Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии

Введение. Мультирезистентность Klebsiella pneumoniae к известным противомикробным средствам определяет необходимость срочной разработки новых препаратов, проявляющих антибактериальный эффект. Соединения, применяемые при лечении неинфекционных патологий, воздействующие на различные белковые мишени и реализующие «антимикробный потенциал», считаются перспективными при поиске новых производных. Повышенный интерес представляет спрогнозированная высокая степень вероятности ингибирования стерол-27-гидроксилазы цитохрома P-450 (CYP27A1) новыми производными хиназолин-4(3Н)-она и хиназолин-2,4(1Н,3Н)-диона с возможностью предотвращения процессов превращения холестерина, как основного компонента липидных рафтов макрофага, на которых осуществляется адгезия патогена. Активация фагоцитоза, а также нарушение образования полисахаридной капсулы Klebsiella pneumoniae рассматриваются как один из вероятных механизмов антибактериального эффекта изучаемых веществ.

Цель работы – определение параметров реакционной способности и потенциальной фармакологической активности производных хиназолин-4(3Н)-она и хиназолин-2,4(1Н,3Н)-диона; прогнозирование механизма противомикробного действия новых хиназолинонов в отношении Klebsiella pneumoniae на основе образования комплекса с CYP27A1.

Материал и методы. Прогноз вероятности ингибирования CYP27A1 новыми производными хиназолинона осуществлен с применением программы PASS. Расчет квантово-химических параметров выполнен параметризированным методом PM7 в программе MOPAC 2016. Структурные характеристики изучаемых веществ определены с помощью ProTox 3,0. Оценка некоторых фармакокинетических показателей выполнена программным инструментом admetSAR. Определение энергетических параметров межмолекулярных комплексов «хиназолинон –

Результаты. Установлены квантово-химические, структурные параметры производных хиназолин-4(3Н)-она и хиназолин-2,4(1Н,3Н)-диона, а также их межмолекулярных комплексов с CYP27A1, спрогнозированы некоторые фармакокинетические показатели изучаемых веществ.

Выводы. Контроль взаимодействия соединения с липидным рафтом макрофага и увеличением степени проникновения патогена в его клетку может быть рассмотрен как вероятный механизм антибактериального действия производных хиназолин-4(3Н)-она и хиназолин-2,4(1Н,3Н)-диона в отношении K. pneumoniae. Увеличение количества нафтильных радикалов в их молекуле приводит к уменьшению реакционной способности. Нафтильные радикалы не выполняют роль фармакофора антимикробного действия в отношении K. pneumoniae.

Введение. Трициклические антидепрессанты (ТЦА) – «исторически» первая группа препаратов для лечения депрессии, механизм которых связан с влиянием на продолжительность нахождения моноаминов в пресинаптической щели, а также блокированием м-холинорецепторов и α-адренорецепторов. Трициклические антидепрессанты могут проявлять токсикологический эффект, они являются причиной отравлений с летальным исходом. Данная группа препаратов часто используется среди наркозависимых лиц, а также в криминальной среде.

Цель исследования – определение оптимального и эффективного метода извлечения ТЦА из биологического материала с использованием твердофазной (ТФЭ) и жидкость-жидкостной экстракций (ЖЖЭ) для химико-токсикологических исследований.

Материал и методы. Объект исследования – представители группы ТЦА: имипрамин, амитриптилин, кломипрамин. Биологическим объектом служила моча. Для исследований методом ТФЭ использовали колонки фирмы Agilent Technologies, содержащие сорбент Evidex и ODS-C18. При изолировании веществ методом ЖЖЭ применяли стандартную методику. Анализ проводили на газовом хроматографе с масс-селективным детектором.

Результаты. Разработана методика экстракции на твердом сорбенте с использованием фосфатного буфера с рН 4.8. При использовании метода ЖЖЭ наблюдается большее загрязнение пробы соэкстрактивными примесями биологического происхождения. Погрешность полученных результатов по изолированию веществ на твердом сорбенте не превышает 10%, для метода ЖЖЭ – погрешность в диапазоне 25–35%. Проведено сравнение двух методов экстракций при различных концентрациях веществ. Установлено преимущество использования сорбента ODS-C18 для ТФЭ. Построены калибровочные графики для метода ТФЭ. Для всех исследуемых ТАД определены пределы качественного обнаружения и количественного определения.

