НАРУШЕНИЕ АНТИТРОМБОТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭНДОТЕЛИЯ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ПЕПТИДНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ

Полный текст

В последние годы эндотелий рассматривается как уникальная метаболическая система, играющая важную роль в процессах регуляции тонуса сосудов, защите сосудистой стенки от воздействия повреждающих факторов. Показано, что эндотелиальный слой сосудов предупреждает активацию гемостати-ческих свойств крови, включая агрегацию тромбоцитов [3]. Нарушение физиологических свойств эндотелия - эндотелиальная дисфункция (ЭД), развивающаяся при его продолжительном повреждении, в том числе и при сахарном диабете, приводит к усилению продукции агрегантов, тромбогенных и вазоконстрикторных факторов [5]. Известно, что пептидные препараты, включая дельталицин и семакс, обладают уникальной совокупностью свойств. Показано, что дельта-сон индуцирующий пептид, который является действующим веществом препарата дельталицин, а также семакс обладают антиоксидантным, антигипоксическим, антистрессорным, мембранопротекторным, иммуномодулирующим действием [1, 4, 8]. В связи с этим представляет интерес анализ влияния дельталицина и семакса на развитие нарушений антитромботических свойств эндотелия при экспериментальном сахарном диабете. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение влияния дельталицина, семакса и их комбинаций на антитромботические свойства эндотелия при сахарном диабете. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена на 100 крысах-самцах Вистар весом 210-230 г. 8 животных оставались интактными, а остальным моделировали сахарный диабет путем однократного внутривенного введения стрептозотоцина (Sigma, США) в дозе 45 мг/кг на цитратном буфере (pH = 4,5) [6]. Спустя 72 часа в крови определяли содержание глюкозы глюкозо-оксидазным методом с использованием набора Глюкоза-ФКД (Россия). Для дальнейших экспериментов отбирали крыс с концентрацией глюкозы в крови 12,0 ммоль/л и более [7]. Исследуемые препараты экспериментальным животным вводили ежедневно в течение 10 дней внутримышечно в дозах: дельталицин - 100 мкг/кг массы тела, семакс - 200 мкг/кг массы тела. В качестве препарата сравнения был выбран суло-дексид (препарат «Вессел Дуэ Ф» фирмы «Альфа-сигма С.п. А», Италия), который применяли внутри-желудочно в дозе 30 ЕВЛ (единицы высвобождения липопротеидлипазы) в течение 28 дней. Были выделены следующие экспериментальные группы: 1) интактная; 2) контрольная № 1 (сахарный диабет и внутримышечное введение физиологического раствора); 3) контрольная № 2 (сахарный диабет и внутрижелудочное введение физиологического раствора); 4) контрольная № 3 (сахарный диабет внутрижелудочное-внутри-мышечное введение физиологического раствора); 5) опытная № 1 (сахарный диабет и введение дельталицина); 6) опытная № 2 (сахарный диабет и введение семакса); 7) опытная № 3 (сахарный диабет и введение сулодексида); 8) опытная № 4 (сахарный диабет и введение дельталицина + семакса); 9) опытная № 5 (сахарный диабет и введение дельталицина + сулодексида); 10) опытная № 6 (сахарный диабет и введение семакса + сулодексида). Животных выводили из опыта на 28-е сутки и определяли показатели, характеризующие гемо-статическую функцию крови: протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), концентрацию в плазме фибриногена (по методу Клаусса). Исследования проводили с соблюдением положений, изложенных в Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации о гуманном отношении к лабораторным животным (2000 г.), директивы Европейского сообщества (86/609EC). Выполнение исследований разрешено Региональным этическим комитетом (протокол № 3 от 07 октября 2016 г.). Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента после проверки нормальности распределения изучаемых параметров с помощью программного обеспечения MS Excel и Statistica 10. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Моделирование сахарного диабета путем внутривенного введения стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг приводит к повышению содержания фибриногена в плазме крови в 2,1 раза (р < 0,001), снижению ТВ на 28,2-30,2 % (р < 0,001), ПВ - на 24,0-27,6% (р < 0,001), АЧТВ - на 33,0 34,5 % (р < 0,001) по сравнению с интактной группой (табл.). Влияние дельталицина, семакса, сулодексида и их комбинаций на показатели гемостаза и антитромботическую функцию эндотелия у крыс с сахарным диабетом, n = 8 Группа Концентрация фибриногена, г/л Тромбиновое время, с Протромби-новое время, с Активированное частичное тром бопла-стиновое время, с Интактная группа 1 , 86 ± 0,12 29,1 ± 0,8 25,0 ± 0,9 39,4 ± 1,2 Контрольная группа № 1 3,90 ± 0,13х 20,3 ± 1,0 х 18,1 ± 0,6х 25,8 ± 0,5х Контрольная группа № 2 3,88 ± 0,11х 20,6 ± 0,7 х 18,9 ± 0,9х 