VIOLATION OF THE ANTITHROMBOTIC PROPERTIES OF THE ENDOTHELIUM IN DIABETES MELLITUS AND THEIR CORRECTION BY PEPTIDES

Full Text

В последние годы эндотелий рассматривается как уникальная метаболическая система, играющая важную роль в процессах регуляции тонуса сосудов, защите сосудистой стенки от воздействия повреждающих факторов. Показано, что эндотелиальный слой сосудов предупреждает активацию гемостати-ческих свойств крови, включая агрегацию тромбоцитов [3]. Нарушение физиологических свойств эндотелия - эндотелиальная дисфункция (ЭД), развивающаяся при его продолжительном повреждении, в том числе и при сахарном диабете, приводит к усилению продукции агрегантов, тромбогенных и вазоконстрикторных факторов [5]. Известно, что пептидные препараты, включая дельталицин и семакс, обладают уникальной совокупностью свойств. Показано, что дельта-сон индуцирующий пептид, который является действующим веществом препарата дельталицин, а также семакс обладают антиоксидантным, антигипоксическим, антистрессорным, мембранопротекторным, иммуномодулирующим действием [1, 4, 8]. В связи с этим представляет интерес анализ влияния дельталицина и семакса на развитие нарушений антитромботических свойств эндотелия при экспериментальном сахарном диабете. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение влияния дельталицина, семакса и их комбинаций на антитромботические свойства эндотелия при сахарном диабете. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена на 100 крысах-самцах Вистар весом 210-230 г. 8 животных оставались интактными, а остальным моделировали сахарный диабет путем однократного внутривенного введения стрептозотоцина (Sigma, США) в дозе 45 мг/кг на цитратном буфере (pH = 4,5) [6]. Спустя 72 часа в крови определяли содержание глюкозы глюкозо-оксидазным методом с использованием набора Глюкоза-ФКД (Россия). Для дальнейших экспериментов отбирали крыс с концентрацией глюкозы в крови 12,0 ммоль/л и более [7]. Исследуемые препараты экспериментальным животным вводили ежедневно в течение 10 дней внутримышечно в дозах: дельталицин - 100 мкг/кг массы тела, семакс - 200 мкг/кг массы тела. В качестве препарата сравнения был выбран суло-дексид (препарат «Вессел Дуэ Ф» фирмы «Альфа-сигма С.п. А», Италия), который применяли внутри-желудочно в дозе 30 ЕВЛ (единицы высвобождения липопротеидлипазы) в течение 28 дней. Были выделены следующие экспериментальные группы: 1) интактная; 2) контрольная № 1 (сахарный диабет и внутримышечное введение физиологического раствора); 3) контрольная № 2 (сахарный диабет и внутрижелудочное введение физиологического раствора); 4) контрольная № 3 (сахарный диабет внутрижелудочное-внутри-мышечное введение физиологического раствора); 5) опытная № 1 (сахарный диабет и введение дельталицина); 6) опытная № 2 (сахарный диабет и введение семакса); 7) опытная № 3 (сахарный диабет и введение сулодексида); 8) опытная № 4 (сахарный диабет и введение дельталицина + семакса); 9) опытная № 5 (сахарный диабет и введение дельталицина + сулодексида); 10) опытная № 6 (сахарный диабет и введение семакса + сулодексида). Животных выводили из опыта на 28-е сутки и определяли показатели, характеризующие гемо-статическую функцию крови: протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), концентрацию в плазме фибриногена (по методу Клаусса). Исследования проводили с соблюдением положений, изложенных в Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации о гуманном отношении к лабораторным животным (2000 г.), директивы Европейского сообщества (86/609EC). Выполнение исследований разрешено Региональным этическим комитетом (протокол № 3 от 07 октября 2016 г.). Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента после проверки нормальности распределения изучаемых параметров с помощью программного обеспечения MS Excel и Statistica 10. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Моделирование сахарного диабета путем внутривенного введения стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг приводит к повышению содержания фибриногена в плазме крови в 2,1 раза (р < 0,001), снижению ТВ на 28,2-30,2 % (р < 0,001), ПВ - на 24,0-27,6% (р < 0,001), АЧТВ - на 33,0 34,5 % (р < 0,001) по сравнению с интактной группой (табл.). Влияние дельталицина, семакса, сулодексида и их комбинаций на показатели гемостаза и антитромботическую функцию эндотелия у крыс с сахарным диабетом, n = 8 Группа Концентрация фибриногена, г/л Тромбиновое время, с Протромби-новое время, с Активированное частичное тром бопла-стиновое время, с Интактная группа 1 , 86 ± 0,12 29,1 ± 0,8 25,0 ± 0,9 39,4 ± 1,2 Контрольная группа № 1 3,90 ± 0,13х 20,3 ± 1,0 х 18,1 ± 0,6х 25,8 ± 0,5х Контрольная группа № 2 3,88 ± 0,11х 20,6 ± 0,7 х 18,9 ± 0,9х 26,0 ± 0,6х Контрольная группа № 3 3,93 ± 0,14х 20,9 ± 1,1 х 19,0 ± 0,7х 26,4 ± 0,8х Введение дельтали цина 3,05 ± 0,09*** 24,0 ± 0,7* 22,0 ± 0,6** 33,9 ± 0,8*** Введение семакса 3,71 ± 0,10 20,4 ± 0,6 20,0 ± 0,7 26,5 ± 1,5 Введение дельталицина и семакса 2,89 ± 0 ,10*** 24,1 ± 0,8* 23,4 ± 0,5*** 34,6 ± 0,7*** Введение сулодексида 3,03 ± 0,10*** 23,8 ± 0,9* 22,0 ± 0,5* 32,9 ± 0,6*** Введение дельтали цина и сулодексида 2,55 ± 0 ,06*** 26,6 ± 0 7*** 25,1 ± 0,5*** 35,8 ± 0,5*** Введение семакса и сулодек-сида 2,91 ± 0 11 *** 24,0 ± 0,7* 22,1 ± 0,5** 33,4 ± 0,5*** хр < 0,001 по сравнению с интактными животными; *р < 0,05 по сравнению с контрольными животными; **р < 0,01 по сравнению с контрольными животными; ***р < 0,001 по сравнению с контрольными животными. Введение дельталицина в дозе 100 мкг/кг внутримышечно ежедневно в течение 10 суток вызывает снижение содержания фибриногена на 21,8 % (р < 0,001), увеличение ТВ на 18,2 % (р < 0,05), ПВ на 21,5 % (р < 0,01), АЧТВ - на 31,4 % (р < 0,001) у животных с сахарным диабетом. Применение семакса не оказывало существенного влияния на исследуемые показатели. Внутри-желудочное введение сулодексида в дозе 30,0 ЕВЛ ежедневно в течение 28 дней приводило к снижению концентрации фибриногена на 21,9 % (р < 0,001), повышению ТВ на 15,5 % (р < 0,05), ПВ - на 16,4 % (р < 0,05), АЧТВ - на 26,5 % (р < 0,001) по сравнению с контрольными животными. При применении комбинации дельталицина и семакса не установлено статистически достоверных различий с эффектами использования одного дельталицина (р > 0,05). Введение комбинации препаратов дельталицина и сулодексида оказалось наиболее эффективным. Показано, что содержание фибриногена снизилось на 34,6 % (р < 0,001), ТВ увеличилось на 29,1 % (р < 0,001), ПВ - на 38,6 % (р < 0,001), АЧТВ -на 38,8 % (р < 0,001). При этом исследуемые показатели были статистически достоверно выше, чем у крыс, получавших только дельталицин или суло-дексид (р < 0,05-0,01). Применение комбинации сулодексида и семакса оказывало корригирующее влияние на исследуемые показатели у крыс с сахарным диабетом: снижение концентрации фибриногена составило 26,0 % (р < 0,001), увеличение ТВ - на 14,8 % (р < 0,05), ПВ - на 16,3% (р < 0,01), АЧТВ - на 26,5 % (р < 0,001). Однако не установлено существенных различий между группами, получавшими комбинацию сулодексида и семакса или только сулодексид. Полученные результаты подтверждают данные литературы об активации гемостатических свойств крови при развитии ЭД при сахарном диабете [7]. Поражение эндотелия при сахарном диабете сопровождается обнажением субэндо-телиального слоя, что приводит к адгезии и агрегации тромбоцитов, активации свертывания и повышению вязкости крови [5]. Известно, что ведущую роль в повреждении эндотелия при сахарном диабете играет активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) [3]. Ранее показано, что дельталицин обладает антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием [1, 4]. Таким образом, можно предположить, что снижение ПОЛ под влиянием дельталицина тормозит развитие ЭД и активацию гемостатических свойств крови. Выраженный протективный эффект комбинации сулодексида и дельталицина объясняется влиянием указанных препаратов на различные механизмы развития ЭД, а также потенциирующим действием дельталицина. В работе не установлено корригирующего влияния семакса на показатели гемостаза у животных с сахарным диабетом. Ранее показано, что пептиды, имеющие подобно семаксу в своем составе аминокислоты глицин и пролин, препятствуют агрегации тромбоцитов [2]. Однако, если агрегация тромбоцитов индуцирована адреналином или АДФ, то эффекты семакса не проявляются [2]. По нашему мнению, активация коагуляции при сахарном диабете связана с включением механизмов, на которые семакс не оказывает влияния. ЗАКЛЮЧЕНИЕ В работе установлено, что применение препарата дельталицин в дозе 100 мкг/кг животным с сахарным диабетом снижает патологическую активацию свертывания крови, что проявляется увеличением ПВ, ТВ, АЧТВ, снижением концентрации фибриногена в плазме. Применение комбинации дельталицина и сулодексида оказывает наибольший корригирующий эффект на нарушения ко а гуляции крови при сахарном диабете. В работе показано, что применение семакса не оказывает влияния на изменение ПВ, ТВ, АЧТВ, концентрации фибриногена у животных с сахарным диабетом.

About the authors

A. A Elagina

FSBEI HE «Kursk State Medical University» of Public Health Ministry of the Russian Federation

Ju. D Ljashev

FSBEI HE «Kursk State Medical University» of Public Health Ministry of the Russian Federation

Email: ylyashev@yandex.ru

E. B Artjushkova

FSBEI HE «Kursk State Medical University» of Public Health Ministry of the Russian Federation

A. Ju Ljashev

FSBEI HE «Kursk State Medical University» of Public Health Ministry of the Russian Federation

References

Supplementary files