Влияние Даларгина на гематологические индексы у мышей с экспериментальным язвенным колитом
- Авторы: Ляшев А.Ю.1, Маль Г.С.1, Затолокина М.А.1,2, Спиридонов К.Д.1, Спиридонов Д.Д.1, Тверской А.В.3
-
Учреждения:
- Курский государственный медицинский университет
- Орловский государственный университет имени И.С. Тургенева
- Белгородский государственный национальный исследовательский университет
- Выпуск: Том 22, № 1 (2025)
- Страницы: 75-79
- Раздел: Оригинальные исследования
- URL: https://journals.eco-vector.com/1994-9480/article/view/683119
- DOI: https://doi.org/10.19163/1994-9480-2025-22-1-75-79
- ID: 683119
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Низкая эффективность существующих методов терапии язвенного колита обусловливает необходимость внедрения новых способов его лечения. Показан корригирующий эффект даларгина при язвенном колите у мышей, однако механизм действия препарата требует дальнейшего изучения. В этой связи исследование влияния даларгина на динамику гематологических индексов у мышей с язвенным колитом представляет несомненный интерес. Язвенный колит мышам моделировали заменой питьевой воды 5%-м раствором декстрана сульфата натрия на 5 суток. Показано снижение индекса Кребса, увеличение лейкоцитарного индекса, индекса соотношения нейтрофилов и моноцитов и индекса соотношения лимфоцитов и моноцитов под влиянием даларгина (в дозе 100 мкг/кг подкожно в течение 7 дней) у мышей с экспериментальным язвенным колитом на 5-е сут., а также снижение индекса соотношения лимфоцитов и моноцитов на 7-е сут. Корригирующее влияние даларгина на гематологические индексы у мышей с язвенным колитом выше, чем у сульфасалазина.
Ключевые слова
Полный текст
Язвенный колит (ЯК) – хроническое, рецидивирующее заболевание толстого кишечника, впервые развивающееся преимущественно у молодых людей в возрасте 20–40 лет, приводящее к тяжелым осложнениям и инвалидизации пациентов [1]. Патогенез язвенного колита включает следующие этапы: нарушение барьерной функции слизистой оболочки толстого кишечника, пенетрация комменсальной и патогенной микрофлоры в глубокие слои кишечной стенки, патологическая активация нейтрофилов, макрофагов, дендритных клеток, лимфоцитов с последующим развитием иммунного воспаления [1]. Низкая эффективность существующих методов терапии ЯК обусловливает необходимость внедрения новых способов его лечения. Ранее показана важная роль генетических факторов в развитии ЯК, что открывает перспективы использования генной терапии [1]. Установлена важная роль оксидативного стресса в повреждении кишечной стенки при патологии толстого кишечника [2]. Учитывая вышесказанное, использование препаратов, обладающих широким спектром фармакологической активности, включая иммуномодулирующее и антиоксидантное действие, представляет несомненный интерес.
Даларгин эффективен при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта, проявляет иммуномодулирующее и антиоксидантное действие [3]. Ранее установлено его корригирующее действие при экспериментальном ЯК у мышей, что проявлялось уменьшением индекса активности болезни, распространенности язв и инфильтратов в стенке толстого кишечника [4]. При этом механизм фармакологического влияния даларгина при ЯК требует дальнейшего изучения.