26,0 ± 0,6х Контрольная группа № 3 3,93 ± 0,14х 20,9 ± 1,1 х 19,0 ± 0,7х 26,4 ± 0,8х Введение дельтали цина 3,05 ± 0,09*** 24,0 ± 0,7* 22,0 ± 0,6** 33,9 ± 0,8*** Введение семакса 3,71 ± 0,10 20,4 ± 0,6 20,0 ± 0,7 26,5 ± 1,5 Введение дельталицина и семакса 2,89 ± 0 ,10*** 24,1 ± 0,8* 23,4 ± 0,5*** 34,6 ± 0,7*** Введение сулодексида 3,03 ± 0,10*** 23,8 ± 0,9* 22,0 ± 0,5* 32,9 ± 0,6*** Введение дельтали цина и сулодексида 2,55 ± 0 ,06*** 26,6 ± 0 7*** 25,1 ± 0,5*** 35,8 ± 0,5*** Введение семакса и сулодек-сида 2,91 ± 0 11 *** 24,0 ± 0,7* 22,1 ± 0,5** 33,4 ± 0,5*** хр < 0,001 по сравнению с интактными животными; *р < 0,05 по сравнению с контрольными животными; **р < 0,01 по сравнению с контрольными животными; ***р < 0,001 по сравнению с контрольными животными. Введение дельталицина в дозе 100 мкг/кг внутримышечно ежедневно в течение 10 суток вызывает снижение содержания фибриногена на 21,8 % (р < 0,001), увеличение ТВ на 18,2 % (р < 0,05), ПВ на 21,5 % (р < 0,01), АЧТВ - на 31,4 % (р < 0,001) у животных с сахарным диабетом. Применение семакса не оказывало существенного влияния на исследуемые показатели. Внутри-желудочное введение сулодексида в дозе 30,0 ЕВЛ ежедневно в течение 28 дней приводило к снижению концентрации фибриногена на 21,9 % (р < 0,001), повышению ТВ на 15,5 % (р < 0,05), ПВ - на 16,4 % (р < 0,05), АЧТВ - на 26,5 % (р < 0,001) по сравнению с контрольными животными. При применении комбинации дельталицина и семакса не установлено статистически достоверных различий с эффектами использования одного дельталицина (р > 0,05). Введение комбинации препаратов дельталицина и сулодексида оказалось наиболее эффективным. Показано, что содержание фибриногена снизилось на 34,6 % (р < 0,001), ТВ увеличилось на 29,1 % (р < 0,001), ПВ - на 38,6 % (р < 0,001), АЧТВ -на 38,8 % (р < 0,001). При этом исследуемые показатели были статистически достоверно выше, чем у крыс, получавших только дельталицин или суло-дексид (р < 0,05-0,01). Применение комбинации сулодексида и семакса оказывало корригирующее влияние на исследуемые показатели у крыс с сахарным диабетом: снижение концентрации фибриногена составило 26,0 % (р < 0,001), увеличение ТВ - на 14,8 % (р < 0,05), ПВ - на 16,3% (р < 0,01), АЧТВ - на 26,5 % (р < 0,001). Однако не установлено существенных различий между группами, получавшими комбинацию сулодексида и семакса или только сулодексид. Полученные результаты подтверждают данные литературы об активации гемостатических свойств крови при развитии ЭД при сахарном диабете [7]. Поражение эндотелия при сахарном диабете сопровождается обнажением субэндо-телиального слоя, что приводит к адгезии и агрегации тромбоцитов, активации свертывания и повышению вязкости крови [5]. Известно, что ведущую роль в повреждении эндотелия при сахарном диабете играет активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) [3]. Ранее показано, что дельталицин обладает антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием [1, 4]. Таким образом, можно предположить, что снижение ПОЛ под влиянием дельталицина тормозит развитие ЭД и активацию гемостатических свойств крови. Выраженный протективный эффект комбинации сулодексида и дельталицина объясняется влиянием указанных препаратов на различные механизмы развития ЭД, а также потенциирующим действием дельталицина. В работе не установлено корригирующего влияния семакса на показатели гемостаза у животных с сахарным диабетом. Ранее показано, что пептиды, имеющие подобно семаксу в своем составе аминокислоты глицин и пролин, препятствуют агрегации тромбоцитов [2]. Однако, если агрегация тромбоцитов индуцирована адреналином или АДФ, то эффекты семакса не проявляются [2]. По нашему мнению, активация коагуляции при сахарном диабете связана с включением механизмов, на которые семакс не оказывает влияния. ЗАКЛЮЧЕНИЕ В работе установлено, что применение препарата дельталицин в дозе 100 мкг/кг животным с сахарным диабетом снижает патологическую активацию свертывания крови, что проявляется увеличением ПВ, ТВ, АЧТВ, снижением концентрации фибриногена в плазме. Применение комбинации дельталицина и сулодексида оказывает наибольший корригирующий эффект на нарушения ко а гуляции крови при сахарном диабете. В работе показано, что применение семакса не оказывает влияния на изменение ПВ, ТВ, АЧТВ, концентрации фибриногена у животных с сахарным диабетом.

Об авторах

А. А Елагина

ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра патофизиологии

Юрий Дмитриевич Ляшев

ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: ylyashev@yandex.ru
д. м. н., профессор кафедры патофизиологии

Е. Б Артюшкова

ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра патофизиологии

А. Ю Ляшев

ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра патофизиологии

Список литературы

Дополнительные файлы