EFFECTS OF HUMAN y-INTERFERON AND CD4 GLYCOPROTEIN ANTIBODIES ON THE IMMUNE SYSTEM INDICES IN HIV-INFECTED PATIENTS

Full Text

Подавление репликации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) при помощи антиретровирусной терапии (АРВТ) и увеличение ее доступности позволили улучшить прогноз у ВИЧ-инфицированных пациентов [6, 7, 14, 15], однако смертность от оппортунистических инфекций (ОИ) остается достаточно высокой. В ряде клинических исследований была продемонстрирована необходимость прекращения первичной и вторичной специфической профилактики ОИ из-за высокого риска побочных эффектов [8]. Кроме того, излишняя нагрузка лекарственными средствами увеличивает потенциал лекарственной токсичности, риск лекарственных взаимодействий, выработку резистентности у микроорганизмов, что увеличивает стоимость лечения [9, 10, 12, 13]. Необоснованное назначение профилактических препаратов приводит к снижению комплаентности пациентов вследствие полипрагмазии и лекарственной непереносимости [8]. В последние годы накоплены факты, демонстрирующие свойства инновационных отечественных препаратов на основе антител облегчать течение различных вирусных инфекций, что позволяет допустить их применение в качестве средств профилактики и лечения у ВИЧ-инфицированных в составе комбинированной терапии [1, 2, 3, 4, 5, 16]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Обоснование возможности применения препарата антител к у-интерферону и гликопротеину CD4 (ПАТ) в комплексной терапии ВИЧ-инфекции на основании клиниколабораторных показателей состояния иммунной системы. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Клинические и лабораторные исследования проводились в Волгоградском государственном медицинском университете на базе ГКУЗ «Волгоградский областной центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями» в период с 2012 по 2016 гг. Работа выполнялась в рамках рандомизированного плацебо-контролируемого проспективного исследования в параллельных группах. Проведение исследования было одобрено Региональным Независимым Этическим Комитетом (ГУ Волгоградский Медицинский Научный Центр) (регистрационный номер IRB 00005839 IORG 0004900 (OHRP)): протоколы № 63-2012 от 26 октября 2012 г. и № 82-2014 от 20 июня 2014 г.). Исследование включало 76 ВИЧ-инфицированных пациентов (возраст от 18 до 47 лет, 37 % женщин) с ВИЧ-инфекцией, рандомизация которых на группы в соответствии со схемой терапии проводилась по таблице случайных чисел (табл.). Исследуемые группы Схема терапии Количество АРВТ 20 АРВТ + ПАТ 19 ПАТ 18 Плацебо* 19 *Для данных пациентов предполагалось исключение из исследования при обнаружении клинически значимых признаков ухудшения состояния. 46 Выпуск 1 (61). 2017 ©зеторСз 1)<§тППЩ| В работу не включались пациенты с тяжелыми поражениями печени, вирусным гепатитом С, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, беременные женщины, а также лица, принимающие внутривенно наркотические средства. В случае невыполнения рекомендаций по регулярному приему препарата и своевременному обследованию, а также при нежелании больного продолжать лечение, он исключался из исследования. Продолжительность исследования составляла 3 месяца. Лечение пациентов осуществлялось в соответствии со стандартами терапии ВИЧ-инфекции, предполагающими применение двух нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы - зидовудин (300 мг, 2 Р./сут.) и ламивудин (150 мг 2 Р./сут.) - и ненуклео-зидного ингибитора обратной транскриптазы - эфави-ренз (600 мг 1 Р./сут). Препарат антител к у-интерферо-ну и гликопротеину CD4 (ПАТ) назначался 2 раза в день сублингвально до еды по две таблетки на прием до полного растворения. Изучение состояния иммунной системы пациентов проводилось до начала приема препаратов и по окончании курса. Оценивали субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови (CD3, CD4, CD8) и концентрацию цитокинов (IL-2, IL-4, у-INF). Фенотипиро-вание циркулирующих лимфоцитов выполняли с помощью проточного цитофлюорометра FACStaunt (Becton Dickinson, США). Концентрацию цитокинов определяли с использованием тест-систем «BioSource» (Invitrogen, США) и многоканального анализатора BioRad (США). Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программного обеспечения Statsoft Statistica 8.0 и GraphPad Prism 5.0. Достоверность различий оценивалась при помощи двухфакторного дисперсионного анализа с пост-хок тестом Нью-мена-Кеулса. