ГЕМОПОЭЗ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ПРИ ВОСПАЛЕНИИ НА ФОНЕ ЛОКАЛЬНОГО УДАЛЕНИЯ НЕФАГОЦИТИРУЮЩИХ ГРАНУЛОЦИТОВ

Полный текст

Определяющими признаками воспаления являются сложные изменения системы крови, микро-циркуляторного русла и соединительной ткани в виде альтерации, экссудации, эмиграции лейкоцитов и пролиферации. Реакции, возникающие на повреждения со стороны всего организма, являются основополагающими и характеризуют воспали-тельно-репаративные изменения макроорганизма в целом [1-3]. Сигнальными клетками, появляющимися первыми в месте повреждения, являются нейтрофиль-ные гранулоциты. Они в свою очередь стимулируют лимфоциты, моноциты, эозинофилы, которые прибывают на помощь нетрофильным гранулоцитам и активизируют их деятельность. Поэтому нейтро-фильные гранулоциты становятся важным звеном, определяющим впоследствии саму возможность внедрения и локализации антигена [4-6]. Нейтрофильные гранулоциты играют важную роль в воспалительном процессе благодаря нахождению в гранулярном аппарате клеток структур, которые активируются и при дегрануляции выделяют свободные радикалы кислорода, лизосомальные энзимы, способствующие подавлению чужеродных микроорганизмов, проникших в соединительную ткань [7, 8, 12]. Антибактериальная функция авторизирован-ных нейтрофилов при воспалении, заключающаяся в выделении катионных белков и факторов проницаемости, способствует активации дегрануляции нефагоцитирующих гранулоцитов и базофильных лейкоцитов, что указывает на стимуляцию клеток мононуклеарной фагоцитарной системы. В результате многообразия клеточных коопераций формируется эффективный противоинфекционный барьер [9, 10]. В настоящее время установлено взаимодействие мононуклеарных и полиморфноядерных клеток [11]. Лимфоциты и моноциты (макрофаги) могут модифицировать функции и активность нейтрофильных гранулоцитов, а нейтрофилы в свою очередь способны оказывать существенное влияние на мононуклеарные клетки [12]. Наиболее актуальными проблемами воспаления остаются механизмы взаимодействия всей тучноклеточной системы, сдерживающие прогрессирование хронического воспаления и играющие компенсаторную роль в организме. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Экспериментальное изучение функционального состояния лейкоцитов крови и гемопоэза при воспалении на фоне локального удаления нефагоцитирующих гранулоцитов. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперимент проведен на 24 крысах-самцах линии Wistar массой 180-220 г. В контрольную группу отобрано 12 животных, не имеющих патологических процессов. Основную группу составили 12 крыс-самцов с явными признаками воспаления. О функциональном состоянии лейкоцитов крови судили по активности их маркерных ферментов. Маркерами функциональной активности нейтрофилов служили миелопероксидаза (МПО) и кислая фосфатаза (КФ), моноцитов-макрофагов - а-нафтилацетат-эстераза (а-НАЭ), лимфоцитов - КФ и а-НАЭ. Миелопероксидаза - фермент, локализующийся преимущественно в специфических гранулах нейтрофилов, определяли по методу Грэхема -Кнолля, основанному на окислении бензидина перекисью водорода в коричневый оксибензидин в присутствии пероксидазы. Свежие мазки крови фиксировали в 4%-м формалиново-спиртовом растворе, состоящем из 10 частей 40%-го формальдегида и 90 частей 96%-го спирта в течение 30 с. Отмывали в проточной воде и высушивали. Заливали реактивом на пероксидазу, состоящим из бензидина, растворенного в 6 мл 96%-го спирта, 4 мл воды и 0,02 мл 3%-й перекиси водорода, на 5 мин. Тщательно промывали в проточной воде и высушивали. Докрашивали азуром II-эозином. Подсчет гранул производили с учетом интенсивности их окраски в световом микроскопе «Биолам». Интенсивность окраски оценивали по 3-балльной шкале. Активность фермента рассчитывали по формуле Астальди и выражали в СЦК. Кислую фосфатазу определяли методом азосочетания Берстона. Нефиксированные мазки инкубировали при 37 °С в течение 2 ч в среде, состоящей из 10 мг нафтол-AS-фосфата, растворенного в 5 мл диметилформамида, 15 мл 0,1 М цитратного буфера, рН 5,2, 45 мл дистиллированной воды, 5 мл раствора хлорида магния, 50 мг диазоля синего. Затем мазки крови промывали изотоническим раствором хлорида натрия. Докрашивали красителем Романовского - Гимзы. Промывали в проточной воде. Подсчет гранул производили с учетом интенсивности их окраски в световом микроскопе «Биолам». Активность фермента рассчитывали по формуле Астальди и выражали в СЦК. Альфа-НАЭ определяли по методу Леффлера. Свежеприготовленные и высушенные на воздухе мазки крови фиксировали в парах формалина 4 мин. Инкубировали в среде, состоящей из 10 мг а-нафтил-ацетата, растворенного в 0,2 мл ацетона, 40 мл 0,1 М раствора фосфатного буфера, рН 7,8-8,0, 50 мг прочного синего В, при комнатной температуре 30 мин, промывали в проточной воде 2-3 мин. Докрашивали кислым гемалауном 8 мин, промывали дистиллированной водой 15 мин. В моноцитах производили подсчет гранул с учетом интенсивности их окраски в световом микроскопе «Биолам». Интенсивность окраски оценивали по 3-балльной шкале. Активность фермента рассчитывали по формуле Астальди