Экспорт из ядра представляет собой важный этап биогенеза miRNA. В цитоплазме структурные элементы pri-miRNA представлены двухцепочечной шпилькой и коротким неспаренным участком на ее конце. pri-miRNA распознает фермент Dicer. Он имеет в своем составе домен PAZ (распознает неспаренный конец шпильки), двухцепочечный РНК-связывающий домен, хеликазный домен и два домена с активностью РНКазы III. После связывания и правильного позиционирования Dicer на молекуле pri-miRNA РНКазные домены вносят два разрыва в РНК возле петли, отрезая ее от шпильки. Образованный двухцепочечный РНК-продукт длиной около 22 нуклеотидов связывается белком Ago2 из семейства Argonaute. Ago2 сам по себе также обладает эндонуклеазной активностью и в случае некоторых miRNA может осуществлять процессинг pri-miRNA без участия Dicer. Из двух цепей РНК, образовавшихся после отщепления петли, только одна, называемая ведущей, остается связанной с Ago2, в то время как другая («пассажирская») диссоциирует от комплекса и, как правило, деградирует. Выбор ведущей цепи определяется структурой самого дуплекса: бoльшую вероятность остаться в комплексе с Ago2 имеет цепь, несущая неспаренный участок на своем 5ʹ-конце. Комплекс Ago2 с единичной цепью РНК, а также с белком GW182 обозначают как miRISC (miRNA-induced silencing complex).
RISC-комплекс в цитоплазме обеспечивает главный эффект miRNA — подавление экспрессии генов, мРНК которых имеет участок, комплементарный последовательности miRNA. Такие гены называются мишенями для данной miRNA. Важнейшим этапом в выборе мишени является распознавание в мРНК последовательности, которая была бы комплементарна со 2-го по 8-й нуклеотиды miRNA. Последние образуют так называемую ключевую последовательность miRNA. Комплементарность между ключевой последовательностью miRNA и последовательностью мРНК обеспечивает посадку RISC-комплекса на мРНК-мишень. Чаще всего такие участки комплементарности в мРНК (сайты связывания miRNA) находятся в 3ʹ-нетранслируемой области, то есть после белок-кодирующей части. Посадка RISC-комплекса на мРНК-мишень может иметь разные последствия, которые зависят в том числе и от степени комплементарности между miRNA и мРНК. В случае полной комплементарности включается РНКазная активность Ago2, который разрезает мРНК в месте посадки. Такая мРНК быстро расщепляется клеточными рибонуклеазами. Прочие механизмы подавления трансляции не требуют полной комплементарности. В частности, рекрутирование белков GW182, CCR4-NOT и PAN2-PAN3 обеспечивает отщепление от мРНК поли-А-сигнала, а привлечение белков DCP1/2 ведет к удалению кэпа [3, 4]. В обоих случаях мРНК становится нефункциональной и в дальнейшем деградирует. Наконец, само по себе нахождение RISC-комплекса на мРНК препятствует посадке и продвижению рибосомы. Следует отметить, что в отдельных случаях miRNA могут быть не репрессорами, а прямыми активаторами трансляции, однако, насколько часто встречается такое «исключение», пока не совсем ясно [5]. Таким образом, miRNA в составе RISC-комплекса «выключают» экспрессию своих генов-мишеней, причем выбор мишеней определяется последовательностью miRNA, точнее наличием комплементарной ей последовательности в мРНК. Одна и та же miRNA может воздействовать на все мРНК, имеющие в своей последовательности соответствующие сайты связывания. Более того, поскольку для посадки RISC-комплекса не требуется полной комплементарности, эти сайты могут иметь слегка различающиеся последовательности. Фактически miRNA являются исключительно универсальным механизмом подавления экспрессии и поэтому задействованы в регуляции широкого спектра клеточных процессов (по разным оценкам, от 30 до 60 % генов человека служат мишенями miRNA) [6, 7].
