ВЛИЯНИЕ СТРЕССА НА ФОРМИРОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ АЦЕТАТНОЙ ЯЗВЫ У СТРЕССОУСТОЙЧИВЫХ И СТРЕССОНЕУСТОЙЧИВЫХ КРЫС

Полный текст

Язвенный дефект геликобактерной природы представляет собой зону инфильтративно-деструктивного воспаления тканей ЖКТ [5]. Наиболее приближенной к клинике моделью язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки является ацетатная язва [6], которая, по мнению ряда авторов, может также обсеменяться Helicobacter pylori и хронизироваться. В литературе долгие годы постулируется, что стресс негативно влияет на сдвиг баланса между факторами агрессии и механизмами защиты [2, 4]. Известно, что механизмы реализации стресс-реакции у стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых индивидуумов разные [3]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Определить влияние стрессирования на формирование экспериментальной ацетатной язвы желудка стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых крыс. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Для достижения поставленной цели было выполнено 6 серий экспериментов на 42 крысах линии Вистар под нембуталовым наркозом, предварительно разделенных на группу стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых методом открытого поля. В 1-й и 2-й контрольных сериях у стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых крыс выполняли все манипуляции, что и в экспериментальной серии, только не моделировали язву. В 3-й и 4-й сериях моделировалась ацетатная язва в антральной зоне на малой кривизне желудка по методу С. Ока-бэ [7], при этом экспериментальные животные 5-й и 6-й серий подвергались острому 24-часовому стрессиро-ванию через 3 сут. с момента моделирования ацетатной язвы. Всех крыс выводили из эксперимента через 7 сут. от его начала. Кровь забирали из подключичной (Vs) и портальной (Vp) вены, лимфу - из общего кишечного лимфатического протока (ОКЛП). Мочу собирали в течение суток в исходном состоянии и через 7 сут. с момента моделирования ацетатной язвы на фоне стрессирова-ния. Для исследования забирали ткани желудка с язвенным дефектом. Материал фиксировали в 10 %-м растворе формалина в течение 2 сут., после чего вырезали кусочки для гистологического исследования, которые заливали в парафин по стандартной методике. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, после чего оценивали тканевой и клеточный состав в зоне язвенных дефектов. В связи с тем что одним из древнейших регуляторов функции клеток является кальций и не менее значимый в поддержании параметров гомеостаза магний, для оценки функциональной активности тканей ЖКТ определяли их уровень в разных биологических средах. Содержание Mg2+ в плазме крови, суточном объеме мочи и кишечной лимфе определяли реактивами набора фирмы «Лахема». Концентрацию Mg2+ в эритроцитарной массе определялся по В. С. Камышникову [1]. Содержание Са2+ в плазме крови и лимфе производили с помощью наборов фирмы «Ольвекс диагностикум» (Россия), в суточном объеме мочи - по А. Я. Альгаузену. Для статистической обработки результатов исследования при нормальном распределении использовали критерий Стьюдента (M ± m). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Через 7 сут. с момента моделирования ацетатной язвы у стрессоустойчивых крыс площадь изъязвления 112 Выпуск 4 (52). 2014 ©зеторСз [gofiïijf3 составляла (38,72 ± 4,09) мм2 (рис. 1 а). При микроскопии тканей края язвы желудка был выявлен язвенный дефект, доходящий до середины мышечной оболочки, в дне которого определялись бесструктурные некротические массы, инфильтрированные обломками нейтро-филов, в более глубоких слоях-скопления нейтрофилов, лимфоцитов, и их обломков с единичными эозино-филами, в глубоких участках преобладают фибробласты. Формирование язвы сопровождалось уменьшением содержания Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs и Vp на 30,1 % (р < 0,001) и 21,9 % (р < 0,05) соответственно. Потеря Mg2+ с мочой уменьшалась на 61,5 % (р < 0,001). Содержание Са2+ в кишечной лимфе увеличивалось на 33,3 % (р < 0,05) на