и выражали в СЦК. Подсчитывали процент лимфоцитов, содержащих а-НАЭ. Результаты прошли статистическую обработку с применением однофакторного дисперсионного анализа и критерия множественных сравнений Ньюмена - Кейсла в программе «Primer of Biostatistics 4.03» для Windows. Достоверными считали различия при р < 0,05. Все экспериментальные исследования проведены в полном соответствии с требованиями надлежащей лабораторной практики (изложенными в национальном стандарте «Принципы надлежащей лабораторной практики» ГОСТ Р 53434-2009), с соблюдением Международных принципов Европейской конвенции о «Защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей» (Страсбург, 1986), в соответствии с международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), «Общими этическими принципами экспериментов на животных» (Россия, 2011), правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003) и положительным заключением этического комитета в условиях вивария на базе федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ставропольский государственный аграрный университет» (Ставрополь). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ При изучении функциональной активности лейкоцитов крови установлено, что при естественном течении воспаления активность МПО в нейтрофилах возрастает на 6-й час, 3-, 21- и 28-е сутки, в эти же сроки несколько увеличивается и активность КФ. Активность а-НАЭ в моноцитах повышается на 1-е и достоверно на 7-14-е сутки. В лимфоцитах активность КФ возрастает на 6-й час, 3-, 21-, 28-е сутки; количество лимфоцитов, содержащих а-НАЭ, несколько увеличивается на 1-е и 7-е, 14-е сутки (рис. 1). Активность КФ в лимфоцитах меньше на 6 -й час, 3-и и 21-е сутки, количество лимфоцитов, содержащих а-НАЭ, меньше во все сроки исследования, за исключением 28 суток, достоверно - на 7-е сутки (рис. 3). Рис. 1. Активность а-нафтилацетат-эстеразы в лейкоцитах крови при естественном течении хронического воспаления и при хроническом воспалении на фоне локального удаления НГ (M ± m, n = 6). Данные статистически достоверны относительно показателей контрольной группы р < 0,05) Ри с. 3 . Активность миелопероксидазы в лейкоцитах крови п р и естественном течении хронического воспаления и при хроническом воспалении на фоне локального удаления НГ ( M ± m, n = 6). Данные статистически достоверны относительно показателей контрольной группы (р1 < 0,05) Активность ферментов в лейкоцитах зависит от соотношения между дегрануляцией и эмиграцией клеток и притоком вновь образованных лейкоцитов из костного мозга в периферическую кровь. По нашему мнению, ферментативная деятельность отражает приток лейкоцитов, так как представленные сроки соответствуют поступлению лейкоцитов из костномозгового резерва (6-й-24-й часы), активации гемопоэза (3-и сутки), повторному выходу лейкоцитов в кровь (7-е сутки), вторичной активации гемопоэза (14-28-е сутки). Активность МПО в нейтрофилах при воспалительном процессе на фоне удаления нефагоцитирующих гранулоцитов (НГ) ниже, чем при естественном течении процесса, на 6-й час - 3-и сутки, и выше - на 7-14-е сутки; активность КФ - меньше в контрольной группе и больше на 3-7-е сутки. Активность а-НАЭ в моноцитах ниже в контроле и отстает на 1-е и 7-е сутки, превышает на 3-и сутки и меньше на 14-е сутки (рис. 2). Рис. 2. Активность кислой фосфатазы в лейкоцитах крови при естественном течении хронического воспаления и при хроническом воспалении на фоне локального удаления НГ (M ± m, n = 6). Данные статистически достоверны относительно показателей контрольной группы (р1 < 0,05) Следовательно, различные показатели ферментативной активности отражают меньшее поступление нейтрофилов и моноцитов из костного мозга в кровь и, далее, в очаг воспаления, изменения интенсивности и динамики костномозгового кроветворения и с учетом усиления миграции лимфоцитов в патологический очаг повышенную дегрануляцию лимфоцитов. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, показатели ферментативной активности лейкоцитов в крови при воспалительном процессе в результате предварительного удаления НГ из патологического очага приводят к усилению костномозгового кроветворения и снижению выхода лейкоцитов из костного мозга в периферическую кровь. В самом воспалительном очаге наблюдается аккумуляция лимфоцитов при незначительном присутствии нейтрофилов и моноцитов.

Об авторах

Алла Григорьевна Сирак

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: sergejsirak@yandex.ru
д. м. н., профессор, зав. кафедрой гистологии

Е. И Пискарева

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

М. А Долгашова

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

О. Г Магомедова

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

А. П Арутюнова

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

О. В Любанская

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

Е. Г Неменущая

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

М. О Диденко

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

З. М Кочкарова

ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии

Список литературы

Дополнительные файлы