РОЛЬ ЖЕЛАТИНАЗЫ В КАК ЗВЕНА ПАТОГЕНЕЗА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ХРОНИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ ЭНДОМЕТРИЯ

Полный текст

Матриксные металлопротеиназы (ММП)-семейство цинковых металлопротеназ, основная функция которых - обмен белков межклеточного матрикса. Все ММП синтезируются и секретируются рядом клеток: фибробластами, эпителиальными клетками, фагоцитами, лимфоцитами и онкогенно-трансформированными клетками опухолей [2, 5]. В настоящее время известно более 30 MM^ объединенных в 5 различных групп: коллагеназы, желатиназы, стромелизины, матрилизины и мембранносвязанные ММП (МС-ММП). Эти ферменты - основа таких физиологических процессов, как морфогенез, резорбция и ремоделирование тканей, миграция, адгезия, дифференцировка и пролиферация клеток. Хорошо изучена роль желатиназы В в патогенезе некоторых патологических состояний (ревматоидный артрит, гломерулонефрит пародонтиты, изъязвление роговой оболочки глаз и др.). Повреждение любого типа тканей инициирует процессы воспаления, которое, в свою очередь, завершается ремоделированием ткани. В современной литературе нет исчерпывающей и однозначной информации о значении желатиназы В в патогенезе хронического воспаления эндометрия [3, 4, 6]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Выявление роли удельного числа и интенсивности экспрессии желатиназы В в ткани эндометрия у крыс на фоне хронического экспериментального воспаления эндометрия. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты были выполнены на 40 половозрелых самках белых крыс линии Вистар массой (198 ± 3,8) г с соблюдением стандартов: положений Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964 г.), этическими принципами Европейского научного фонда (ESF), приказом МЗ СССР №755 от 12.08.77 «О мерах по дальнейшему совершенствованию форм работы с использованием экспериментальных животных», Приказом МЗ СССР № 1179 от 10.10.1983 г., рекомендациями научного центра биомедицинских технологий РАМН (Копаладзе РА., 2004), положениями био-этической концепцией трех «R» (Replacement, Reduction, Refinement) (Рассел и Бреч, 1959) и Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных (Шалимов, 1990, Березовская, 1993, Зуффин, 1993); Федеральным законом от 24.04.1995 г. № 52-ФЗ « О животном мире», стандарты GLP - правила лабораторной практики (приказ министерства здравоохранения Российской Федерации от 19.06.2003 г. № 266). Животные перед экспериментом были разделены на 3 группы. В 1-й группе (n = 10) определяли изучаемые параметры в исходном состоянии, во второй - контрольная серия (n = 10) - выполняли те же манипуляции, что и в основной (третьей группе), но не моделировали хроническое воспаление эндометрия, в третьей (n = 20) моделировали хроническое воспаление эндометрия путем введения в полость матки аутокаловой взвеси в объеме 0,1 мл. С третьего дня после операции 88 Выпуск 1 (57). 2016 животным 2-й и 3-й групп проводили антибактериальную терапию препаратом широкого спектра действия Цефтриаксон в соответствии с весом животного в течение 7 дней [6]. На 51-е сутки выводили животных из эксперимента, путем введения летальной дозы Рометара. Предварительно получив кровь из подключичной и нижней полой вен, осуществляли забор ткани для гистологического и иммуногистохимического исследования. Полученный препарат фиксировали в нейтральном забуференном формалине и после обезвоживания в серии спиртов возрастающей концентрации заливали парафином по общепринятой методике. Гистологические методы включали окраску гематоксилин-эозином. Исследование экспрессии ММП-9 было проведено иммуногистохимическим методом по стандартной методике с использованием антител фирмы «Новокастра» ММП-9 ^^-ММР9, для парафиновых блоков, рабочее разведение 1:40), (Кокосадзе Н. В., Заводиленко К. В., 2006; Mac C. D. et al., 1993). В препаратах при 400-кратном увеличении оценивали удельное число (в %) положительно окрашенных клеток в 5 случайно выбранных полях зрения (>500 клеток). Реакция окрашивания оценивалась как негативная - 0 баллов, слабая - 1 балл, средняя (умеренная) - 2 балла и выраженная - 3 балла. Для оценки морфологической картины ткани эндометрия применяли полуколичественный метод, позволяющий определить выраженность лимфоцитарной, плазмоцитарной инфильтрации стромы эндометрия в био-псийном материале, разработанный Э. А. Казачковой [1]. Для статистической обработки результатов исследования использовали критерий Стьюдента (средние величины выражали как М ± m). При распределении, отличном от нормального, использовали критерий Вил-коксона (средние величины выражали как Ме [25 и 75 перцентиль]) и корреляцию по Спирмену. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Полученные результаты представлены в табл. 1 и 2. При гистологическом исследовании тканей эндометрия у крыс первой группы выявлены единичные нейтрофилы, лимфоциты, округлые железы нормального строения, артерии без особенностей. Во второй (контрольной) группе на сроке наблюдения морфологическая картина была практически идентичная показателям в исходном состоянии. В то же время, как видно из табл. 1, статистически достоверных различий в показателях клеточной инфильтрации эндометрия между первой и второй группами не выявлено: число нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов и эозинофилов в исходном состоянии: 1 [0;1]1; 1 [0;1]; 1 [1;1]; 1 [0;1]; 0 [0;0]; 1 [1;2], в контроле: 1 [1;2], (Q > 0,1); 1 [0;1], (Q > 0,1); 1 [0, 25;1], (Q > 0,1); 0 [0;0], (Q > 0,1); 1 [1;0], (Q > 0,1) соответственно. В третьей группе в гистологическом материале обнаружены: воспалительные инфильтраты из лимфоидных элементов, в меньшей степени из лейкоцитов, расположенных чаще вокруг желез и кровеносных сосудов, реже диффузно, плазматические клетки, единичные макрофаги, слабовыраженный фиброз стро- Таблица 1 Показатели клеточного инфильтрата в эндометрии (Ме [25 и 75 перцентили]), баллы Группы Нейтрофил Макрофаг Лимфоцит Плазмоцит Эозинофил 1 1 [0;1] 1 [0;1] 1 [1;1] 0 [0;0] 1 [1;2] 2 1 [1;2] 1 [0;1] 1 [0, 25;1] 0 [0;0] 1 [1;0] 3 1 [0;1] 1,5 [1, 5;2] 2,5 [1, 5;3] 2 [1;3] 1,5 [1, 5;2] Q >0,1 >0,1 >0,1 >0,1 >0,1 Q 1 >0,1 <0,05 <0,01 <0,001 <0,01 Примечание. Q - достоверность различий между исходным состоянием и контролем; Q1 - достоверность различий между группой с экспериментальным хроническим воспалением эндометрия и контролем. Таблица 2 Удельное число и интенсивность экспрессии желатиназа-В-позитивных клеток в тканях эндометрия на фоне экспериментального хронического воспаления эндометрия (Ме [25 и 75 перцентили]), баллы Показатели Группа 1 Группа 2 Г руппа 3 Q Q1 Строма удельное число 28 [26;30] 28 [20;30] 18 [17;20] >0,1 <0,05 интенсивность экспрессии 2[0;1] 2 [0;2] 0 [1;2] >0,1 <0,05 Железистый эпителий удельное число 29 [28;30] 30 [28;30] 26,5 [22;25] >0,1 >0,1 интенсивность экспрессии 2[0;1] 2 [0;1] 1 [1;2] >0,1 <0,05 Примечание. Q - достоверность различий между исходным состоянием и контролем; Q1 - достоверность различий между группой с экспериментальным хроническим воспалением эндометрия и контролем. Выпуск 1 (57). 2016 89 ЩЩпрй [ЩшкПГМЩ мы, незначительный склероз стенок артерий эндометрия. У животных третьей группы значимо увеличивался уровень макрофагов 1,5 [1, 5;2], (Q < 0,05), лимфоцитов 2,5 [1, 5;3], (Q < 0,01), плазмоцитов 2 [1 ;3], (Q < 0,001), эозинофиллов 1,5 [1, 5;2], (Q < 0,01). В клеточном компоненте стромы и эпителии желез эндометрия удельное число и интенсивность экспрессии желатиназа-В-позитивных клеток в группах контроля и в исходном состоянии значимо не отличалось. Обращает на себя внимание достаточно высокие уровни указанных показателей в контроле и в исходном состоянии, что указывает на важную роль желатиназы В в гомеостазе эндометрия. На 51-е сутки после моделирования воспаления эндометрия в клеточном компоненте стромы число клеток, положительно реагирующих на антитела, уменьшилось с 28 [20;30] до 18 [17 ;20] Q < 0,05, интенсивность экспрессии резко снизилась с 2 [0;2] до 0 [1;2] баллов; Q < 0,05. В эпителии желез удельное число желатиназа-В-положительных клеток значимо не изменилось Q > 0,1, но статистически значимо уменьшилась интенсивность экспрессии с 2 [0;1] до 1 [1 ;2] баллов, Q < 0,05. Известно, что железистый эпителий эндометрия секретирует гликоген и мукополисахариды, необходимые для предимплантационного периода жизнедеятельности эмбриона. Периодическое усиление пролиферации и репарации в эндометрии, очевидно, реализуется за счет активности металлопротеиназ, в том числе желатиназы В, принимающей участие в ремоделировании тканей. В связи с тем что удельное число и интенсивность экспрессии - это два показателя, суммарно отражающие активность желатиназы В в тканях, можно полагать, что обнаруженное снижение уровней этих величин на фоне морфологических признаков воспаления могут быть показателями нарушения механизмов ремоделирования и пролиферации в зоне воспаления, в частности свидетельствовать о его хронизации. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Через 51 -е сутки с момента моделирования воспаления эндометрия в эксперименте удельное чис ло и интенсивность экспрессии желатиназа-В-пози-тивных клеток в большей степени уменьшилось в клеточном компоненте стромы в сравнении с железистым эпителием. Данные показатели на фоне морфологических признаков воспаления свидетельствуют об участии изучаемого фермента в хронизации воспаления.

Об авторах

Ксения Юрьевна Тихаева

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: tikhaeva34@gmail.com
ассистент кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии

Л. Н. Рогова

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра патологической физиологии и клинической патофизиологии

Л. В. Ткаченко

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра патологической физиологии и клинической патофизиологии

Список литературы

Дополнительные файлы