фоне снижения его потерь с мочой на 26,5 % (р < 0,05). У стрессоустойчивых крыс со сформировавшейся под влиянием стресса ацетатной язвой площадь дефекта оставалась практически такой же - (39,0 ± 2,33) мм2 (рис. 1б). Морфологические исследования выявили обширный глубокий (до середины мышечной оболочки) язвенный дефект, поверхностно в зоне язвы - бесструктурные некротические массы, инфильтрированные нейт-рофилами и их обломками, глубже - молодая незрелая грануляционная ткань (капилляры, среди клеточных элементов преобладают фибробласты и лимфоциты). Сравнительное исследование уровня Mg2+ в биологических средах у стрессоустойчивых крыс со сформировавшейся ацетатной язвой под влиянием острого стресса по отношению к животным c ацетатной язвой выявило значительное его повышение в эритроцитах крови из Vs на 57,3 % (р < 0,001). Магнийурез увеличивался на 18,5 % (р < 0,001). Также было выявлено в лимфе из ОКЛП повышение уровня Са2+ на 30,7 % (р < 0,001) на фоне его снижения на 39,8 % (р < 0,01) в суточном объеме мочи. У стрессонеустойчивых крыс площадь язвенного дефекта при моделировании ацетатной язвы составила (68,7 ± 9,44) мм2 (рис. 2 а). При морфологическом исследовании тканей желудка был выявлен язвенный дефект, доходящий до середины мышечной оболочки; поверхностно располагались бесструктурные некротические массы инфильтрированные нейтрофилами и их обломками, далее (глубже)-лимфоциты, фибробласты, умеренное количество нейтрофилов и эозинофилов. Формирование язвы приводило к уменьшению содержания Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs на 31,1 % (р < 0,05). Содержание Са2+ в плазме крови из подключичной и портальной вен уменьшалось на 28,6 % (р < 0,001) и 25 % (р < 0,01) соответственно. При воздействии острого стресса на стрессонеустойчивых животных со сформировавшейся ацетатной язвой площадь дефекта составила (75,7 ± 13,94) мм2 (рис. 2 б). При этом микроскопически также был выявлен обширный язвенный дефект с некрозом, фибрином, выраженной инфильтрацией нейтрофилами и их обломками, глубже в препарате - молодая незрелая грануляционная ткань. Сравнительное исследование содержания Mg2+ в биологических средах у стрессонеустойчивых крыс показало, что острое стрессирование животных с сформировавшейся ацетатной язвой приводит к выраженному увеличению его концентрации в эритроцитах крови из Vs и Vp на 42,5 % (р < 0,05) и 24,8 % (р < 0,05) соответственно по отношению к животным с ацетатной язвой. При этом потеря Mg2+ с мочой несколько увеличивалась (р > 0,1). Концентрация Ca2+ снижалась на 30,1 % (p < 0,05) в суточном объеме мочи, в плазме крови из Vs и Vp и лимфе из ОКЛП оставалась неизменной. Сравнительный анализ морфологических показателей в зоне язвенного дефекта желудка ацетатной природы у стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых крыс значимых различий не выявил. Различия в механизмах перераспределения, потерь с мочой катионов кальция и магния, регулирующих интенсивность внутриклеточных процессов, включая интенсивность пролиферации, заключаются у стрессоустойчивых животных в снижении внутриклеточного магния в крови из разных регионов. Одновременно у них возрастал уровень кальция в лим а б Рис. 1. Экспериментальные язвы желудка на 7 сут. у стрессоустойчивых крыс: а - ацетатная язва; б - ацетатная язва, формирующаяся на фоне острого стресса. Окрашивание гематоксилин-эозином. Окуляр 10, объектив 10 Выпуск 4 (52). 2014 113 ІШторСз а б Рис. 2. Экспериментальные язвы желудка на 7 сут. у стрессонеустойчивых крыс: а - ацетатная язва; б - ацетатная язва, формирующаяся на фоне острого стресса. Окрашивание гематоксилин-эозином. Окуляр 10, объектив 10 фе, оттекающей от поврежденных тканей. У стрессоустойчивых крыс со сформировавшейся ацетатной язвой уровень кальция и особенно магния в моче снижался, то есть потери этих макроэлементов уменьшались. У стрессонеустойчивых животных на фоне завершения формирования язвы желудка содержание магния в эритроцитарной массе падало до нижнего уровня нормальных величин, содержание кальция в плазме крови