Методы обнаружения miRNA
Описаны различные методы обнаружения профилей miRNAs в клетках разных типов: микрочипы ДНК, массивы на гранулах, количественная ПЦР в реальном времени. Принцип чипов основан на спаривании основ Ватсона и Крика. Чипы позволяют одновременно обнаруживать несколько сотен miRNA. Панель зондов захвата олигонуклеотидов прикреплена к предметным стеклам, и образец экстракта РНК, обогащенный малыми молекулами РНК, гибридизуется с этими зондами захвата. Поскольку miRNA короткие, может быть трудно нормализовать температуры плавления (ТП) зондов для того же эксперимента, сохраняя при этом достаточные чувствительность и специфичность. Эта проблема была решена за счет использования locked nucleic acids (заблокированных нуклеиновых кислот — LNAs). LNA содержат по меньшей мере один мономер LNA, то есть аналог нуклеиновой кислоты, в котором 2ʹ-атом кислорода и 4ʹ-атом углерода рибозы «заблокированы» [8]. Каждый включенный мономер LNA увеличивает ТП дуплекса нуклеиновой кислоты на 2–10 °C [9]. Таким образом, все зонды одного и того же эксперимента, регулируя количество мономеров LNA, включенных в зонд захвата, можно нормализовать на уровне значения их ТП, несмотря на короткую miRNAs. Таким образом, были обнаружены многочисленные ассоциации с патологиями.
Массивы с использованием шариков, такие как матрицы Luminex® Flex-miR, также позволяют одновременно определять несколько сотен miRNA [10]. Зонды Exiquon с LNA связаны с карбоксилированными полистирольными микросферами, которые содержат различные смеси двух флуоресцентных красителей, что дает возможность идентифицировать каждую микросферу (до 100) с помощью проточного цитометра, потому что каждая микросфера имеет уникальный цвет. Каждая микросфера связана с молекулой LNA, которая специфична для miRNA. С помощью зонда можно дифференцировать miRNA одного и того же семейства. Общую РНК извлекают из образца, биотинилируют, а затем гибридизуют с микросферами. Микросферы промывают, инкубируют с фикоэритрином – стрептавидином и анализируют с применением Luminex®. Анализатор может определять специфическую флуоресценцию микросферы и измерять интенсивность флуоресценции фикоэритрина – стрептавидина, благодаря чему удается выделить miRNA, присутствующую в образце. Этот тест позволяет также получить количественные результаты, если калибровочная кривая проводится с использованием соответствующих калибровочных материалов, таких как синтетические олигонуклеотиды.
Для обнаружения miRNA можно также использовать количественную ПЦР в реальном времени (RT-qPCR). Количественная оценка зрелых miRNA обычно требует обратной транскрипции miRNA с помощью праймера со стволовой петлей [11]. Затем кДНК используют в реакции RT-qPCR. Смесь праймеров и дважды меченного зонда (TaqMan©) применяют для амплификации и обнаружения желаемой кДНК. Зонд имеет 5ʹ-краситель и 3ʹ-гаситель. Во время ПЦР зонд связывается с этой целевой последовательностью. На стадии удлинения цикла ПЦР краситель высвобождается в силу экзонуклеазной активности Taq-полимеразы; поскольку краситель и гаситель были разделены, происходит флуоресценция красителя. Первичные РНК и/или pre-miRNA могут быть количественно определены теми же методами, но такие анализы требуют точного выбора как праймеров, так и зондов [11].
MiRNA и колоректальный рак
Во всем мире колоректальный рак занимает третье место по распространенности среди всех видов рака у мужчин и второе место у женщин, а также второе место в качестве причины смертности среди онкологических больных. Раннее выявление колоректального рака может привести к снижению показателей заболеваемости и смертности, поскольку используемые в настоящее время методы скрининга позволяют выявить симптомы и признаки, связанные с поздними стадиями заболевания. К сожалению, вероятность благоприятного исхода после появления клинической симптоматики составляет 50 %, в то время как при раннем диагнозе могут быть достигнуты значения, превышающие 80 %. Общепринятыми методами скрининга колоректального рака являются обнаружение скрытой крови в кале, пальцевое исследование прямой кишки, ирригоскопия и колоноскопия. Все перечисленные методы, несмотря на их широкую доступность, не позволяют выявить неопластические изменения в стенках кишечника на ранних этапах развития рака, поэтому поиски более чувствительных методов выявления рака приоритетны для многих исследователей.
