Влияние Даларгина на гематологические индексы у мышей с экспериментальным язвенным колитом

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Низкая эффективность существующих методов терапии язвенного колита обусловливает необходимость внедрения новых способов его лечения. Показан корригирующий эффект даларгина при язвенном колите у мышей, однако механизм действия препарата требует дальнейшего изучения. В этой связи исследование влияния даларгина на динамику гематологических индексов у мышей с язвенным колитом представляет несомненный интерес. Язвенный колит мышам моделировали заменой питьевой воды 5%-м раствором декстрана сульфата натрия на 5 суток. Показано снижение индекса Кребса, увеличение лейкоцитарного индекса, индекса соотношения нейтрофилов и моноцитов и индекса соотношения лимфоцитов и моноцитов под влиянием даларгина (в дозе 100 мкг/кг подкожно в течение 7 дней) у мышей с экспериментальным язвенным колитом на 5-е сут., а также снижение индекса соотношения лимфоцитов и моноцитов на 7-е сут. Корригирующее влияние даларгина на гематологические индексы у мышей с язвенным колитом выше, чем у сульфасалазина.

Полный текст

Язвенный колит (ЯК) – хроническое, рецидивирующее заболевание толстого кишечника, впервые развивающееся преимущественно у молодых людей в возрасте 20–40 лет, приводящее к тяжелым осложнениям и инвалидизации пациентов [1]. Патогенез язвенного колита включает следующие этапы: нарушение барьерной функции слизистой оболочки толстого кишечника, пенетрация комменсальной и патогенной микрофлоры в глубокие слои кишечной стенки, патологическая активация нейтрофилов, макрофагов, дендритных клеток, лимфоцитов с последующим развитием иммунного воспаления [1]. Низкая эффективность существующих методов терапии ЯК обусловливает необходимость внедрения новых способов его лечения. Ранее показана важная роль генетических факторов в развитии ЯК, что открывает перспективы использования генной терапии [1]. Установлена важная роль оксидативного стресса в повреждении кишечной стенки при патологии толстого кишечника [2]. Учитывая вышесказанное, использование препаратов, обладающих широким спектром фармакологической активности, включая иммуномодулирующее и антиоксидантное действие, представляет несомненный интерес.

Даларгин эффективен при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта, проявляет иммуномодулирующее и антиоксидантное действие [3]. Ранее установлено его корригирующее действие при экспериментальном ЯК у мышей, что проявлялось уменьшением индекса активности болезни, распространенности язв и инфильтратов в стенке толстого кишечника [4]. При этом механизм фармакологического влияния даларгина при ЯК требует дальнейшего изучения.

Известно, что гематологические индексы используются как удобные и информативные маркеры, позволяющие судить о тяжести воспаления, активности врожденного и адаптивного клеточного иммунитета при различных патологических процессах [5, 6].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучение влияние даларгина на динамику гематологических индексов у мышей с экспериментальным язвенным колитом.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 104 мышах-самцах Balb/C весом 21–23 г. Животные были разделены на следующие группы: 1) интактная – 8 мышей; 2) ЯК + физраствор подкожно – 24 мыши; 3) ЯК + физраствор внутрижелудочно – 24 мыши; 4) ЯК + даларгин – 24 мыши; 5) ЯК + сульфасалазин – 24 мыши. Язвенный колит моделировали заменой питьевой воды 5%-м раствором декстрана сульфата натрия (ДСН) (Mr = 40000, «neoFroxx GmbH», ФРГ) в кипяченой воде на 5 суток [7]. Животных выводили из эксперимента на 5, 7 и 28-е сутки. У мышей забирали периферическую кровь в объеме 0,5 мл. Рассчитывали лейкоцитарную формулу в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, и вычисляли следующие индексы: 1) индекс Кребса (отношение нейтрофилов к лимфоцитам); 2) коэффициент Бредекка (отношение лимфоцитов к палочкоядерным нейтрофилам); 3) лейкоцитарный индекс (ЛИ) (отношение лимфоцитов к нейтрофилам); 4) индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ); 5) индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ); 6) индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ) [6].

