ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ГХ/МС ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КЛОЗАПИНА И ОЛАНЗАПИНА В ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛ ЬСТВАХ

Полный текст

Клозапин и оланзапин - атипичные нейролептики, которые широко используются как в России, так и за рубежом. Известны случаи отравлений этими препаратами. За последние годы летальность от клозапина и оланзапина как индивидуально, так и в смеси с этанолом составила 65-69% [2, 5]. Разработка методики для обнаружения клозапина и оланзапина позволит с надежной достоверностью и точностью диагностировать отравления. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Разработка экспресс-методики обнаружения кло-запина и оланзапина в вещественных доказательствах небиологического и биологического происхождения с целью установления факта отравления. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ В работе использовались субстанции: клозапин (производства ОАО «Органика», соответствующий требованиям ФСП 42-0008-4739-03) и оланзапин («Sigma» каталожный номер O1141-10MG, соответствующий требованиям НД 000661, 2013-07-30). Приготовление модельных смесей плазмы, мочи и слюны: к 10 мл плазмы, к 25 мл мочи, к 5 мл слюны добавляли раствор клозапина или оланзапина в токсической концентрации [6]. Полученные смеси оставляли на 24 часа при комнатной температуре. Для извлечения клозапина и оланзапина из биологических жидкостей использовали жид-кость-жидкостную экстракцию хлороформом при оптимальных условиях [3, 4]. Хлороформ испаряли, сухой остаток растворяли в 96%-м этаноле и исследовали методом ГХ/МС. Для исследований использовали хромато-масс-спектрометр Maestro 7820/5975 (США-Россия) с автоинжектором с масс-спектрометрическим детектором MSD, снабженным библиотекой масс-спектров NIST05a.L. 1 мкл спиртового извлечения хроматографировали на газовом хроматографе, оснащенном капиллярной колонкой НР-5-^MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, с толщиной пленки фазы 0,25 мкм. Температуру колонки программировали от 70 до 290 оС. Ввод автоматический. ГХ/МС анализ проводили в режиме SCAN. Диапазон масс-сканируемых ионов 20-430 а.е.м. Время включения катода и масс-анализатора - 2 мин после ввода пробы. Режим хроматографирования: скорость газа-носителя 0,8 мл/мин, деление потока 1 : 10, с задержкой включения 3 мин после ввода пробы, температура инжектора 250 °С, интерфейса детектора 280 °С. Условия детектирования: энергия электронов ионизации 70 эВ, регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования в интервале масс 30550 а.е.м. Управление прибором и сбор данных проводился с помощью программного обеспечения MSD Chemstation vers. D.03.00.611. Обработка результатов и анализ данных - в Data Analysis и AMDIS. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Хроматограммы растворов субстанций клозапина и оланзапина представлены на рис. 1, 2. 52 Выпуск 1 (57). 2016 Рис. 1. Хроматограмма раствора клозапина Масс-спектральные характеристики растворов субстанций клозапина и оланзапина представлены в табл. 1 (ионы расположены по убыванию интенсивности в масс-спектре). Из полученных масс-спектров были выбраны пять ионов с m/z не менее 150, которые имеют наибольшие отношения интенсивности - характеристические ионы. Особенностью масс-спектров клозапина и оланзапина является наличие достаточно выраженных молекулярных ионов (рис. 3, 4). Для анализа ГХ/МС в режиме SIM из представленного перечня характеристических ионов выбирали три иона: базовый и подтверждающие, которые имели высокие интенсивности и не присутствовали в масс-спектрах других веществ с одинаковым значением m/z (табл. 2). Щ Т «to ik' ti-tk-zfc-2s--ig-as--5--I Рис. 2. Хроматограмма раствора оланзапина Таблица 1 Масс-спектральные характеристики клозапина и оланзапина № п/п Название вещества Молекулярная масса, а.е.м. Характеристические ионы, m/z 1 Клозапин 326 243 256 192 221 326 2 Оланзапин 312 242 229 213 312 268 Abundance Scan 994 (8.850 min): 17.D\data.ms 246.1 70.1 42.1 . . li,. . 120.1 1 i 164.1 221J >68.1 326.2 355.1 405.1 429.1 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 #140054: Clozapine 0 24 3.0 192.0 70.0 42.0 99.0 .......■L-kv.L",........1........ ... л164.0 1^°„>........J £68.0 326 0 Г !„ , 296.0 £ m/z-> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 3. Масс-спектр субстанции и библиотечный масс-спектр клозапина Abundance Scan 885 (8.273 min): 13.D\data.ms 24k. 1 5000 213.1 120.1 146.0 1^1.,1,92,|J 1,268.1 355.1 405.0 429.0 , , , Д , г А -г I И- rr i-'i'rr ■ 1"|'. Т"|-Г |-Г‘1-|ЧТ1"1''|". 4‘Т-. i-V'p-m |-Ж гр- ■ 1 I I I I | 'i I 1 i | I I ......I, , ......................I > I m/z--> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Abundance #131992: Olanzapine 24Й.0 213.0 990 1200 1450 1690 192P 312.0 I 268.0 1 '■■■ '"V111111T '■1 r111111111Т1'1' ri“i1 'm i'T'1" i rr|-ч 1" 111 rl'n1 Г| ........................... 