Маркеры в кале
В различных исследованиях выявляли ДНК в фекалиях для количественного определения значений различных miRNA. Link et al. обнаружили избыточную экспрессию miRNA-21 и miRNA-106a при колоректальном раке и аденоме толстой кишки по сравнению со здоровыми лицами [12]. Kalimutho et al. выполняли гиперметилирование промотора miRNA-34b/c в кале и показали, что до 75 % пациентов с колоректальным раком имели гиперметилирование их промотора, которое коррелировало со стадией опухоли. Исследователи предложили определять аберрантное метилирование в кале miRNA-34b/c в качестве диагностического маркера. В нормальных условиях miRNA-34b/c подавляет рост опухоли, вызывая апоптоз и останавливая клеточный цикл. Следовательно, аберрантное метилирование miR-34b/c, присутствующего в 97,5 % колоректальных новообразований, позволило бы останавливать пролиферацию клеток [13]. Аналогично была обнаружена избыточная экспрессия miR-20a, miR-21, miR-92, miR-96, miR-106a, miR-203 и miR-326 в кале у пациентов с колоректальным раком, тогда как на поздних стадиях заболевания уровни miR-16, miR-125b, miR-126, miR-143, miR-144, miR-145, miR-320 и miR-484-5p были низкими [14]. Koga et al. установили значения чувствительности (70 и 46 %) и специфичности (81 и 95 %) miRNA-17-92 и miRNA-135 [15]. Хотя различные авторы показывают, что определение miRNA в кале может служить диагностическим маркером при колоректальном раке, необходимы дальнейшие исследования для подтверждения этих новых маркеров. Необходимо также стандартизировать сбор образцов и их обработку [16].
Тканевые маркеры
Было замечено, что почти 300 miRNA изменены в образцах опухолей толстой кишки по сравнению с нормальной слизистой оболочкой [17]. Приблизительно 50 различных miRNA были описаны в клетках колоректального рака. Сверхэкспрессированные miRNA связаны с хромосомными областями, амплифицированными в новообразованиях этого типа, тогда как miRNA, которые экспрессируются в физиологических условиях, связаны с хромосомными областями, которые часто удаляются [16]. В медицинской литературе представлены различные сверхэкспрессированные miRNA в колоректальных новообразованиях: miR-15b, miR-17-5p, miR-19a, miR-20, miR-21, miR-29a, miR- 31, miR-92, miR-96, miR-135b, miR-148a, miR-181b, miR-182, miR-183, miR-191, miR-200b, miR-200c и miR-212. С другой стороны, определены miRNA с пониженной экспрессией: miR-1, miR-9-1, miR-30a-3p, miR-30a-5p, miR-30c, miR-34a, miR-34b, miR-34c, miR-126, miR-129, miR-133a, miR-133b, miR-137, miR-139, miR-143, miR-145, miR-195, miR-342, miR-422a, miR-422b и let-7a-1 [18–20].
