ПОСТНАТАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ ПОТОМСТВА КРЫС ОТ САМОК, ПОЛУЧАВШИХ ПРЕПАРАТ НЕЙРОГЛУТАМ В ПЕРИОД БЕРЕМЕННОСТИ
- Авторы: Бугаёва Л.И.1, Денисова Т.Д1, Тюренков И.Н1, Мазанова Ю.А1, Багметова В.В1, Лаврова Е.Б1
-
Учреждения:
- НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России
- Выпуск: Том 15, № 3 (2018)
- Страницы: 33-36
- Раздел: Статьи
- URL: https://journals.eco-vector.com/1994-9480/article/view/119274
- DOI: https://doi.org/10.19163/1994-9480-2018-3(67)-33-36
- ID: 119274
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Полный текст
Antidepressant substance, neuroglutame, derivative of glutamic acid, experiments on the offspring of rats, preclinical research. Нейроглутам (производное глутаминовой кислоты) новое психотропное средство с выраженным антидепрес-сивным и анксиолитическим действиями, разработанное Волгоградскими фармакологами совместно схимиками Российского государственного педагогического университета им. А.И. Герцена [1, 10]. Доклиническим токсикологическими исследованиями [1, 2] показано, что по степени токсичности нейроглутам относится к классу малотоксичных. В исследованиях, на крысах самках, нейроглутам в дозах 26 и 650 мг/кг (соответственно терапевтическая и 25-кратная терапевтическая) не оказывал повреждающего влияния на фертильность [3] и на процессы органо-фетогенеза, регистрируемые в антенатальный период развития плодов [4]. Одновременно выявлялись эффекты положительного влияния нейроглутама на качество эмбрионального антенатального развития плодов. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучить влияние нейроглутама на развитие потомства от крыс самок, которым с 6-го по 20-й дни беременности вводили нейроглутам в дозе 650 мг/кг. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Наблюдения проведены на 40 фиксированных (по 6 особей) пометах крысят, полученных от 2 групп беременных крыс самок. Первая группа - опытная, состояла из 20 пометов крысят, полученных от крыс самок, которым в период беременности (с 6-го дня беременности и до родов) интрагастрально вводили нейроглутам в дозе 650 мг/кг (соответствует 25-кратной экспериментально доказанной терапевтической дозе). Вторая группа - контрольная, 20 пометов крысят, полученных от крыс самок, которым в эти же сроки, как и в опытной группе, интрагастрально вводили дистиллированную воду в дозе 5 мл/кг. После рождения исследуемые пометы крысят в течение 1-го месяца наблюдений находились вместе с крысой матерью в индивидуальных пластиковых клетках марки Т/2 А- (270х210х140 мм), на подстиле из мелких древесных стружек, со свободным доступом к корму и воде. Содержание животных и проведение на них манипуляций соответствовали нормативным правилам лабораторной практики, утвержденным МЗ РФ Приказ № 199Н от 10 апреля 2016 г и методическим Выпуск 3 (67). 2018 33 ЩШгорСз [ЩсмеТКЩ рекомендациям по изучению репродуктивной токсичности лекарственных средств [7], а также протоколу, утвержденному локальным этическим комитетом за № 140-2011 от 11.06.2011 г. Наблюдения за потомствами крысят вели от их рождения до 2-месячного возраста [5, 7]. У потомств отмечали: формирование физического развития и сенсорно-двигательных рефлексов, двигательное поведение, мнестические реакции. В физическом развитии у крысят отмечали (в днях): отлипание ушной раковины, появление волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, опускание семенников и открытие вагины. Прирост массы тела (г) у крысят измеряли с 4-го по 30-й дни наблюдений. Формирование сенсорно-двигательных рефлексов (в днях) оценивали в тестах: «переворачивание на плоскости», «отрицательный геотаксис», «избегание обрыва», «зрачковый рефлекс», «избегание обрыва, вызванное визуальным стимулом», «мышечная сила», «переворачивание в свободном падении». Двигательное поведение исследовали у крысят в 20- и 45-дневном возрасте в тесте «открытое поле» [5, 7], отмечали число пересеченных квадратов (горизонтальная активность), вставаний на задние лапки (вертикальная активность), заглядывания в напольные отверстия (исследовательская активность), акты груминга и количество актов дефекаций. Способность крысят к обучению и запоминанию памятного следа оценивали в тесте «УРПИ» [5, 7]. В период обучения у крысят фиксировали время первого захода в темную (опасную) камеру, в которой он подвергался (через электродный пол) элек-троболевому воздействию. Воспроизведение памятного следа проводили через трое суток, после обучения (спонтанная амнезия), фиксируя при этом количество заходов в темную (опасную) камеру. Результаты исследований подвергали статистической обработке с использованием программы Microsoft Excel. Достоверность изменений в опытной группе относительно группы контроль оценивали с помощью t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони [6]. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Проведенные исследования позволили выявить отсутствие изменений в постнатальном развитии потомств крысят от крыс самок, получавших в период беременности нейроглутам в дозе 650 мг/кг. Физическое развитие потомств опытных крысят было полностью сформировано к 2-месячному возрасту. Наряду с этим было отмечено, что динамика прироста массы тела у крысят в опытной группе опережала контрольные значения, проявляющиеся в более выраженной форме у крыс самцов (табл. 1), нежели у самок. Так, масса тела у 4-дневных крысят в опытной группе была выше контрольных показателей на 1,5 г (р < 0,01) у самцов и на 0,7 г (р > 0,05) у самок; у 3-недельных крысят - на 4,3 г (р < 0,001) у самцов и на 0,3 г (р > 0,05) у самок, а у месячных крысят - на 6,1 г (р < 0,01) у самцов и на 2,7 г (р > 0,05) у самок. Таблица 1 Прирост массы тела потомства (г, М ± m) от самок, получавших интрагастрально нейроглутам в период беременности Периоды измерений, дни Варианты опытов контрольная группа опытная группа Самцы 4 10,80 ± 0,38 12,30 ± 0,23** 7 16,60 ± 0,38 18,90 ± 0,31*** 14 28,70 ± 0,63 30,90 ± 0,82* 21 41,50 ± 0,87 45,80 ± 0,87*** 30 70,10 ± 0,94 76,20 ± 0,92*** Самки 4 10,4 ± 0,2 11,10 ± 0,27 7 16,30 ± 0,29 17,30 ± 0,43 14 28,60 ± 0,53 28,70 ± 0,51 21 41,30 ± 0,83 41,60 ± 0,83 30 68,50 ± 0,69 71,20 ± 0,93 *р < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001 - достоверно относительно контрольной группы. Эффекты активизации у опытного потомства выявлялись и в некоторых параметрах их физического развития. Относительно группы интактного потомства у потомств опытных крысят (табл. 2) отмечалось опережение сроков созревания: открытия глаз (на 0,7 дня, р < 0,001), формирования «зрачкового рефлекса» (на 0,9 дня, р < 0,001), «избегание обрыва, вызванного визуальным стимулом» (на 1,1 дня, р < 0,001), «переворачивания в свободном падении» (на 1,0 день, р < 0,001) и формирование теста «мышечная сила» (на 0,3 дня, р > 0,05), с одновременным запаздыванием формирования рефлекса «переворачивание на плоскости» (на 0,6 дня, р < 0,01). Сроки же опущения яичек в мошонку у крыс самцов и открытие вагины у крыс самок в опытной группе соответствовали физиологической норме и не различались с контрольными данными. Таблица 2 Физическое развитие и формирование сенсорно-двигательных рефлексов у потомств, (дни, М ± m) от крыс самок, получавших в период беременности интрагастрально нейроглутам, дни Исследуемые параметры Варианты опытов контрольная группа опытная группа Отлипание ушной раковины 2,80 ± 0,09 2,90 ± 0,04 Появление волосяного покрова 4,40 ± 0,06 4,50 ± 0,06 Прорезывание резцов 8,00 ± 0,11 8,20 ± 0,12 Открытие глаз 15,80 ± 0,05 15,1 ± 0,12** Опускание семенников 26,0 ± 0,1 26,0 ± 0,0 Открытие вагины 47,00 ± 0,56 47,90 ± 0,46 Переворачивание на плоскости 3,60 ± 0,06 4,20 ± 0,12* 34 Выпуск 3 (67). 2018 Окончание таблицы 2 *р < 0,01, **р < 0,001 - различия достоверны относительно контрольной группы. В исследованиях теста «открытое поле» эффекты изменений в двигательном поведении отмечены лишь у потомств крыс 20-дневного возраста. Относительно группы контрольного потомства, у крысят в опытной группе зафиксировано (табл. 3) достоверное повышение горизонтальной активности (28,9 %, р < 0,05), исследовательской активности (66,7 %, р < 0,05) и актов груминга (45,4 %, р < 0,05) без существенных изменений других параметров. Таблица 3 Влияние нейроглутама (внутрижелудочно с 6-го по 20-й дни беременности крысам матерям) на двигательную активность 20-дневных крысят в тесте «открытое поле» (М ± m) *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001 - различия достоверны относительно контрольной группы. Вместе с тем в подобных исследованиях, проведенных на потомствах опытных и контрольных крысят 1,5месячного возраста различий в изучаемых параметрах поведенческой активности не зафиксировано. Не обнаружено у тестируемых потомств в 2-месячном возрасте изменений и в развитии мнестических реакций. В исследованиях теста «УРПИ» крысята опытной и контрольной групп не различались по характеру обучения и воспроизведения памятного следа. При воспроизведении (на третий день после обучения) количество заходов крысят в темную (опасную) камеру и время нахождения в ней у особей контрольной и опытной групп было идентичным. Таким образом, из проведенных исследований можно сделать заключение, что нейроглутам при внутрижелу-дочном введении беременным крысам самкам в дозе 650 мг/кг (доза, превышающая экспериментально доказанную терапевтическую в 25 раз) с 6-го по 20-й дни беременности не оказывает повреждающего влияния на процессы антенатального развития плодов крыс, регистрируемые в постнатальном периоде. Показано, что физическое развитие потомств крыс в опытной группе было полностью сформировано. Негативных отклонений в постнатальном развитии у опытных потомств не зарегистрировано. Вместе с тем фиксирующиеся эффекты повышения прироста массы тела, отдельных