ИНФОРМАТИВНОСТЬ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ПРИ ПОДТВЕРЖДЕНИИ ДИАГНОЗА ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА
- Авторы: Замарина Т.В.1,2, Храпова Н.П1, Баркова И.А1, Пименова Е.В1,2, Кузютина Ю.А1,2, Ткаченко Г.А1,2, Батурин А.А1,2, Лемасова Л.В1,2, Леденева М.Л1, Тетерятникова Н.Н1
-
Учреждения:
- ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»
- ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
- Выпуск: Том 17, № 4 (2020)
- Страницы: 42-45
- Раздел: Статьи
- URL: https://journals.eco-vector.com/1994-9480/article/view/119495
- DOI: https://doi.org/10.19163/1994-9480-2020-4(76)-42-45
- ID: 119495
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Полный текст
ЦЕЛЬ РАБОТЫ Оценить информативность регламентированных диагностических методов при верификации диагноза лихорадки Западного Нила в биологическом материале, поступившем на исследование в референс-центр в 2018-2019 гг. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Объектами исследования явились 270 образцов сывороток крови и цельной крови от больных с предварительными диагнозами: вирусный энцефалит неуточненной этиологии, острая респираторная Лабораторное подтверждение клинического диагноза лихорадки Западного Нила (ЛЗН) заключается в обнаружении РНК вируса Западного Нила (ВЗН) с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и выявлении методом иммунофермент-ного анализа (ИФА) специфических антител в сыворотке крови больного. Обнаружение специфических антител до сих пор остается наиболее широко используемым подходом к диагностике ЛЗН у людей, в то время как вирусная РНК обнаруживается в крови больного в период от 5 до 15 дней от начала заболевания [2, 4, 5, 13]. :©<з?ярйз вирусная инфекция, менингит, острый гастроэнтерит, поступившие в референс-центр (РЦ) в 2018 и 2019 гг. из Волгоградской, Астраханской, Ростовской, Воронежской, Тверской, Тульской, Липецкой областей, Ставропольского и Красноярского края, Республик Татарстан, Крым, Дагестан, Ханты-Мансийского автономного округа. Для исследования методом ИФА в РЦ применяли тест-системы: «Anti-West Nile Virus ELISA (IgM)», «Anti-West Nile Virus ELISA (IgG)», «Avidity Anti-West Nile Virus (IgG) ELISA» («Euroimmun AG», Германия); РНК ВЗН определяли при помощи набора реагентов «АмплиСенс WNV-FL» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Специфические антитела были зарегистрированы у 193 (71,4 %) обследуемых. Только антитела (IgG, IgM) без выявления специфической РНК вируса Западного Нила были зафиксированы у 146 (54,0 %) пациентов. Вирусная РНК, совместно с присутствием антител классов IgG и IgM, определялась у 47 (17,4 %) человек, только РНК ВЗН - в 14 (5,1 %) случаях. По данным ряда авторов, IgM к ВЗН обычно обнаруживаются в течение первой недели инфекции, иногда в продромальный период, и от 6 мес. до нескольких лет сохраняются в кровеносном русле, в спинномозговой жидкости - до 200 дней после инфицирования. IgG к ВЗН циркулируют в организме, как минимум, до 1,5 лет, хоть и с выраженным падением титров. Определение специфических IgG позволяет установить диагноз ЛЗН, диагностическим критерием является сероконвер-сия либо нарастание их титра в четыре и более раза к 3-й неделе после начала заболевания. Однако подтверждение лабораторного диагноза ЛЗН на основании четырехкратного нарастания титра специфических IgG не всегда возможно, поскольку концентрация антител при этом заболевании увеличивается достаточно быстро (в течение 1-2 суток) после проявления симптомов, а затем стабилизируется [6, 7, 10, 12]. В настоящей работе в случае обнаружения IgG к ВЗН в сыворотке крови больного проводили определение авидности антител этого класса. Известно, что низкоавидные антитела циркулируют в крови первые 2-3 месяца, а высокоавидные выявляют при давнем контакте с возбудителем ЛЗН. Tabain I. с соавт. с помощью «Avidity AntiWest Nile Virus (IgG) ELISA» («Euroimmun AG», Германия) было проведено исследование, в котором авторам удалось доказать, что величина индекса авидности IgG к ВЗН позволяет дифференцировать острую стадию инфекции, вызванную ВЗН, от более поздней стадии болезни, причем для ЛЗН характерно быстрое «созревание авидности», что позволяет определять давность заболевания с точностью до месяца [9]. Всего авидность IgG против ВЗН была определена в 16 сыворотках крови. В IgM-положительных образцах авидность преимущественно имела низкие значения (до 40 %), в части сывороток - пограничные (от 40 до 60 %). В сыворотках крови, в которых обнаруживали IgG без присутствия IgM, авидность в большинстве случаев была высокой (выше 60 %). Данные результаты еще раз подтвердили, что авидность IgG позволяет отличить текущую/недавнюю инфекцию от персистирующей серопозитивности IgM, как у пациентов с выраженной симптоматикой заболевания, так и у лиц без си мптомов. Следует отметить, что биологический материал, полученный из различных регионов, в большинстве случаев направляли в РЦ только на основании клинической симптоматики. Несмотря на уста н овление циркуляции ВЗН в 62 субъектах РФ, в большинстве выявление больных ЛЗН в эпидемический сезон не проводится. Это напрямую связно с отсутствием возможности проведения лабораторных исследований на ЛЗН, а если диагностика проводится, то она ограничивается обнаружением IgM антител, в редких случаях РНК. На территории РФ разрешены