Маркеры в периферической крови
В периферической крови miRNA расположены в структурах, называемых экзосомами или микровезикулами. Аберрантную экспрессию miRNA в крови можно использовать в качестве маркера при колоректальном раке [21]. Chen et al. обнаружили существование нескольких miRNA в сыворотке пациентов с колоректальным раком, которых не было у здоровых людей [22]. Ng et al. идентифицировали пять miRNA (miR-17-3p, -92, -95, -135b, -222), которые были сверхэкспрессированы как в сыворотке, так и в опухолевой ткани пациентов с колоректальным раком, и, кроме того, подтвердили, что уровень miR-17-3p и miR-92a в плазме снижался в послеоперационном периоде. Они пришли к выводу, что miR-92 обладает хорошей чувствительностью (89 %) и специфичностью (70 %) при колоректальном раке, поэтому его можно использовать при скрининге этого заболевания [23]. В исследовании, которое включало 100 случаев колоректального рака, 37 аденом толстой кишки и 59 здоровых пациентов, были получены статистически значимые значения для miR-92a и miR-29a с чувствительностью 84 % и специфичностью 71 %. Площадь под кривой для miRNA-92a составила 0,838 (95 % доверительный интервал — 0,775–0,900) при сравнении между здоровыми людьми и пациентами с колоректальным раком. Кроме того, ученые нашли связь между стадией колоректального рака по TNM и уровнем miR-29a [24]. Pu et al. оценивали экспрессию miR-21, miR-221 и miR-222 с помощью qRT-PCR в 103 случаях колоректального рака и у 37 здоровых добровольцев [25]. miRNA оказалась полезной и в отношении распознавания прогрессирующей колоректальной аденомы, что позволяет проводить диагностику заболевания на ранних стадиях: увеличение miR-29a и miR-92a было значительным по сравнению с контролем. В той же линии исследований Kanaan et al., изучая 380 miRNA, обнаружили, что восемь miRNA (miR-532-3p, miR-331, miR-195, miR-17, miR-142-3p, miR-15b, miR-532 и miR-652) были сверхэкспрессированы у пациентов с колоректальными полипами по сравнению со здоровыми людьми [26]. Было подтверждено, что определение miR-141, связанное с выявлением раково-эмбрионального антигена, способствовало бы обнаружению метастазов в печени [27]. Недавно было высказано предположение, что miR-29a можно использовать в качестве маркера для дифференцировки колоректального рака с метастазами в печени [28]. Эти технологические достижения позволили ученым провести разнообразные исследования, направленные на определение различных miRNA. Применение микрочипов показало, что различные miRNA, присутствующие в опухолевых клетках при колоректальном раке, могут служить индикаторами при прогнозировании развития заболевания, улучшения выживаемости после химио- и лучевой терапии [29]. Благодаря ранней диагностике рака ободочной и прямой кишки удается лечить заболевание на начальных стадиях, что делает это новообразование потенциально излечимым, поэтому независимо от метода любая процедура ранней диагностики лучше, чем отсутствие какого-либо скрининга.
Использование miRNA в клинике
Количество доклинических исследований, основанных на определении miRNA, которые показали улучшенный или сходный эффект по сравнению с традиционными методами лечения, все время увеличивается. Использование miRNA может иметь различные технические преимущества.
- miRNA представляют собой регуляторные элементы, которые могут воздействовать одновременно на несколько мРНК и, следовательно, влиять на разные компоненты одного и того же молекулярного сигнального пути или даже на разные пути. Это сводит к минимуму возможность компенсации другими избыточными путями или другими белками из того же семейства.
- В отличие от мРНК, зрелые miRNA уже являются непосредственно функциональным продуктом гена и не требуют какого-либо другого типа регуляции транскрипции для осуществления своей функции.
- Наконец, miRNAs стабильны в замороженной ткани, а также в образцах тканей, фиксированных в формалине и парафине. Это позволяет извлекать их с помощью стандартизированных методов оценки, таких как количественная ПЦР, в любое время во время лечения пациента.
Применение miRNA в клинической практике уже стало реальностью. В области онкологии первой молекулой, вступившей в клиническую фазу, был MIRX34. Это соединение имитирует miR-34, miRNA с функцией подавления опухоли, экспрессия которой снижается во множестве опухолей. Одно из ограничений этих соединений заключается в том, что при введении венозным путем и без какого-либо типа инкапсуляции их распределение сосредоточено в основном в печени, где они очень эффективны, но быстро метаболизируются и выводятся из организма, что ограничивает их терапевтический потенциал в других тканях. Следовательно, для улучшения биораспределения miRNA необходимо расширять исследования: возможно их инкапсулирование в везикулярные наночастицы, изготовленные из биосовместимых материалов, что обеспечит большую стабильность и постоянство в кровотоке.