Известно, что гематологические индексы используются как удобные и информативные маркеры, позволяющие судить о тяжести воспаления, активности врожденного и адаптивного клеточного иммунитета при различных патологических процессах [5, 6].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучение влияние даларгина на динамику гематологических индексов у мышей с экспериментальным язвенным колитом.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования выполнены на 104 мышах-самцах Balb/C весом 21–23 г. Животные были разделены на следующие группы: 1) интактная – 8 мышей; 2) ЯК + физраствор подкожно – 24 мыши; 3) ЯК + физраствор внутрижелудочно – 24 мыши; 4) ЯК + даларгин – 24 мыши; 5) ЯК + сульфасалазин – 24 мыши. Язвенный колит моделировали заменой питьевой воды 5%-м раствором декстрана сульфата натрия (ДСН) (Mr = 40000, «neoFroxx GmbH», ФРГ) в кипяченой воде на 5 суток [7]. Животных выводили из эксперимента на 5, 7 и 28-е сутки. У мышей забирали периферическую кровь в объеме 0,5 мл. Рассчитывали лейкоцитарную формулу в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, и вычисляли следующие индексы: 1) индекс Кребса (отношение нейтрофилов к лимфоцитам); 2) коэффициент Бредекка (отношение лимфоцитов к палочкоядерным нейтрофилам); 3) лейкоцитарный индекс (ЛИ) (отношение лимфоцитов к нейтрофилам); 4) индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ); 5) индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ); 6) индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ) [6].
Даларгин (Тир-D-Ала-Гли-Фен-Лей-Арг) (НПО «Микроген», РФ) применяли подкожно в объеме 0,1 мл в физрастворе в дозе 100 мкг/кг 1 раз в сут. 7 дней с начала моделирования ЯК. Сульфасалазин («КРКА», Словения) вводили мышам внутрижелудочно в виде суспензии в физрастворе в дозе 200 мг/кг в объеме 0,3 мл семикратно с начала моделирования ЯК. Физраствор вводили подкожно (0,1 мл) или внутрижелудочно (0,3 мл) 1 раз в сут. 7 дней. Эксперименты проведены с соблюдением принципов гуманного отношения к лабораторным животным [8], Правил надлежащей лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 199н от 01.04.2016 г.) и одобрены Региональным этическим комитетом КГМУ (протокол заседания секции доклинических исследований РЭК № 1 от 03.04.2023).
Непараметрический U-критерий Манна – Уитни использовали для проверки статистических гипотез при p ≤ 0,05. Материал представлен как медиана (Me), нижний (Ql) и верхний (Q3) квартили. Статобработка выполнена с помощью программного обеспечения Statistica версия 13.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Моделирование ЯК мышам Balb/C сопровождалось увеличением индекса Кребса на 7,3–10,9 % (P = 0,0033–0,0101), снижением ЛИ на 28,3–30,0 % (P = 0,0009) и ИСЛМ на 33,4–35,1 % (P = 0,0023–0,0054) на 5-е сут. эксперимента (табл. 1, 2). На 7-е сут. эксперимента только ЛИ значимо ниже в контрольных группах, чем у интактных мышей: на 21,1–22,4 % (P = 0,0009). На 28-е сут. у мышей с хроническим ЯК все изучаемые индексы значимо отличались от аналогичных значений у интактных крыс. Показано снижение индекса Кребса на 45,5 % (P = 0,0009), ИСНМ на 46,2–49,2 % (P = 0,0009), ИСЛМ на 30,2–30,8 % (P = 0,0039). Остальные индексы, напротив, увеличивались: ЛИ на 40,1–40,9 % (P = 0,0009), индекс Бредекка в 3,87–3,92 раза (P = 0,0009), ИСЛЭ в 2,41–2,43 раза (P = 0,0009). Применение даларгина мышам с экспериментальным ЯК приводило к уменьшению индекса Кребса на 16,9 % (P = 0,0009), увеличению ЛИ на 21,8 % (P = 0,0009), ИСНМ на 34,5 % (P = 0,0054), ИСЛМ на 65,0 % (P = 0,0009) на 5-е сутки эксперимента. На 7-е сутки только ИСЛЭ значимо выше у мышей группы ЯК + даларгин по сравнению с контрольной на 96,7 % (P = 0,0357).
