Влияние нарушений преаналитического этапа на достоверность результата диагностики SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Введение. Лабораторная диагностика COVID-19 методом полимеразной цепной реакции является ключевым этапом постановки диагноза. Любое лабораторное исследование включает в себя преаналитический этап, соблюдение которого необходимо для выполнения главной задачи проведения анализа – получения достоверного результата. Согласно временному руководству по лабораторной диагностике COVID-19 в условиях пандемии, мазки из носоглотки или ротоглотки в стерильной пластиковой пробирке с транспортной средой доставляют в лабораторию при температуре от 2 до 8 °C. Время доставки образцов до лаборатории исполнения не должно превышать 5 дней. Длительное хранение допускается при –20 °С или –70 °С.

Цель исследования – оценить влияние физических факторов, не соответствующих требованиям преаналитического этапа, на достоверность определения РНК SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени.

Материал и методы. Для исследования использовали 50 положительных респираторных мазков SARS-CoV-2, каждый из которых разделили на 4 пробы (группы): образцы первой группы выдерживали 7 дней при температуре 5 °С, пробы второй группы – при температуре 25 °С, образцы третьей группы подвергали двукратной заморозке, а четвертой группы – воздействию ультрафиолетового излучения. Затем проводили повторное исследование образцов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и интерпретацию порогового цикла амплификации.

Результаты. Влияние ультрафиолетового излучения привело к снижению количества положительных проб на 20%, а также к повышению медианы порогового цикла амплификации на 1,1 единицу. При двукратной заморозке биологического материала наблюдали снижение доли положительных образцов на 18%, при продолжительном хранении проб при температуре 5 °С – на 20%, при хранении клинического материала при температуре 25 °С – на 14%. Достоверных различий порогового цикла опытной и контрольной проб для данных факторов выявлено не было.

Выводы. Среди рассмотренных физических факторов наиболее выраженный негативный эффект на сохранность РНК SARS-CoV-2 оказывает воздействие ультрафиолетового излучения. Продолжительное хранение биоматериала при 5 °С и 25 °С, как и двукратная заморозка образцов, также оказывает отрицательное влияние на достоверность результатов ПЦР-диагностики COVID-19.