Заключение
miRNA являются опухолевыми маркерами, вызывающими большой интерес для использования в клинической практике. Биологические роли miRNA обеспечивают реальную физиопатологическую основу для их связи с прогнозом или терапевтического мониторинга опухоли. В этом смысле ингибирование miRNA с помощью «антагомиров» открывает привлекательную терапевтическую перспективу. Однако многие вопросы о применении этих биомаркеров в патологии остаются без ответа. Например, каков уровень экспрессии miRNA в первичных опухолях, вторичных опухолях или метастазах для данного пациента? Исследования в этом направлении могут помочь в будущем в классификации, диагностике и лечении опухолевых патологий.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Об авторах
Андриан А. Тармаев
Харбинский медицинский университет
Email: Tarmaevandrian@outlook.com
КНР, Харбин, провинция Хэйлунцзян
Озал Арзуман оглы Бейлерли
ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России
Автор, ответственный за переписку.
Email: obeylerli@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-6149-5460
Россия, Уфа
Список литературы
- Kulasingam V, Diamandis EP. Strategies for discovering novel cancer biomarkers through utilization of emerging technologies. Nat Clin Pract Oncol. 2008;5(10):588-599. https://doi.org/10.1038/ncponc1187.
- Lei EP, Silver PA. Protein and RNA export from the nucleus. Dev Cell. 2002;2(3):261-272. https://doi.org/10.1016/s1534-5807(02)00134-x.
- Behm-Ansmant I, Rehwinke J, Doerks T, et al. MRNA degradation by miRNAs and GW182 requires both CCR4: NOT deadenylase and DCP1:DCP2 decapping complexes. Genes Dev. 2006;20(14):1885-1898. https://doi.org/10.1101/gad.1424106.
- Nishihara T, Zekri L, Braun JE, Izaurralde E. miRISC recruits decapping factors to miRNA targets to enhance their degradation. Nucleic Acids Res. 2013;41(18):8692-8705. https://doi.org/10.1093/nar/gkt619.
- Vasudevan S, Tong Y, Steitz JA. Switching from repression to activation: microRNAs can up-regulate translation. Science. 2007;318(5858):1931-1934. https://doi.org/10.1126/science.1149460.
- Wilson RC, Doudna JA. Molecular mechanisms of RNA interference. Annu Rev Biophys. 2013;42:217-239. https://doi.org/10.1146/annurev-biophys-083012-130404.
- Friedman RC, Farh KK, Burge CB, Bartel DP. Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs. Genome Res. 2009;19(1):92-105. https://doi.org/10.1101/gr.082701.108.
- Gregory RI, Yan KP, Amuthan G, et al. The microprocessor complex mediates the genesis of microRNAs. Nature. 2004;432(7014):235-240. https://doi.org/10.1038/nature03120.
- Lund E, Guttinger S, Calado A, et al. Nuclear export of microRNA precursors. Science. 2004;303(5654):95-98. https://doi.org/10.1126/science.1090599.
- Lee Y, Ahn C, Han J, et al. The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing. Nature. 2003;425(6956):415-419. https://doi.org/10.1038/nature01957.
- Lee Y, Jeon K, Lee JT, et al. MicroRNA maturation: stepwise processing and subcellular localization. EMBO J. 2002;21(17):4663-7460. https://doi.org/10.1093/emboj/cdf476.
- Link A, Balaguer F, Shen Y, et al. Fecal micro-RNA as novel biomarkers for colon cancer screening. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2010;19(7):1766-1774. https://doi.org/10.1158/1055-9965.EPI-10-0027.
- Kalimutho M, Di Cecilia S, Del Vecchio Blanco G, et al. Epigenetically silenced miR-34bc as a novel faecal-based screening marker for colorectal cancer. Br J Cancer. 2011;104(11):1770-1778. https://doi.org/10.1038/bjc.2011.82.