Выводы. Выявлено преимущество использования ТФЭ для изолирования ТЦА в практических исследованиях относительно стандартной методики ЖЖЭ.

Введение. Глиобластома – одна из наиболее агрессивных злокачественных опухолей головного мозга, отличающаяся низкой чувствительностью к лекарственной терапии, частым рецидивированием после хирургического удаления новообразования и крайне неблагоприятным прогнозом.

Цель работы – анализ общей выживаемости больных первичной глиобластомой головного мозга с учетом содержания глиального фибриллярного кислого протеина (GFAP) в сыворотке крови.

Материал и методы. Обследовали 176 больных первичной глиобластомой IV степени злокачественности по данным морфологического и молекулярно-генетического исследования (99 мужчин и 77 женщин) в возрасте от 18 до 82 лет, проходивших лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» в период с 2013 по 2024 гг. Концентрацию GFAP в сыворотке крови определяли до начала лечения иммуноферментным методом с помощью тест-системы Human GFAP ELISA (Biovendor, Чехия). Полученные данные обрабатывали с помощью программ Statistica 10 (StatSoft) и SPSS (IBM).

Результаты. Из 176 обследованных пациентов 72 были живы на момент завершения исследования, медиана срока наблюдения составила 7,8 мес., при этом 104 больных умерли в сроки от 1 до 103 мес., медиана срока жизни – 9,1 мес. Медиана срока жизни больных глиобластомой составила 14,8 мес. Общая 1-летняя выживаемость составила 56,7±4,2%, 2-летняя – 39,2±4,3%, 3-летняя – 30,0±4,1%, 4и 5-летняя – 26,8±4,0%, 10-летняя – 15,0±4,4%. Риск смерти больных первичной глиобластомой головного мозга был наибольшим в первые два года наблюдения от момента постановки диагноза. Не установлено связи отдаленных результатов лечения с полом и возрастом больных, со стороной опухолевого поражения. Для изучения связи отдаленных результатов лечения с концентраций GFAP в сыворотке крови пациентов разделили на две группы: пациенты, у которых GFAP не выявлен; пациенты с наличием GFAP в сыворотке крови. Медиана срока жизни в группе из 46 пациентов с нулевыми концентрациями GFAP составила 24,8 мес., в группе из 130 пациентов с наличием GFAP – 13,7 мес. (р=0,047). Зависимости отдаленных результатов лечения больных первичной глиобластомой от уровня GFAP в сыворотке крови при ненулевой концентрации маркера не обнаружено. Различия в общей выживаемости в зависимости от уровня GFAP в сыворотке крови наиболее выражены у женщин и в группе пациентов моложе 50 лет. Так, медиана срока жизни больных глиобластомой моложе 50 лет при отсутствии GFAP была многократно больше, чем у пациентов с наличием данного маркера (70,8 и 12,4 мес. соответственно).

Выводы. Общая выживаемость больных первичной глиобластомой IV степени злокачественности статистически значимо выше при отсутствии GFAP в сыворотке крови, чем при наличии маркера, поэтому обнаружение GFAP в сыворотке крови можно рассматривать как прогностически неблагоприятный фактор.

Введение. Исследование растворимых форм рецептора и лиганда контрольной точки иммунитета (КТИ) PD-1/PD-L1 считают одним из перспективных направлений при почечно-клеточном раке (ПКР). Эта система активно участвует в регуляции противоопухолевого иммунитета и включает в себя белок программируемой клеточной гибели клеток PD-1 (programmed cell death protein 1) и два лиганда PD-L1, PD-L2. Известно, что активация системы PD-1/PD-L1 одновременно стимулирует апоптоз антиген-специфичных Т-клеток и подавляет апоптоз регуляторных супрессорных Т-клеток, что позволяет «ускользать» опухоли от действия иммунной системы хозяина.

Цель работы – анализ сывороточных уровней sPD-1 и sPD-L1 у больных почечно-клеточным раком, их связь с клиническими и морфологическими характеристиками заболевания.