параметров физического созревания и двигательного поведения были зарегистрированы у потомств опытных крысят, находившихся на молочном вскармливании (те. до 20-дневного возраста), и следы этих эффектов у крысят, находившихся на дефинитивном питании (те. до 30-дневного возраста), практически не регистрировались в последующем. В данном отношении можно предположить возможность накопления нейроглутама в организме у самки крысы при введении ей его с 6-го по 20-й дни беременности, а также и проникновение нейроглутама через маточно-плацентарный барьер и попадание в кровоток плодов крыс самок, получавших его во время беременности, а после в родовом периоде - последующее остаточное его проникновение с молоком кормящей самки в организм крысят и его влияние на пищевое поведение, двигательную активность, физическое развитие потомства. Подобные эффекты (повышение массы тела и физическое развитие) были зарегистрированы и в исследованиях по изучению влияния на генеративную функцию крыс самок [3]. В пользу данного предположения свидетельствуют и результаты фармакокинетических исследований [8, 9], в которых было показано, что наряду с высокой абсолютной биодоступностью (84 %) период его полувыведе-ния составляет 13,61 часа, среднее время удерживания в организме одной молекулы равно 15,37 часа [9], а наличие нейроглутама в моче определяется в течение не менее 72 часов после однократного введения, при этом максимум выведения приходится на 2-е сутки [8]. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 1. Нейроглутам, новый препарат с андепрессив-ным и анксиолитическим действием в дозе 650 мг/кг (25-кратная терапевтическая доза) при внутрижелудоч-ном введении беременным самкам не оказывает повреждающего антенатального действия, регистрируемого в постнатальном периоде. 2. Постнатальное развитие потомств крыс, от самок крыс, получавших в период беременности нейроглутам полностью сформировывается к 2-месячному возрасту, без негативных эффектов. ЛИТЕРАТУРАОб авторах
Любовь Ивановна Бугаёва
НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России
Email: li_bugaeva@mail.ru
д. б. н., заместитель директора Волгоград
Т. Д Денисова
НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава РоссииВолгоград
И. Н Тюренков
НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава РоссииВолгоград
Ю. А Мазанова
НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава РоссииВолгоград
В. В Багметова
НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава РоссииВолгоград
Е. Б Лаврова
НИИ фармакологии ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава РоссииВолгоград
Список литературы
- Багметова В.В., Чернышева Ю.В., Меркушенкова О.В., Берестовицкая В.М., Васильева О.С., Тюренков И.Н. Сравнительная оценка антидепрессивных свойств гидрохлорида ß-фенилглутаминовой кислоты (РГПУ-135, глутарон) // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2013. - № 76 (3). - С. 7-9.
- Бугаева Л.И., Тюренков И.Н., Багметова В.В., Чернышева Ю.В., Кузубова Е.А. Острая токсичность субстанции гидрохлорида ß-фенилглутаминовой кислоты при однократном внутрижелудочном введении мышам и крысам // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - 2012. - № 4 (44). - С. 34-37.
- Бугаева Л.И., Кузубова Е.А., Мальцев М.В., Морозова Ю.А., Тюренков И.Н., Багметова В.В. Влияние нового производного глутаминовой кислоты (нейроглутам) с антидепрессивной активностью на генеративную функцию крыс-самцов // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2017. - № 3 (80). - С. 10-13.
- Бугаева Л.И., Тюренков И.Н., Денисова Т.Д., Морозова Ю.А. Влияние нового вещества с антидепрессивной активностью на процессы органо- и фетогенеза, регистрируемые в антенатальный период развития // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2016. - № 9 (79). - С. 25-28.
- Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. - М.: Высшая школа, 1991. - 210 с.
- Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - Ленинград: «Медицина», 1978. - 294 с.
- Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. - М., 2012.
- Смирнова Л.А., Сучков Е.А., Рябуха А.Ф., Кузнецов К.А., Озеров А.А., Караваев А.В. Экскреция соединения VMA-99-82 - нового производного аденина, обладающего противовирусной активностью // Фармакокинетика и фармакодинамика. - 2013. - № 1. - С. 40-42.
- Смирнова Л.А., Рябуха А.Ф., Кузнецов К.А., Сучков Е.А., Перфилова В.Н., Тюренков И.Н. Абсолютная и относительная биодоступность нового производного глутаминовой кислоты - глутарона // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2015. - № 78 (12). - С. 23-25.
- Тюренков И.Н., Багметова В.В., Чернышева Ю.В., Меркушенкова О.В., Берестовицкая В.М., Васильева О.С. Сравнение психотропных свойств глутаминовой кислоты и ее нового производного - гидрохлорида бета-фенилглутаминовой кислоты (глутарона) // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 3-1. - С. 167-172.