Даларгин (Тир-D-Ала-Гли-Фен-Лей-Арг) (НПО «Микроген», РФ) применяли подкожно в объеме 0,1 мл в физрастворе в дозе 100 мкг/кг 1 раз в сут. 7 дней с начала моделирования ЯК. Сульфасалазин («КРКА», Словения) вводили мышам внутрижелудочно в виде суспензии в физрастворе в дозе 200 мг/кг в объеме 0,3 мл семикратно с начала моделирования ЯК. Физраствор вводили подкожно (0,1 мл) или внутрижелудочно (0,3 мл) 1 раз в сут. 7 дней. Эксперименты проведены с соблюдением принципов гуманного отношения к лабораторным животным [8], Правил надлежащей лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 199н от 01.04.2016 г.) и одобрены Региональным этическим комитетом КГМУ (протокол заседания секции доклинических исследований РЭК № 1 от 03.04.2023).

Непараметрический U-критерий Манна – Уитни использовали для проверки статистических гипотез при p ≤ 0,05. Материал представлен как медиана (Me), нижний (Ql) и верхний (Q3) квартили. Статобработка выполнена с помощью программного обеспечения Statistica версия 13.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Моделирование ЯК мышам Balb/C сопровождалось увеличением индекса Кребса на 7,3–10,9 % (P = 0,0033–0,0101), снижением ЛИ на 28,3–30,0 % (P = 0,0009) и ИСЛМ на 33,4–35,1 % (P = 0,0023–0,0054) на 5-е сут. эксперимента (табл. 1, 2). На 7-е сут. эксперимента только ЛИ значимо ниже в контрольных группах, чем у интактных мышей: на 21,1–22,4 % (P = 0,0009). На 28-е сут. у мышей с хроническим ЯК все изучаемые индексы значимо отличались от аналогичных значений у интактных крыс. Показано снижение индекса Кребса на 45,5 % (P = 0,0009), ИСНМ на 46,2–49,2 % (P = 0,0009), ИСЛМ на 30,2–30,8 % (P = 0,0039). Остальные индексы, напротив, увеличивались: ЛИ на 40,1–40,9 % (P = 0,0009), индекс Бредекка в 3,87–3,92 раза (P = 0,0009), ИСЛЭ в 2,41–2,43 раза (P = 0,0009). Применение даларгина мышам с экспериментальным ЯК приводило к уменьшению индекса Кребса на 16,9 % (P = 0,0009), увеличению ЛИ на 21,8 % (P = 0,0009), ИСНМ на 34,5 % (P = 0,0054), ИСЛМ на 65,0 % (P = 0,0009) на 5-е сутки эксперимента. На 7-е сутки только ИСЛЭ значимо выше у мышей группы ЯК + даларгин по сравнению с контрольной на 96,7 % (P = 0,0357).

У мышей с хроническим ЯК (28-е сут.) отсутствовали значимые различия между сравниваемыми группами (P > 0,05). Введение сульфасалазина сопровождалось снижением индекса Кребса на 14,8 % (P = 0,0028) и увеличением ИСЛМ на 53,7 % (P = 0,0117) по сравнению со второй контрольной группой. Только один показатель значимо изменялся у мышей с ЯК + сульфасалазин: ЛИ был ниже на 7,5 % (P = 0,0157) на 28-е сут. При сравнении эффектов препаратов установлено, что индекс Кребса выше в группе ЯК + сульфасалазин на 6,1 % (P = 0,0274), ЛИ меньше на 6,3 % (P = 0,0274), ИСЛМ ниже на 4,5 % (P = 0,0357) на 5-е сут. эксперимента. На 7-е сут. ИСЛЭ ниже у мышей с ЯК, получавших даларгин, на 5,0 % (P = 0,0117). На 28-е сут. эксперимента индекс Кребса у мышей группы ЯК + даларгин ниже на 6,7 % (P = 0,0136), ЛИ выше на 8,1 % (P = 0,0087), ИСЛМ больше на 15,7 % (P = 0,0039), а ИСЛЭ на 3,8 % (P = 0,0039).

 

Таблица 1

Влияние даларгина на индекс Кребса, индекс Бредекка, индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов у мышей с язвенным колитом (Me [Q1; Q3])

Группа

Срок
экспери
мента,
сут.