Материал и методы. Исследовали уровни sPD-1 и sPD-L1 в сыворотке крови до лечения у 117 больных с новообразованием почки, в их числе 105 пациентов с почечно-клеточным раком (ПКР) (63 мужчины и 42 женщины) в возрасте от 33 лет до 81 года (медиана 60 лет) в различных стадиях заболевания. У 12 больных (3 мужчины, 9 женщин) в возрасте от 29 до 84 лет (медиана 48,5 лет) обнаружена доброкачественная опухоль почки (ДОП). Группу контроля составили 67 здоровых людей (27 мужчин, 40 женщин) в возрасте от 22 до 82 лет (медиана 53 года). Концентрацию sPD-L1 и sPD-1 определяли в сыворотке крови до лечения с помощью наборов реактивов Human PD-L1 Platinum ELISA и Human PD-1 ELISA kit (Affimetrix, eBioscience, США). Статистический анализ распределений изучаемых признаков проводили с помощью критерия согласия Колмогорова–Смирнова. Для выявления различий между значениями применяли однофакторный и многофакторный дисперсионный анализ. Все вычисления выполняли на персональном компьютере с помощью пакета статистических программ Statistica для Windows и SPSS.

Результаты. Обнаружена достоверно высокая медиана концентрации sPD-1 у больных ПКР, по сравнению с контролем; у больных ДОП медиана маркера не отличалась от контроля. Медиана сывороточного содержания sPD-L1 при ПКР оказалась значимо выше, чем в контроле и не отличалась от группы больных ДОП. Дисперсионный анализ показателей sPD-1, sPD-L1, sPD-1/sPD-L1 в сыворотке крови в контроле и у больных ПКР не выявил связи с возрастом. Показатель sPD-L1 у больных ПКР был достоверно выше у мужчин, по сравнению с женщинами. Индекс Т отражал показатель sPD-L1, его концентрации были достоверно выше у больных ПКР с метастазами в регионарных лимфоузлах. Индекс М у больных ПКР наибольшим образом отражал сывороточные уровни sPD-L1. Наименьшая медиана рецептора обнаружена при светлоклеточном ПКР. ROC-анализ указывает на перспективу дальнейших исследований sPD-L1 в качестве биомаркера в диагностике ПКР.

Выводы. Медианы sPD-1 и sPD-L1 достоверно выше у больных ПКР, чем в контроле. Дисперсионный анализ значений исследованных показателей в контроле и у больных ПКР не показал связи с возрастом. Индекс Т и М тесно связаны с уровнями sPD-L при ПКР. У больных ПКР выявлены достоверные различия уровней рецептора PD-1 между различными морфологическими вариантами опухоли. Анализ диагностической значимости sPD-L1 у больных ПКР указывает перспективу дальнейших исследований биомаркера в диагностике ПКР.

Введение. Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) является одной из актуальных проблем здравоохранения, характеризующейся высоким ростом распространенности во всем мире. Это заболевание сопровождается избыточным накоплением липидов и развитием воспаления в печени. Для изучения механизмов патогенеза НАЖБП активно используется модель стеатоза с применением иммортализованных клеточных линий.

Цель работы – усовершенствование модели стеатоза in vitro с использованием клеток HepG2 путем сравнительного анализа двух методов индукции стеатоза с использованием комплекса жирных кислот (ЖК) с бычьим сывороточным альбумином (БСА), полученного методом простого растворения или конъюгирования.

Материал и методы. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью XTT-теста. Накопление липидов в клетках HepG2 измеряли методом GPO-PAP, нормализуя уровни триглицеридов (ТГ) по содержанию клеточного белка. Продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-8, как одного из маркеров воспаления, количественно определяли с помощью иммуноферментного анализа. Статистическую значимость оценивали с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты. Оптимальная концентрация ЖК, способствующая накоплению липидов и развитию воспаления без выраженного цитотоксического эффекта в клетках HepG2, составила 0,75 мМ. Конъюгированный комплекс ЖК-БСА привел к более высокому накоплению ТГ по сравнению с комплексом ЖК-БСА, полученным путем растворения. Однако уровни ИЛ-8 были значительно ниже в культуральной жидкости клеток HepG2, обработанных конъюгированным комплексом, по сравнению с клетками, обработанными комплексом ЖК-БСА, полученным путем растворения.

Выводы. Применение конъюгированного комплекса ЖК-БСА позволило усовершенствовать модель стеатоза in vitro, более приближенную к физиологическим механизмам развития НАЖБП.