TOXICITY OF NEW NUCLEOSIDE DERIVATIVE UPON SINGLE INTRAGASTRIC ADMINISTRATION TO SENIOR ANIMALS

Full Text

В настоящее время актуален поиск новых мало- ние новый класс производных нуклеозида, среди кототоксичных психотропных лекарственных препаратов, об- рых обнаружены соединения с противовирусной [4], ан-ладающих широким спектром фармакологической ак- ксиолитической и антидепрессивной активностью [2]. тивности. В этом отношении обращает на себя внима- Углубленное фармакологическое изучение данных со- Выпуск 4 (48). 2013 101 единений позволило выявить наиболее перспективное вещество с лабораторным шифром ВМА-99-82, у которого противовирусная активность сочетается с выраженным антидепрессивным действием [3], что послужило поводом для его дальнейшего фармакологического и токсикологического изучения. ЦЕЛЬ РАБОТЫ С целью первичной оценки безопасности соединения ВМА-99-82 в настоящей работе сочли целесообразным исследовать острую токсичность при внутри-желудочном введении мышам и крысам. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты проводились на конвенциональных половозрелых животных обоего пола: 70 белых мышах, массой 21-25 гг и 70 крысах, массой 200-240 гг, доставленных из питомника ФКУЗ « Волгоградского научно-исследовательского Противочумного института» Рос-потребнадзора. После 2-недельного карантина в НИИ фармакологии ВолгГМУ животные были распределены на группы подопытных и контрольных. Рандомизация животных проводилась случайным способом, где важным критерием была масса тела животного. Различия по массе тела в группах не превышали 10 %. В каждой группе было по 5 особей самок и самцов. Подопытным животным производное нуклеозида ВМА-99-82 вводили интрагастрально в дозах, близких к летальной, и летальных. В качестве растворителя использовали 50%-й раствор диметилсульфоксида (вещество было трудно растворимо в воде) в объеме 15 мл/кг. В этой связи группе контрольных животных внутриже-лудочно вводили только 50%-й раствор диметилсуль-фоксида в таком же объеме. После введения соединения ВМА-99-82 наблюдения за животными велись в течение 2 недель. В первые сутки наблюдения проводились в течение 16 ч, непрерывно (с 8-часовым ночным перерывом). В этот период подопытные и контрольные животные находились по одной особи в плексигласовых домиках / 150х250х150 мм/, со свободным доступом к воде. У животных после введения соединения отмечали количество погибших, клинику отравления, в которой фиксировали изменения: общего состояния (состояние шерстного покрова, слизистых оболочек, опрятность и прочее), поведенческие реакции (характер передвижения, агрессивность, груминг), нервно-мышечную возбудимость (безусловно рефлекторные реакции на боль, стук и другие внешние раздражители), положение тела, координацию передвижения, вегетотропные эффекты (наличие уринаций, дефекаций, частоту дыхания, ректальную температуру и пр.). В последующем, по количеству погибших животных рассчитывали границы ЛД^. Расчет уровня ЛД_0 проводили по методу Литчфилда и Уилкоксона [5]. На 2-е сутки подопытных животных, оставшихся в живых, а также и контрольных, взвешивали и объединяли по соответствующим группам, раз мещали в стандартные клетки из поликарбоната размерами 300/230/170 мм (для мышей) и 500/350/390 (для крыс) на подстиле из опилок со свободным доступом к воде и пище. Самцы и самки находились отдельно. Наблюдения за оставшимися животными проводили в течение последующих 2 недель. Кроме того, в период эксперимента, на 1-; 7- и 14-е сутки проводили взвешивание животных (с использованием электронных весов модели МW-120), массу тела выражали в граммах. Результаты измерений массы тела статистически обрабатывали с использованием программы Microsoft Excel. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В наблюдениях за животными, получавших исследуемое соединение в различных дозах (приведены в табл. 1), существенных различий в клинике отравления мышей и крыс не обнаружено. Отмечено, что клиника токсических эффектов начинала проявляться через 7-15 мин после введения ВМА-99-82 с максимальным развитием на 30-40 мин. Для клиники токсических эффектов было характерно: первоначально угнетение подвижности, снижение возбудимости, развитие элементов седации. Данные эффекты регистрировались у животных, получавших изучаемое соединение в дозах, близкой к летальной (ЛД50) - 800 мг/кг у мышей и 4400 мг/кг у