Выбор клеточной линии для получения штамма-продуцента рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона человека


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Фолликулостимулирующий гормон - это один из важнейших гормонов репродуктивной системы человека, который широко используется во вспомогательных репродуктивных технологиях. Выбор штамма-продуцента рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона человека (рчФСГ) одна из ключевых задач биотехнологического процесса. Цель работы. Целью работы являлось получение стабильной клеточной линии, продуцирующей рчФСГ, с использованием двух различных родительских клеточных линий СНО. Материалы и методы. Для получения стабильных клонов, продуцирующих рчФСГ, были использованы две клеточные линии -СНО-К1 и СНО-DXB 11, адаптированные к культивированию в бессывороточной среде. Подсчет клеток и оценку клеточной жизнеспособности осуществляли с помощью окраски трипановым синим. Концентрацию рчфСГ определяли методом иммуноферментного анализа, подлинность белка определяли методом вестерн-блотинга. Результаты. Четыре наиболее продуктивных клона, полученные с использованием клеточной линии CHO-DXB 11, были отобраны после трех этапов скрининга - отбор пула, селекция клонов и амплификация с использованием метотрексата. Наибольшей продуктивностью в течение 6 дней культивирования обладал клон CHO-FSH 11/24 - 7,1±0,6 мг/л. Три клона были выбраны после траснфекции и отбора клонов с использованием клеточной линии CHO-K1. Клон CHO-FSH 91 обладал наибольшей продуктивностью после 6 дней культивирования - 10,8±0,9 мг/л. Молекулярные массы препаратов рчФСГ, полученных от разных клеточных линий-продуцентов, совпадали с молекулярной массой коммерческого препарата «Гонал Ф» (Merck Serono). Выводы. Продуцент, полученный с помощью клеточной линии СНО-К1, будет использован для дальнейших экспериментов.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

В. С Монахова

ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов»

Email: v.s.monakhova@hpb.spb.ru
биолог

Н. В Пигарева

ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов»

к.м.н., вед. биолог

А. С Симбирцев

ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов»

чл. -корр. РАН, д.м.н., профессор, науч. руководитель

Список литературы

  1. Latash W.D., Karande V.C., Klipstein S. The development of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) for use in the treatment of infertility: new solutions to old challenges. Reviews in Gynaecological Practice. 2004; 4:203-210.
  2. Keene J.L., Matzuk M.M. et al. Expression of biologically active human follitropin in chinese hamster ovary cells. The Journal of Biological Chemistry. 1989; 264(9):4769-4775.
  3. Olijve W., Boer W. et al. Molecular biology and biochemistry of human recombinant follicle stimulating hormone (Puregon®). Molecular Human Reproduction. 1996; 2(5):371-382.
  4. NA K.H., Seo K.S., Kim W.B., Kim S.-Ch., Lee S.-H., Lee K.S. Purification and Characterization of Recombinant Human Follicle Stimulating Hormone Produced by Chinese Hamster Ovary Cells. J. Microbiol. Biotechnol. 2005; 15(2):395-402.
  5. Kim D.J., SeokS.-H., BaekM.-W., Lee H.-Y., Juhn J.-H., Lee S. et al. Highly expressed recombinant human follicle-stimulating hormone from Chinese hamster ovary cells grown in serum-free medium and its effect on induction of folliculogenesis and ovulation. 2010; 93(8):2652-2660.
  6. Патент № 2615447 (РФ). Синтетическая ДНК, кодирующая интерлейкин-7 человека, содержащий ее экспрессионный вектор (варианты), штамм-продуцент интерлейкина-7 человека и способ получения интерлейкина-7 человека. Ищенко А.М., Кудлинг Т.В., Петров А.В., Пигарева Н.В., Протасов Е.А., Симбирцев А.С. 2017.
  7. Патент № 2616273 (РФ). Синтетическая ДНК, кодирующая антимюллеров гормон человека, содержащий ее экспрессионный вектор pTVK4pu/MISOPT и штамм клеток яичников китайского хомячка CHO-MIS - продуцент рекомбинантного антимюллерового гормона человека. Петров А.В., Карасев М.М., Кудлинг Т.В., Пигарева Н.В., Сергеева В.Е., Трофимов А.В., Ищенко А.М., ГорбуновА А.,Вахрушев А.В., Симбирцев А.С. 2017.
  8. Betts Z., Dickson A.J. Ubiquitous Chromatin Opening Elements (UCOEs) effect on transgene position and expression stability in CHO cells following methotrexate (MTX) amplification. Biotechnol J. 2016; 11(4):554-641.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© ИД "Русский врач", 2020