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В ходе исследования значительных изменений в общем содержании Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов не выявлено. В группе, получавшей комбинацию стандартной АРВТ и ПАТ, произошло достоверное (p < 0,01, рис. 1 А) увеличение количества CD3+-клеток; при этом достоверных различий по исходному содержанию CD+-клеток не было выявлено (p > 0,2 в однофакторном дисперсионном анализе). Содержание CD4+-лимфоцитов является одним из наиболее значимых показателей в терапии ВИЧ-инфекции, поэтому его увеличение может отражать успешность проводимой терапии, поскольку сам ВИЧ при проникновении в клетку связывает CD4 и хемокиновый рецептор, расположенные на поверхности Т-хелперов. В нашем исследовании было выявлено достоверное повышение содержания Т-хелперов у пациентов, получавших ПАТ и комбинацию АРВТ с ПАТ, как по отношению к исходным значениям (p < 0,001, рис. 1 Б), так и в сравнении с результатами АРВТ (Р.< 0,01). А CD3+ 2000-1 ** 1500 ч .V І* i£ s 1000- : • 4 500- 0- CD4+ В CD8+ V *Р. < 0,01; ***p < 0,001. *г чу CD4/CD8 • АРВТ ■ АРВТ-ПАТ А ПАТ ▼ Плацебо Рис. 1. Динамика субпопуляций лимфоцитов в периферической крови. Данные представлены в виде M ± m; выполнен двухфакторный дисперсионный анализ с пост-хок тестом Ньюмена-Кеулса; сравниваемые группы данных обозначены горизонтальными линиями Выпуск 1 (61). 2017 47 ЩШгорСз [ЩсмеТКЩ В группе, получавшей АРВТ, увеличение CD4+-лим-фоцитов не было достоверным, а в группе, получавшей плацебо, напротив, произошло статистически значимое (p < 0,001) снижение данного показателя. Данные изменения свидетельствуют о том, что препарат антител к у-интерферону человека и гликопротеину CD4 способен стимулировать клеточное звено иммунитета, увеличивая популяцию Т-хелперов как при комбинированной с АРВТ, так и при монотерапии. Несмотря на изменения, затронувшие Т-хелперы, популяция Т-киллеров практически не изменилась - достоверных изменений выявить не удалось (рис. 1 В). В то же время изменилось соотношение CD4/CD8, являющееся интегральным показателем, характеризующим состояние иммунной системы человека. Исходно во всех группах больных данный показатель был снижен более чем в 2 раза по сравнению с нормой. Изменения, произошедшие на фоне терапии, соотносятся с изменениями содержания CD4+-лимфоцитов, описанными выше: в группах пациентов, у которых отмечалось повышение CD4+-лимфоцитов, происходило увеличение соотношения CD4/CD8 (рис. 1 Г). Эти изменения наблюдались в группах АРВТ (p < 0,01), АРВТ и ПАТ (p < 0,001), и в группе, получавшей монотерапию ПАТ (p < 0,01). В группе, получавшей плацебо, напротив, произошло достоверное снижение этого показате ля (p < 0,001). Увеличение иммунорегуляторного индекса в группе, получавшей АРВТ в сочетании с ПАТ, было достоверным как по отношению к исходным показателям, так и по отношению к другим группам (p < 0,01 и p < 0,001 для плацебо). При исследовании концентрации у-IFN у ВИЧ-инфицированных пациентов было выявлено достоверное увеличение данного показателя в группе, получавшей АРВТ в сочетании с ПАТ, как по отношению к исходным значениям, так и в сравнении с группой, получавшей плацебо (p < 0,01, рис. 2 А). Изменения, произошедшие в других группах, не были достоверными, несмотря на видимую тенденцию в отношении монотерапии ПАТ. Аналогичным образом изменялось содержание цитокинов IL-2 и IL-4: статистически значимые изменения отмечены в группе, получавшей АРВТ в сочетании с ПАТ (p < 0,05, рис. 2 Б, В). При этом изменения коэффициента yIFN/IL-4, отражающего соотношение между клетками, секретирующими yIFN, и клетками, сек-ретирующими IL-4, не были статистически значимыми ни в одной из исследуемых групп (рис. 2 Г). Данные результаты могут свидетельствовать о недостаточной выраженности влияния монотерапии ПАТ на концентрации цитокинов в крови ВИЧ-инфицированных больных, что, однако, изменяется при сочетании терапии ПАТ со стандартной АРВТ. yIFN IL-2 В 11-4 yIFN/IL-4 • АРВТ ■ АРВТ-ПАТ А ПАТ ▼ Плацебо *p < 0,05, **p < 0,01. Рис. 2. Динамика концентраций цитокинов в плазме крови. Данные представлены в виде M ± m; выполнен двухфакторный дисперсионный анализ с пост-хок тестом Ньюмена-Кеулса; сравниваемые группы данных обозначены горизонтальными линиями 48 Выпуск 1 (61). 2017 ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ходе представленной работы было обнаружено, что в сочетании со стандартной антиретровирусной терапией препарат антител к у-интерферону и гликопротеину CD4 человека способствовал увеличению количества СD3+ и CD4+ клеток, а также стимулировал секрецию гамма-интерферона и интерлейкинов IL-2 и IL-4. Представленные результаты позволяют утверждать, что изучаемый препарат способен оказывать иммуномодулирующее действие при моноинфекции ВИЧ, как в комбинации со стандартной АРВТ, так и при

About the authors

A. V Strygin

Volgograd State Medical University; SI Volgograd Medical Scientific facility

Email: drumsav@mail.ru

A. O Strygina

Volgograd State Medical University; SI Volgograd Medical Scientific facility

E. I Morkovin

Volgograd State Medical University; SI Volgograd Medical Scientific facility

References

Supplementary files