крыс, и прослеживались в течение 2-4 ч, а впоследствии постепенно нивелировались. К окончанию первых суток наблюдений состояние данных животных соответствовало контролю. У животных, получавших ВМА-99-82 в дозах, способствующих гибели (у мышей от 1000 мг/кг, у крыс от 4800 мг/кг), угнетение подвижности и возбудимости постепенно нарастало. К окончанию 1 -го часа наблюдений животные не передвигались, практически не реагировали на внешние раздражители (хлопок в воздухе, постукивания по камере наблюдений, болевые воздействия). Животные принимали боковое положение. Таблица 1 Исследуемые дозы и результаты гибели животных, после однократного интрагастрального введения соединения ВМА-99-82 Число погибших особей/общее число в группе доза вещества, мг/кг мыши доза вещества, мг/кг крысы 1 сутки 1 сутки самцы самки самцы самки 600 0/5 0/5 4000 0/5 0/5 800 1/5 1/5 4400 1/5 1/5 1000 2/5 2/5 4800 2/5 2/5 1200 3/5 4/5 5200 4/5 4/5 1400 5/5 5/5 5600 5/5 5/5 В общем состоянии отмечалось: бледность кожных покровов и слизистых оболочек. Шерстный покров 102 Выпуск 4 (48). 2013 ©згйирСз [ЩсоЩгІГІЩІ утрачивал блеск и опрятность, становился тусклым. Отмечалось ослабление и урежение дыхания. К исходу 2-го часа наблюдений у животных фиксировались акроцианоз, тонические судороги, резкое угнетение дыхания. Эпизоды тонических судорог продолжались еще на протяжении 1,5 часов. Гибель животных также прослеживалась в этот промежуток времени. Через 3-4 часа судороги у животных, оставшихся в живых, прекращались, они погружались в сон. Дыхание активировалось, чувствительность повышалась. К исходу первых суток наблюдений животные могли перемещаться по камере, реакции на внешние раздражители практически восстанавливались до контрольных. При этом в общем состоянии особых изменений не зафиксировано, акроцианоз сохранялся. На 2-й день наблюдений животных переводили на обычный режим содержания со свободным доступом к воде и пище. При этом была отмечена активизация их подвижности, а так же реактивности и реакций на внешние раздражители. Вместе с тем, данные подопытные животные были ослаблены, шерстный покров был тусклым, пищевая и питьевая активность не нарушены, но отчетливо снижены. Полное восстановление физического состояния (поведенческой активности, нервно мышечной возбудимости, ве-гетотропных реакций) наблюдались на 3-4-е сутки эксперимента. При этом в период последующих 2-недельных наблюдений отдаленных случаев гибели у особей не обнаружено. По результатам суточной динамики гибели животных, получавших интрагастрально соединение ВМА-99-82, были рассчитаны в мг/кг границы среднесмертельной дозы (ЛД50). Результаты расчета ЛД^ для мышей и крыс приведены в табл. 2, из которой следуют несущественные половые различия в границах показателя ЛД_0 у мышей и отсутствие таковых различий у крыс. На основании полученных значений и с учетом классификации по И. В. Саноцкому и И. П. Улановой (1975) исследуемое соединение ВМА-99-82 можно соотнести к классу малотоксичных. Таблица 2 Величины границ ЛД50 (в мг/кг) соединения ВМА 99-82 при внутрижелудочном введении мышам и крысам При сопоставлении данных по измерению массы тела у опытных и контрольных животных отмечено, что на 2-е сутки масса тела у подопытных животных, ос тавшихся в живых (относительно исходного состояния) была снижена на 10-18 %. Масса тела у контрольных животных, в этот же период, была также снижена в среднем на 10-12 °%. Дальнейшие наблюдения за массой тела животных позволили установить постепенное ее нарастание в группах и, к исходу 7 дней эксперимента, полное выравнивание веса тела в опытных и контрольных группах. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что по степени токсичности соединение ВМА - 99-82 можно отнести к классу малотоксичных. На основании динамики развития клинических признаков отравления и реабилитации физического стояния, а также динамики изменений массы тела можно предположить хорошую всасываемость соединения из желудочно-кишечного тракта и относительно быстрое его выведение из организма. Полагаем, что полученные данные, могут свидетельствовать о перспективности дальнейшего токсикологического изучения субстанции ВМА-99-82 в качестве нового антидепрессантного средства.

About the authors

L. I. Bugaiova

A. A. Ozerov

Email: prof_ozerov@yahoo.com

T. D. Denisova

Yu. A. Morozova

S. A. Lebedeva

References

Supplementary files