ANALGETIC ACTIVITY OF A BENZIMIDAZOLE DERIVATIVE ON MODELS OF INFLAMMATORY PAIN

Full Text

Пристальное внимание в последние годы уделяется изучению селективных каппа-опиоццных агонистов, обладающих рядом преимуществ по сравнению с неселективными опиоидами. Существуют убедительные литературные данные, свидетельствующие о выраженной активности каппа-агонистов не только на центральных моделях алгезии, но и на периферических [4]. В ходе предыдущих экспериментов по направленному скринингу новых производных гетероциклических систем в тестах in vitro было выявлено соединение производное морфолиноэтилбензи-мидазола под лабораторным шифром РУ-1205, с высокой каппа-опиоидной агонистической активностью [2]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение анальгетической активности соединения РУ-1205 в тестах острой и хронической воспалительной боли. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ В данной работе представлены данные по изучению обезболивающих свойств соединения дигидрохлорида 9-(2-морфолиноэтил)-2-(4-фторфенил)имида-зо[1,2-а]-бензимидазола (РУ-1205), синтезированного в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета (Пат. РФ № 2 413 512 С1 от 279.07.2009 г.) [3] При оценке ноцицептивной чувствительности использовались буторфанола тартрат («ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), налоксон (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), адъювант Фрейнда («SIGMA», США), формалин («Биомед», Россия). Лицензия на работу с наркотическими средствами ЛО-34-04-000022 от 12 октября 2012 г. Эксперименты выполнялись на 126 самцах нелинейных белых крыс массой 220-250 г, содержащихся в условиях вивария (температура 22-24 °С, относительная влажность воздуха 40-50 %) с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных в соответствии с ГОСТ Р 50258-92, с соблюдением правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ, регламентированных ГОСТ Р 51000.3-96 и ГОСТ Р 51000.4-96, а также правил и Международных рекомендаций «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях». Исследование анальгетической активности проводили в соответствии с «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [1]. Для оценки влияния соединения на острое воспаление использовали метод формалиновой гиперал-гезии и метод механического раздражения на фоне формалиновой гипералгезии. Данное состояние моделировали подкожным введением 50 мкл 2%-го водного раствора формалина в тыльную поверхность правой задней лапки. Регистрировалось число болевых реакций «flinches» (поднятие лапки, облизывание, покусывание места инъекции) с момента введения формалина и на протяжении всего периода наблюдения с учетом острой (первые 10 мин) и воспалительной (с 10 по 60 мин) фаз ноцицептивного ответа. Анальгетическую активность соединений оценивали отдельно для I и II фаз ноцицептивного ответа по уменьшению числа болевых реакций относительно таковых у контрольных животных. Выпуск 2 (58). 2016 101 ЩШгорСз [ЩсмеТКЩ В основе теста Рандалл-Селлитто лежит возникновение афферентной болевой импульсации при постепенно усиливающемся давлении на фоне острого воспаления химическим раздражителем. Механическую гипералгезию индуцировали также введением 50 мкл 2%-го раствора формалина в вентро-латеральную поверхность правой задней лапки подкожно с последующим применением дозированного нарастающего механического давления, точечно приложенного к месту инъекции. Регистрировали порог ноцицептивного ответа (вес в граммах, при достижении которого появлялся рефлекс «отдергивания лапки») через 2 минуты после инъекции формалина. Исследуемое соединение вводилось внут-рибрюшинно, равно как и препарат сравнения бу-торфанол, в дозах 0,01-1 мг/кг. Для моделирования хронического воспаления за 4 дня до эксперимента животным подкожно в вен-тролатеральную поверхность правой задней лапки вводился адъювант Фрейнда (взвесь БЦЖ в вазелиновом масле) в объеме 0,05 мл. Критерием достижения ноцицептивного порога, выражаемого в граммах, являлся рефлекс «отдергивания лапы» при точечном механическом давлении на ее тыльную поверхность на 4-й день эксперимента. Исследуемые вещества вводились внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг 2 раза в день, начиная с первого дня эксперимента [4]. Для подтверждения опиоидного механизма действия проводили тесты с антагонистом опиоидных рецепторов - налоксоном. Данные обрабатывали статистически при помощи компьютерной программы GraphPad Prism 5.0. с использованием критериев Краскелла-Уоллиса и Манна-Уитни. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Субплантарная инъекция 2%-го формалина в дорсальную поверхность задней лапки вызывала характерную бифазную поведенческую ноцицептивную реакцию «flinch» (поднятие лапки, облизывание, покусывание места инъекции): острую или I фазу (первые 10 минут с пиком действия через 5 минут после введения формалина) и воспалительную или II фазу (с 10-й по 60-ю минуту с максимальной реакцией на 30-й минуте) ноцицептивного ответа. Введение растворителя не вызывало статистически значимых изменений порогов болевой чувствительности в контрольной группе животных и количество типичных поведенческих ответов составляло (150,2 ± 8,7) и (390,2 ± 12,5) «флинчей» в I и II фазах соответственно. В первой фазе формалинового теста соединение РУ-1205 при внутрибрюшинном введении в дозах 0,01 ; 0,1 и 1 мг/кг уменьшало число вздрагиваний конечности на 28, 40 и 57 % соответственно. Во второй фазе - на 16, 43 и 54 % соответственно. В данном тесте анальгетическая активность исследуемого соединения была равна препарату сравнения - буторфанолу (рис.). По уровню терапевтического индекса (ТИ = ЛД50/31Ц50) изучаемое соединение превосходило эталонный препарат во II фазе ноцицептивного ответа в 1,8 раза и его показатель составил 711,2 для препарата и 400 для буторфанола. На модели механической гипералгезии отмечалось статистически значимое уменьшение порога но-цицептивной реакции на 27,4 % по сравнению с интакт-ными животными, что составляло (740,6 ± 43,2) гр. В группе интактного контроля данный показатель соответствовал (885,6 ± 34,3) гр. А *Статистически значимо по отношению к интактному контролю (р < 0,05). Б Рис. Влияние соединения РУ-1205 и буторфанола на болевой порог крыс в тесте формалиновой боли (при в/бр введении): А - влияние соединений в острой фазе; Б - влияние соединений в воспалительной фазе 102 Выпуск 2 (58). 2016 ЛэеипрВз Тестируемое соединение РУ-1205, равно как и буторфанол, дозозависимо увеличивало порог болевой чувствительности в ответ на действие нарастающего механического стимула, точечно приложенного к задней лапке крысы в условиях формалиновой гипералге-зии. Исследуемое вещество в диапазоне доз 0,01- 1,0 мг/кг вызывало статистически значимое увеличение порога отдергивания лапки на 20,6; 58,3 и 93,2 % соответственно (p < 0,05) и было сопоставимо с препаратом сравнения (табл.). Влияние вещества РУ-1205 и буторфанола при в/бр введении на величину болевого порога при механическом давлении в тесте Рандалл-Селитто (M ± m) Вещество/группа Доза, мг/кг Болевой порог, г Контроль - 740,6 ± 43,2 РУ-1205 0,01 880,0 ± 27,6 0,1 1161,3 ± 53,6* 1,0 1313,8 ± 108,6* Буторфанол 0,01 911,3 ± 35,1 0,1 1138,3 ± 82,4* 1,0 1326,7 ± 95,5* *p < 0,05 - данные статистически значимы по отношению к контрольной группе животных. Анальгетический эффект соединения РУ-1205 блокировался антагонистом опиоидных рецепторов налок-соном, что подтверждает опиоидергический механизм его действия. Адъювант Фрейнда при введении в вентролате-ральную поверхность задней лапы крысы приводил к возникновению воспалительной реакции, сопровождающейся гипералгезией ткани с максимальной выраженностью на 4-е сутки. На фоне этого порог болевой чувствительности при механическом надавливании статистически значимо уменьшался на 35 % по сравнению с интактным контролем и составил (346,5 ± 13,8) г. Было установлено, что изучаемое соединение в дозе 10 мг/кг статистически значимо увеличивало порог «отдергивания лапки» на 45 % и было сопоставимо по активности буторфанолу. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Исследуемое соединение РУ-1205 проявляет дозозависимое анальгетическое действие на всех экспериментальных моделях периферической воспалительной боли, сопоставимое по активности с препаратом сравнения и превосходящее его по терапевтическому индексу почти в 2 раза.

About the authors

O. Yu. Grechko

The Volgograd state medical University

Department for Pharmacology

N. V. Eliseeva

The Volgograd state medical University

Email: nvkirillova@rambler.ru
Department for Pharmacology

A. A. Spasov

The Volgograd state medical University

Department for Pharmacology

R. A. Litvinov

The Volgograd state medical University

Department for Pharmacology

References

Supplementary files