У мышей с хроническим ЯК (28-е сут.) отсутствовали значимые различия между сравниваемыми группами (P > 0,05). Введение сульфасалазина сопровождалось снижением индекса Кребса на 14,8 % (P = 0,0028) и увеличением ИСЛМ на 53,7 % (P = 0,0117) по сравнению со второй контрольной группой. Только один показатель значимо изменялся у мышей с ЯК + сульфасалазин: ЛИ был ниже на 7,5 % (P = 0,0157) на 28-е сут. При сравнении эффектов препаратов установлено, что индекс Кребса выше в группе ЯК + сульфасалазин на 6,1 % (P = 0,0274), ЛИ меньше на 6,3 % (P = 0,0274), ИСЛМ ниже на 4,5 % (P = 0,0357) на 5-е сут. эксперимента. На 7-е сут. ИСЛЭ ниже у мышей с ЯК, получавших даларгин, на 5,0 % (P = 0,0117). На 28-е сут. эксперимента индекс Кребса у мышей группы ЯК + даларгин ниже на 6,7 % (P = 0,0136), ЛИ выше на 8,1 % (P = 0,0087), ИСЛМ больше на 15,7 % (P = 0,0039), а ИСЛЭ на 3,8 % (P = 0,0039).
Таблица 1
Влияние даларгина на индекс Кребса, индекс Бредекка, индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов у мышей с язвенным колитом (Me [Q1; Q3])
Группа | Срок | Индекс Кребса | Индекс Бредекка | Индекс |
Интактная (n = 8) | ||||
Контрольная (n = 24) | 5 | |||
7 | ||||
28 | xP = 0,0009 | |||
Контрольная (n = 24) | 5 | xP = 0,0101 | ||
7 | ||||
28 | ||||
Группа (n = 24) | 5 | |||
7 | ||||
28 | ||||
Группа язвенный (n = 24) | 5 | |||
7 | ||||
28 |
Примечание: здесь и далее: х p < 0,05 по сравнению с интактной группой; * p < 0,05 по сравнению с контрольной группой; 1 p < 0,05 по сравнению с группой ЯК + сульфасалазин.
Таблица 2
Влияние даларгина на индекс лимфоцитов и моноцитов, индекс лимфоцитов и эозинофилов, лейкоцитарный индекс у мышей с язвенным колитом (Me [Q1; Q3])
Показатели | Срок | Индекс | Индекс | Лейкоцитарный |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Интактная | ||||
Контрольная | 5 | xP = 0,0023 | P = 0,2936 | xP = 0,0009 |
7 | P = 0,8336 | P = 0,8336 | xP = 0,0009 | |
28 | xP = 0,0039 | xP = 0,0009 | xP = 0,0009 | |
Контрольная | 5 | xP = 0,0054 | P = 0,1563 | xP = 0,0009 |
7 | P = 0,4623 | P = 0,1563 | xP = 0,0009 | |
28 | xP = 0,0039 | xP = 0,0009 | xP = 0,0009 | |
Группа | 5 | |||
7 | ||||
28 | ||||
Группа | 5 | |||
7 | ||||
28 |
Полученные в работе результаты подтверждают развитие острого ЯК на 5-е и 7-е сут. и хронического воспаления толстого кишечника на 28-й день. Общепризнано, что ЛИ отражает взаимоотношение гуморального и клеточного звеньев иммунной системы [6]. Снижение этого индекса при остром ЯК указывает на включение клеточных иммунных механизмов в процессе развития воспаления в толстом кишечнике.
Индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов отражает взаимоотношение аффекторного и эффекторного звеньев иммунного ответа [6]. Статистически значимое увеличение ИСЛМ у мышей с ЯК, получавших даларгин, на 5-е сут. эксперимента подтверждает стимулирующее действие препарата на аффекторное звено иммунитета, а снижение этого индекса на 7-е сут. – на активацию эффекторного звена. Ранее показано, что ИСНМ характеризует микрофагальное и макрофагальное звенья системы врожденного иммунитета [6]. По-видимому, изменение гематологических индексов на 5-е и, главным образом, на 7-е сут., обусловлено корригирующим действием даларгина на активность клеток макрофагально-моноцитарного пула. Установлено, что при развитии ЯК увеличивается количество опиоидных μ-рецепторов на макрофагах в стенке ободочной кишки [9]. Даларгин – аналог лей-энкефалина, который связывается с опиоидными δи μ-рецепторами [3]. Фармакологическое действие даларгина при ЯК связано, по-видимому, с активацией опиоидных μ-рецепторов на иммунокомпетентных клетках.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Полученные данные позволяют сделать вывод о связи противовоспалительного действия даларгина при экспериментальном ЯК с его модулирующим влиянием на макрофагальное звено врожденного иммунитета, а также аффекторное и эффекторное звенья клеточного иммунного ответа. При этом корригирующее влияние даларгина на гематологические индексы у мышей с ЯК выше, чем у препарата сравнения сульфасалазина, что подтверждается статистически значимыми различиями их действия на индекс Кребса, ЛИ, ИСЛМ, ИСЛЭ.