Индекс Кребса
(отношение
нейтрофилов
к лимфоцитам)

Индекс Бредекка
(отношение
лимфоцитов к
палочкоядерным
нейтрофилам)

Индекс
соотношения
нейтрофилов
и моноцитов

Интактная (n = 8)

0,55 [0, 54; 0, 56]

14,1 [12, 4; 18, 3]

13,0 [12, 3; 20, 3]

Контрольная
группа № 1
(язвенный колит
+ физраствор)

(n = 24)

5

0,59 [0, 58; 0, 62]
xP = 0,0033

14,9 [12, 3; 17, 4]
P = 0,7527

11,9 [11, 5; 12, 3]
P = 0,1563

7

0,55 [0, 54; 0, 56]
P = 1,0000

14,1 [12, 4; 18, 3]
P = 1,0000

15,5 [14, 0; 22, 5]
P = 0,2271

28

0,30 [0, 29; 0, 32]

xP = 0,0009

55,3 [36, 3; 74, 5]
xP = 0,0009

7,0 [5, 8; 7, 3]
xP = 0,0009

Контрольная
группа № 2
(язвенный колит
+ физраствор)

(n = 24)

5

0,61 [0, 59; 0, 62]

xP = 0,0101

15,7 [14, 1; 20, 9]
xP = 0,0009

14,8 [14, 0; 23, 8]
P = 0,4309

7

0,54 [0, 53; 0, 56]
P = 0,3720

14,9 [12, 4; 15, 2]
P = 0,2076

12,0 [10, 0; 18, 3]
P = 0,1278

28

0,30 [0, 30; 0, 31]
xP = 0,0009

54,5 [36, 8; 72, 5]
xP = 0,0009

6,6 [5, 5; 7, 3]
xP = 0,0009

Группа
язвенный колит
+ даларгин в
дозе 100 мкг/кг

(n = 24)

5

0,49 [0, 46; 0, 50]
*P = 0,0009
1P = 0,0274

16,2 [14, 4; 19, 3]
P = 0,1563,
1P = 0,5635

16,0 [15, 3; 31, 5]
*P = 0,0054
1P = 0,8336

7

0,54 [0, 53; 0, 58]
P = 0,9164.
1P = 0,8136

15,4 [15, 1; 19, 9]
P = 0,6365,
P = 0,1152

11,0 [8, 0; 17, 0]
P = 0,5286,
P = 0,1152

28

0,30 [0, 29; 0, 31]
P = 0,9164
1P = 0,0136

37,5 [36, 8; 74, 0]
P = 0,7929,
P = 0,0831

7,5 [7, 3; 9, 4]
P = 0,0742,
P = 0,3720

Группа язвенный
колит +
сульфасалазин
200 мг/кг

(n = 24)

5

0,52 [0, 51; 0, 52]
*P = 0,0028

15,9 [14, 1; 20, 7]
P = 0,0660

16,0 [14, 1; 20, 7]
P = 1,0000

7

0,54 [0, 54; 0, 54]
P = 0,9164

18,3 [15, 7; 21, 0]
P = 0,4008

14,2 [11, 2; 17, 0]
P = 0,7132

28

0,32 [0, 32; 0, 32]
P = 1,0000

36,0 [36, 0; 72, 5]
P = 0,1563

6,9 [5, 7; 7, 7]
P = 0,4008

Примечание: здесь и далее: х p < 0,05 по сравнению с интактной группой; * p < 0,05 по сравнению с контрольной группой; 1 p < 0,05 по сравнению с группой ЯК + сульфасалазин.

 

Таблица 2

Влияние даларгина на индекс лимфоцитов и моноцитов, индекс лимфоцитов и эозинофилов, лейкоцитарный индекс у мышей с язвенным колитом (Me [Q1; Q3])

Показатели

Срок
экспери
мента,
 сут.