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 m/z--> 20 40 Рис. 4. Масс-спектр субстанции и библиотечный масс-спектр оланзапина Выпуск 1 (57). 2016 53 ЩЩПрЙ Таблица 2 Отношения ионов в масс-спектрах изучаемых веществ № п/п Название вещества m/z ионов Величина ионного соотношения, % 1 Клозапин 243/326 76,24 192/221 40,32 2 Оланзапин 242/229 83,51 213/312 50,95 Таким образом, разработанные методики ГХ/МС анализа позволяют с надежной достоверностью идентифицировать клозапин и оланзапин в вещественных доказательствах небиологического происхождения (порошках, растворах), что поможет в кратчайшие сроки диагностировать отравления. Исследована возможность обнаружения клозапина и оланзапина в извлечениях из модельных смесей плазмы и крови методом ГХ/МС в разработанных усло виях. Также использовали извлечения из модельных смесей слюны для рассмотрения возможности ее использования как объекта химико-токсикологического анализа, альтернативному плазме крови. Масс-спектры извлечений из модельных смесей плазмы, мочи и слюны, а также библиотечные масс-спектры клозапина и оланзапина для исключения влияния различных артефактов при интерпретации результатов [1] представлены на рис. 5-10. Abundance 24 3.1 192.1 70.1 42l'1 I 9^-1 141 1 164-1 .22141 .. 1 1'г '1 ■ г г1 I . >268.1 326.2 Г |„ , 296.1 L 355.1 405.1 429.1 1 Н •' 1 Р 1 1 1 1 ' ч ■ I • I- 1 1 I 1 1 n-Г п 1 1 I 1 1 . II . 1 1 1 II 1 1 м m/z~> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 #140054: Clozapine 5000 24 3.0 192.0 70.0 42.0 99.0 Л 164.0 141.0 I, '■'■"Т' ' ■' i'llL' > ч 'г1 221,1(1 1 (268.0 326.0 Г |, . 296.0 L m/z-> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 5. Масс-спектр извлечения из слюны и библиотечный масс-спектр клозапина Abundance Scan 687 (8.856 min): 18.D\data.ms 24 3.1 192.1 70.1 42\'1 9^-1 141 1 164/1 \ . I, . „ .I 120.1141 1 |„ I . 221J Т"1"'1- '"‘'"'Г ' ! '"1 Г || I Ьб8.1 326.2 If l„ , 296.1 L 405.1 1 I I I 1 I I 1 I I I I I ! I | I I > t | 1 1 1 . I ! I I I I I I 1 I 1 1 1 1 1 1 1 I I I | m/z-> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 #140054: Clozapine 24 3.0 192.0 70.0 42.0 99.0 141.0 16f° I , " '"I-, ■ ■ ■ I -I'1-, " 1 ■ i-'l 221 J щ ,,^.r, ...I I , .(268.0 326.0 Г i,, . 296.0 L m/z-> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 6. Масс-спектр извлечения из плазмы и библиотечный масс-спектр клозапина Abundance Scan 724(8.856 min): 18.D\data.ms 5000 О m/z-> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Abundance #140054: Clozapine 24Й.0 24 3.1 192.1 70.1 42t‘1 I 99,1 i/ii 1 164.1 ,Ьб8 1 326.2 -Avi,.....U.................т.-1' и If l„' .296.1 L 355.1 111111' ■1 1 i1 1 1 1 i ■ 11 ■ i1 ■ 1 1 i 1 1 1 ■ i1 1 1 ■ i ■ ■ 1 ' i 1 1 1 1 i m/z-> 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 7. Масс-спектр извлечения из мочи и библиотечный масс-спектр клозапина 54 Выпуск 1 (57). 2016 4i’1 I ?<1'1 , 122.0 146.0 ' m/z-> Abundance Scan 884 (8.268 min): 14.D\data.ms 24Й.1 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 #131992: Olanzapine 24 ’.0 213.0 312.0 43.0 ^ л | | 71г° | 990 120.0 145.0 16?-° 1.92.Р |t, I, | 268.0 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 " | 1 1 1 Ч " 1 Ч 1 1 " I " гл-р 1 1 I | 1 1 1 1 | 1 1 1 1 | 1 1 ,Т‘| II 1 || 1 1 1 || ! 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 8. Масс-спектр извлечения из слюны и библиотечный масс-спектр оланзапина m/z-> 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 9. Масс-спектр извлечения из плазмы и библиотечный масс-спектр оланзапина Abundance Scan 884 (8.268 min): 16.D\data.ms 24Й.1 42.1 li, 122.1 146 1 16?!|,191,j 401.0 429.1 m/z-> 20 40 60 Abundance 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 #131992: Olanzapine 24 >.0 213.0 312.0 | , 71, ° 99 0 120.0 145.0 169 0 192.10 , , 268.0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 Рис. 10. Масс-спектр извлечения из мочи и библиотечный масс-спектр оланзапина ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, нами предлагается для экспресс-анализа плазмы крови, мочи и слюны на клозапин и олан-запин использовать метод ГХ/МС. Определены времена удерживания, масс-спектральные характеристики изучаемых веществ, которые позволяют с надежной достоверностью их идентифицировать в вещественных доказательствах небиологического и биологического происхождения.

Об авторах

Ирина Петровна Ремезова

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

Email: i.p.remezova@pmedpharm.ru
к. фарм. н, доцент кафедры фармацевтической и токсикологической химии

Д. С. Лазарян

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

М. В. Сварыч

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

Л. С. Зарбежан

ГБУ РО «Наркологический диспансер»

Н. Н. Самарскова

ГБУ РО «Наркологический диспансер»

Список литературы

Дополнительные файлы