***
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.
Об авторах
Андрей Юрьевич Ляшев
Курский государственный медицинский университет
Автор, ответственный за переписку.
Email: andr.liashev@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-7170-0416
прикрепленный для подготовки диссертации к кафедре фармакологии
Россия, КурскГалина Сергеевна Маль
Курский государственный медицинский университет
Email: malgs@kursksmu.net
ORCID iD: 0000-0003-2723-781X
доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой фармакологии
Россия, КурскМария Алексеевна Затолокина
Курский государственный медицинский университет; Орловский государственный университет имени И.С. Тургенева
Email: marika1212@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9553-1597
доктор медицинских наук, профессор кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии, заведующая кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии
Россия, Курск; ОрелКирилл Дмитриевич Спиридонов
Курский государственный медицинский университет
Email: kirill.spiridonov.2012@bk.ru
ORCID iD: 0009-0004-0957-3398
студент 6-го курса лечебного факультета
Россия, КурскДаниил Дмитриевич Спиридонов
Курский государственный медицинский университет
Email: d.spiridonov2112@gmail.com
ORCID iD: 0009-0005-9549-1387
студент 6-го курса лечебного факультета
Россия, КурскАлексей Владимирович Тверской
Белгородский государственный национальный исследовательский университет
Email: tverskoy@bsu.edu.ru
ORCID iD: 0000-0003-1537-6564
кандидат медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой анатомии и гистологии человека, Медицинский институт
Россия, БелгородСписок литературы
- Polikarpova A.V., Egorova T.V., Bardina M.V. Genetically modified animal models of hereditary diseases for testing of gene-directed therapy. Research Results in Pharmacology. 2022;2(8):11–26.
- Королев В.А., Медведева О.А., Ряднова В.А. и др. Оценка состояния пристеночной микробиоты толстой кишки и антиоксидантных свойств колоноцитов крыс в условиях экологического дисбиоза и монокоррекции витамином E и облепиховым маслом. Научные результаты биомедицинских исследований. 2023;1(9):71–85.
- Булгаков СА. Пептидные лекарства в панкреатологии: состояние проблемы и перспективы. Доказательная гастроэнтерология. 2018;4(7):30–34.
- Супильников А.А., Шабалин В.Н. Значение интегральных гематологических индексов для прогнозирования заживления послеоперационной раны в эксперименте. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2018;3(62):49–54.
- Кутепов И.В., Ляшев Ю.Д., Затолокина М.А. Влияние синтетических аналогов индолицидина на гематологические индексы у крыс с экспериментальным пародонтитом. Вестник ВолГМУ. 2021;1(77):44–47.
- Хомякова Т.И., Золотова Н.А., Хочанский Д.Н., Хомяков Ю.Н.. Моделирование острого и хронического колита у мышей. Лечение и профилактика. 2013;7(3):148–159.
- Anselmi L., Huynh J., Duraffourd C. et al. Activation of μ opioid receptors modulates inflammation in acute experimental colitis. Neurogastroenterology and Motility. 2015;4(27):509–523.
- Ляшев А.Ю., Маль Г.С., Солин А.В. Изучение эффективности даларгина при экспериментальном язвенном колите. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2023;9(86):7–11.
- Du L., Ha C. Epidemiology and pathogenesis of ulcerative colitis. Gastroenterology Clinics of North America. 2020;4(49):643–654.
Дополнительные файлы