Индекс
 соотношения
 лимфоцитов и
 моноцитов

Индекс
соотношения
лимфоцитов и
эозинофилов

Лейкоцитарный
индекс (отношение
лимфоцитов к
нейтрофилам)

1

2

3

4

5

Интактная

30,8 [30, 5; 47, 0]

30,5 [20, 9; 46, 8]

2,37 [2, 30; 2, 53]

Контрольная
группа № 1
(язвенный колит
 + физраствор)

5

20,0 [19, 7; 20, 4]

xP = 0,0023

59,5 [44, 5; 61, 0]

P = 0,2936

1,70 [1, 63; 1, 75]

xP = 0,0009

7

31,0 [30, 5; 47, 5]

P = 0,8336

30,5 [20, 3; 31, 5]

P = 0,8336

1,84 [1, 78; 1, 85]

xP = 0,0009

28

21,5 [18, 2; 24, 9]

xP = 0,0039

73,5 [72, 5; 74, 5]

xP = 0,0009

3,34 [3, 15; 3, 47]

xP = 0,0009

Контрольная
группа № 2
 (язвенный колит
 + физраствор)

5

20,5 [17, 5; 30, 0]

xP = 0,0054

60,0 [59, 5; 61, 0]

P = 0,1563

1,66 [1, 63; 1, 74]

xP = 0,0009

7

31,5 [31, 0; 47, 5]

P = 0,4623

47,3 [31, 0; 63, 0]

P = 0,1563

1,87 [1, 81; 1, 90]

xP = 0,0009

28

21,3 [18, 3; 24, 3]

xP = 0,0039

73,0 [72, 0; 74, 0]

xP = 0,0009

3,32 [3, 23; 3, 36]

xP = 0,0009

Группа
язвенный колит +
даларгин в дозе
 100 мкг/кг

5

33,0 [32, 3; 64, 0]
*P = 0,0009

32,8 [31, 8; 33, 0]
P = 0,2271

2,07 [2, 00; 2, 17]
*P = 0,0009

7

24,9 [17, 8; 29, 8]
*P = 0,0063

60,0 [59, 0; 61, 0]
*P = 0,0357

1,84 [1, 74; 1, 90]
P = 0,8748

28

24,9 [24, 7; 30, 8]
P = 0,1036

74,0 [73, 5; 75, 0]
P = 0,9977

3,34 [3, 22; 3, 41]
P = 1,0000

Группа
язвенный колит +
сульфасалазин
 200 мг/кг

5

31,5 [26, 0; 47, 0]
*P = 0,0117,
1P = 0,0357

31,3 [31, 0; 31, 8]
P = 0,0587,
P = 0,0929

1,94 [1, 93; 1, 97]
P = 0,0016,
1
P = 0,0274

7

26,2 [21, 0; 31, 5]
P = 0,1415,
P = 0,1036

63,0 [62, 0; 63, 0]
P = 0,3720,
1P = 0,0117

1,85 [1, 85; 1, 87]
P = 0,8748,
P = 0,7929

28

21,0 [18, 0; 24, 2]
P = 0,3446,
1P = 0,0039

71,5 [36, 0; 72, 5]
P = 0,0520,
1P = 0,0019

3,07 [3, 00; 3, 17]
*P = 0,0157,
1P = 0,0087

 

Полученные в работе результаты подтверждают развитие острого ЯК на 5-е и 7-е сут. и хронического воспаления толстого кишечника на 28-й день. Общепризнано, что ЛИ отражает взаимоотношение гуморального и клеточного звеньев иммунной системы [6]. Снижение этого индекса при остром ЯК указывает на включение клеточных иммунных механизмов в процессе развития воспаления в толстом кишечнике.

Индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов отражает взаимоотношение аффекторного и эффекторного звеньев иммунного ответа [6]. Статистически значимое увеличение ИСЛМ у мышей с ЯК, получавших даларгин, на 5-е сут. эксперимента подтверждает стимулирующее действие препарата на аффекторное звено иммунитета, а снижение этого индекса на 7-е сут. – на активацию эффекторного звена. Ранее показано, что ИСНМ характеризует микрофагальное и макрофагальное звенья системы врожденного иммунитета [6]. По-видимому, изменение гематологических индексов на 5-е и, главным образом, на 7-е сут., обусловлено корригирующим действием даларгина на активность клеток макрофагально-моноцитарного пула. Установлено, что при развитии ЯК увеличивается количество опиоидных μ-рецепторов на макрофагах в стенке ободочной кишки [9]. Даларгин – аналог лей-энкефалина, который связывается с опиоидными δи μ-рецепторами [3]. Фармакологическое действие даларгина при ЯК связано, по-видимому, с активацией опиоидных μ-рецепторов на иммунокомпетентных клетках.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные данные позволяют сделать вывод о связи противовоспалительного действия даларгина при экспериментальном ЯК с его модулирующим влиянием на макрофагальное звено врожденного иммунитета, а также аффекторное и эффекторное звенья клеточного иммунного ответа. При этом корригирующее влияние даларгина на гематологические индексы у мышей с ЯК выше, чем у препарата сравнения сульфасалазина, что подтверждается статистически значимыми различиями их действия на индекс Кребса, ЛИ, ИСЛМ, ИСЛЭ.