- Dong Y, Wu WK, Wu CW, et al. MicroRNA dysregulation in colorectal cancer: a clinical perspective. Br J Cancer. 2011;104(6):893-898. https://doi.org/10.1038/bjc.2011.57.
- Koga Y, Yasunaga M, Takahashi A, et al. MicroRNA expression profiling of exfoliated colonocytes isolated from feces for colorectal cancer screening. Cancer Prev Res (Phila). 2010;3(11):1435-1442. https://doi.org/10.1158/1940-6207.CAPR-10-0036.
- Wang X, Kuang YY, Hu XT. Advances in epigenetic biomarker research in colorectal cancer. World J Gastroenterol. 2014;20(15):4276-4287. https://doi.org/10.3748/wjg.v20.i15.4276.
- Mazeh H, Mizrahi I, Ilyayev N, et al. The diagnostic and prognostic role of microRNA in colorectal cancer: a comprehensive review. J Cancer. 2013;4(3):281-295. https://doi.org/10.7150/jca.5836.
- Nugent M, Miller N, Kerin MJ. MicroRNAs in colorectal cancer: function, dysregulation and potential as novel biomarkers. Eur J Surg Oncol. 2011;37(8):649-654. https://doi.org/10.1016/j.ejso.2011.05.005.
- Ferracin M, Veronese A, Negrini M. Micromarkers: miRNAs in cancer diagnosis and prognosis. Expert Rev Mol Diagn. 2010;10(3):297-308. https://doi.org/10.1586/erm.10.11.
- Menendez P, Villarejo P, Padilla D, et al. Implications of the histological determination of microRNA in the screening, diagnosis and prognosis of colorectal cancer. J Surg Oncol. 2013;108(1):70-73. https://doi.org/10.1002/jso.23344.
- Menendez P, Padilla D, Villarejo P, et al. Prognostic implications of serum microRNA-21 in colorectal cancer. J Surg Oncol. 2013;108(6):369-373. https://doi.org/10.1002/jso.23415.
- Chen X, Ba Y, Ma L, et al. Characterization of micro-RNA in serum: a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases. Cell Res. 2008;18(10):997-1006. https://doi.org/10.1038/cr.2008.282.
- Ng EK, Chong WW, Jin H, et al. Differential expression of micro-RNA in plasma of patients with colorectal cancer a potential marker for colorectal cancer screening. Gut. 2009;58(10):1375-1381. https://doi.org/10.1136/gut.2008.167817.
- Huang Z, Huang D, Ni S, et al. Plasma micro-RNA are promising novel biomarkers for early detection of colorectal cancer. Int J Cancer. 2010;127(1):118-126. https://doi.org/10.1002/ijc.25007.
- Pu XX, Huang GL, Guo HQ, et al. Circulating miR-221 directly amplified from plasma is a potential diagnostic and prognostic marker of colorectal cancer and is correlated with p53 expression. J Gastroenterol Hepatol. 2010;25(10):1674-1680. https://doi.org/10.1111/j.1440-1746.2010.06417.x.
- Kanaan Z, Roberts H, Eichenberger MR, et al. A plasma microRNA panel for detection of colorectal adenomas: a step toward more precise screening for colorectal cancer. Ann Surg. 2013;258(3):400-408. https://doi.org/10.1097/SLA.0b013e3182a15bcc.
- Cheng H, Zhang L, Cogdell DE, et al. Circulating plasma MiR-141 is a novel biomarker for metastatic colon cancer and predicts poor prognosis. PLoS One. 2011;6(3):e17745. https://doi.org/10.1371/journal.pone. 0017745.
- Wang LG, Gu J. Serum microRNA-29a is a promising novel marker for early detection of colorectal liver metastasis. Cancer Epidemiol. 2012;36(1):e61-67. https://doi.org/10.1016/j.canep.2011.05.002.
- Menendez P, Villarejo P, Padilla D, et al. Diagnostic and prognostic significance of serum micro-RNA in colorectal cancer. J Surg Oncol. 2013;107(2):217-220. https://doi.org/10.1002/jso.23245.