уменьшалось. При этом не выявлено снижения потерь изучаемых катионов с мочой, что разумно расценивать как срыв защитно-приспособительной реакции. Различия в механизмах магний-кальциевого обмена приводит к разной интенсивности изъязвления. Результаты сравнительного анализа даны в табл. Под влиянием острого стрессирования стрессоустойчивых крыс со смоделированной ацетатной язвой размер изъязвления и морфологические показатели значимо не различались. Между тем стрессирование приводило к увеличению содержания внутриэритроцитар-ного магния и некоторому увеличению его потерь с мочой. Уровень кальция в лимфе кишечного протока увеличивался, но потери с мочой резко падали. У стрессонеустойчивых крыс с ацетатной язвой острое стрессирование не приводило к изменению морфологических показателей в тканях зоны язвенного дефекта, но размер язвенного дефекта увеличивался. Площадь язвенного дефекта, уровень магния и кальция в биологических средах у стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых крыс при экспериментальных язвах желудка Показатель Стрессоустойчивые крысы Стрессонеустойчивые крысы контроль ацетатная язва ацетатная язва + острый стресс контроль ацетатная язва ацетатная язва + острый стресс Площадь язвы - 38,72 ± 4,09 39,00 ± 2,33 - 68,70 ± 9,44 75,70 ± 13,94 Mg2+ в плазме крови из Vs, ммоль/л 0,930 ± 0,019 0,910 ± 0,006 0,940 ± 0,012 0,88 ± 0,012 0,900 ± 0,019 0,90 ± 0,02 Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs, ммоль/л 1,750 ± 0,094 1,210 ± 0,012*** 1,900 ± 0,143*** 2,15 ± 0,184 1,480 ± 0,175# 2,110 ± 0,168# Mg2+ в плазме крови из Vр, ммоль/л 0,920 ± 0,024 0,890 ± 0,031 0,870 ± 0,029 0,87 ± 0,010 0,840 ± 0,015 0,88 ± 0,02 Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vр, ммоль/л 1,850 ± 0,034 1,45 ± 0,14* 1,540 ± 0,035 2,02 ± 0,139 1,910 ± 0,199 2,390 ± 0,131# Mg2 в лимфе из ОКЛП, ммоль/л 0,950 ± 0,011 0,980 ± 0,005 0,860 ± 0,065 0,96 ± 0,007 0,960 ± 0,016 0,960 ± 0,019 Mg2+ в суточной моче, мкмоль/л 18,590 ± 0,416 7,15 ± 0,19*** 8,470 ± 0 127*** 12,81 ± 0,527 15,110 ± 2,522 18,24 ± 1,93 Са2+ в плазме крови из Vs, ммоль/л 1,620 ± 0,064 1,540 ± 0,071 1,530 ± 0,071 2,08 ± 0,086 1,460 ± 0,084### 1,460 ± 0,095 Са2+ в плазме крови из Vр, ммоль/л 1,590 ± 0,115 1,690 ± 0,079 1,550 ± 0,087 1,96 ± 0,055 1,530 ± 0,088## 1,500 ± 0,085 Са2+ в лимфе из ОКЛП, ммоль/л 0,560 ± 0,032 0,750 ± 0,029* 0,980 ± 0,035*** 0,74 ± 0,040 0,850 ± 0,034 0,83 ± 0,12 Са2+ в суточной моче, мкмоль/л 44,09 ± 3,40 32,4 ± 2,1* 19,5 ± 2,4** 17,71 ± 1,41 18,59 ± 1,03 13,0 ± 2,0# По отношению к предыдущему значению в группе стрессоустойчивых крыс: *р < 0,05; **р < 0,01; ***р < 0,001; в группе стрессонеустойчивых крыс: #р < 0,05; ##р < 0,01; ###р < 0,001. 114 Выпуск 4 (52). 2014 При этом отмечалось увеличение содержания внутри-эритроцитарного магния до нормальных величин на фоне резкого уменьшения потерь кальция с мочой. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Острое стрессирование стрессоустойчивых и стрессонеустойчивых крыс с ацетатной язвой на морфологические показатели в зоне язвенного дефекта практически не влияет, но размер язвенного дефекта увеличивается у стрессонеустойчивых животных. Острый стресс по-разному влияет на механизмы перераспределения и потери катионов с мочой. У стрессонеустойчивых крыс с ацетатной язвой острое стрессирование приводит к восстановлению уровня внутриэритроцитарного магния на уровне контрольных значений, потери кальция с мочой уменьшаются.

Об авторах

Л. Н. Рогова

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра патологической физиологии

Виктория Николаевна Поветкина

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: vnpovetkina@gmail.com
ассистент кафедры патологической физиологии

Н. В. Григорьева

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра патологической физиологии

В. В. Ермилов

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра патологической физиологии

Н. В. Шестернина

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра патологической физиологии

Список литературы

Дополнительные файлы