 

***

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

×

Об авторах

Андрей Юрьевич Ляшев

Курский государственный медицинский университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: andr.liashev@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-7170-0416

прикрепленный для подготовки диссертации к кафедре фармакологии

Россия, Курск

Галина Сергеевна Маль

Курский государственный медицинский университет

Email: malgs@kursksmu.net
ORCID iD: 0000-0003-2723-781X

доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой фармакологии

Россия, Курск

Мария Алексеевна Затолокина

Курский государственный медицинский университет; Орловский государственный университет имени И.С. Тургенева

Email: marika1212@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9553-1597

доктор медицинских наук, профессор кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии, заведующая кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии

Россия, Курск; Орел

Кирилл Дмитриевич Спиридонов

Курский государственный медицинский университет

Email: kirill.spiridonov.2012@bk.ru
ORCID iD: 0009-0004-0957-3398

студент 6-го курса лечебного факультета

Россия, Курск

Даниил Дмитриевич Спиридонов

Курский государственный медицинский университет

Email: d.spiridonov2112@gmail.com
ORCID iD: 0009-0005-9549-1387

студент 6-го курса лечебного факультета

Россия, Курск

Алексей Владимирович Тверской

Белгородский государственный национальный исследовательский университет

Email: tverskoy@bsu.edu.ru
ORCID iD: 0000-0003-1537-6564

кандидат медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой анатомии и гистологии человека, Медицинский институт

Россия, Белгород

Список литературы

  1. Polikarpova A.V., Egorova T.V., Bardina M.V. Genetically modified animal models of hereditary diseases for testing of gene-directed therapy. Research Results in Pharmacology. 2022;2(8):11–26.
  2. Королев В.А., Медведева О.А., Ряднова В.А. и др. Оценка состояния пристеночной микробиоты толстой кишки и антиоксидантных свойств колоноцитов крыс в условиях экологического дисбиоза и монокоррекции витамином E и облепиховым маслом. Научные результаты биомедицинских исследований. 2023;1(9):71–85.
  3. Булгаков СА. Пептидные лекарства в панкреатологии: состояние проблемы и перспективы. Доказательная гастроэнтерология. 2018;4(7):30–34.
  4. Супильников А.А., Шабалин В.Н. Значение интегральных гематологических индексов для прогнозирования заживления послеоперационной раны в эксперименте. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2018;3(62):49–54.
  5. Кутепов И.В., Ляшев Ю.Д., Затолокина М.А. Влияние синтетических аналогов индолицидина на гематологические индексы у крыс с экспериментальным пародонтитом. Вестник ВолГМУ. 2021;1(77):44–47.
  6. Хомякова Т.И., Золотова Н.А., Хочанский Д.Н., Хомяков Ю.Н.. Моделирование острого и хронического колита у мышей. Лечение и профилактика. 2013;7(3):148–159.
  7. Anselmi L., Huynh J., Duraffourd C. et al. Activation of μ opioid receptors modulates inflammation in acute experimental colitis. Neurogastroenterology and Motility. 2015;4(27):509–523.
  8. Ляшев А.Ю., Маль Г.С., Солин А.В. Изучение эффективности даларгина при экспериментальном язвенном колите. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2023;9(86):7–11.
  9. Du L., Ha C. Epidemiology and pathogenesis of ulcerative colitis. Gastroenterology Clinics of North America. 2020;4(49):643–654.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Ляшев А.Ю., Маль Г.С., Затолокина М.А., Спиридонов К.Д., Спиридонов Д.Д., Тверской А.В., 2025

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 79562 от 27.11.2020 г.