к применению наборы реагентов для определения IgM к ВЗН: «Anti-West Nile Virus ELISA (IgM)» («Euroimmun AG», Германия), «БиоСкрин-ВЗН М» (ЗАО БТК «Биосервис», Россия), «ВектоНил-IgM» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Несмотря на ряд проведенных исследований по определению диагностической значимости иммуноферментных наборов различных производителей для определения антител к ВЗН [1, 3, 8, 11], в настоящий момент нет единого мнения специалистов о наиболее эффективной иммунодиагностической тест-системе. В ходе работы было оценено количество совпадающих результатов, полученных в лабораториях регионов при использовании ИФА тест-систем для обнаружения IgM к ВЗН отечественного производства (ЗАО «Вектор-Бест» и ЗАО БТК «Биосервис»), и в РЦ с применением тест-системы «Euroimmun AG». Совпадение результатов исследований иммуноферментных тест-систем производства «Euroimmun AG» и ЗАО БТК «Биосервис» составило 84,6 %, а с набором производства ЗАО «Вектор-Бест» - 60 %. Такие результаты не позволяют судить о недостатках или преимуществах той или иной тест-системы. Необходим более глубокий анализ диагностической чувствительности и специфичности каждой из них, а также их способности давать устойчиво стабильный результат при тестировании референтных образцов. Низкий процент обнаружения РНК ВЗН можно объяснить не только пропуском периода виремии, который составляет от 2-3 до 14-18 дней [4, 5], но и нарушениями правил доставки биологического материала. Предположительно, при несоблюдении правил хранения и транспортировки материала происходит разрушение РНК, чувствительность тест-системы не позволяет выявить вирусный материал в столь низкой концентрации, что ведет к ложноотрицательным результатам. Анализ данных показал, что РНК вируса была обнаружена в материале, полученном из медицинских учреждений Волгоградской области и близлежащих регионов: Ростовской области, Ставропольского края, Астраханской области, Воронежской области, республики Крым. В то время как в материале от пациентов из Красноярского края, Тюменской области, Тверской области и РНК ВЗН выявлено не было. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Для дифференциальной и ретроспективной диагностики лихорадки Западного Нила рекомендуется использовать комплексный подход, который заключается в параллельном использовании двух методов: прямого обнаружения РНК вируса с помощью ПЦР и в серологическом исследовании антител в ИФА. Такой подход обусловлен разными временными рамками образования специфических маркеров и ограниченным нахождением вируса в кровяном русле, а также для исключения ложноположительных результатов и перекрестных реакций с другими флавивирусами. Таким образом, антитела к вирусу Западного Нила (ВЗН) были обнаружены у 193 (71,4 %) пациентов, у 146 (54,0 %) был зарегистрирован только иммунный ответ без присутствия вируса РНК. Оба маркера ВЗН присутствовали у 47 (17,4 %) пациентов. Только РНК ВЗН была выявлена в 14 (5,1 %) случаях. Подтверждение клинического диагноза ЛЗН было получено в 76,6 % случаев (207 из 270). Достоверность постановки диагноза ЛЗН повышает только одновременное обнаружение нескольких специфических маркеров, поэтому на любой стадии заболевания необходимо использовать комплекс базовых иммуно- и генодиагностических методов. Более достоверные результаты могут быть получены при одновременном исследовании референтных образцов с применением различных тест-систем в одинаковых условиях.Об авторах
Татьяна Валерьевна Замарина
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»; ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Email: bultan@inbox.ru
к. м. н., старший научный сотрудник лаборатории иммунодиагностики
Н. П Храпова
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»
И. А Баркова
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»
Е. В Пименова
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»; ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Ю. А Кузютина
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»; ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Г. А Ткаченко
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»; ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
А. А Батурин
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»; ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Л. В Лемасова
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»; ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
М. Л Леденева
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»
Н. Н Тетерятникова
ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора»
Список литературы
- Азарян А.Р., Гришанова А.П., Иващенко Е.И. и др. Опыт применения ИФА тест-систем для серологической диагностики лихорадки Западного Нила // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2014. -№ 2. - С. 59-62.
- Говорухина М.В., Асмолова Н.Ю., Мазрухо Т.В. и др. Использование молекулярно-биологических методов в лабораторной диагностике лихорадки Западного Нила // Материалы Х съезда ВНПОЭМПИ. Москва 12-13 апреля 2012. - М., 2012. - С. 132.
- Дрефс Н.М. Сравнительная характеристика тест-систем, предназначенных для выявления иммуноглобулинов к возбудителю Лихорадки Западного Нила // Вестник ВолгМУ. - 2012. - Вып. 2 (42). - С. 36-38.
- Красовская Т.Ю., Найденова Е.В., Казанцев А.В. и др. Результаты использования комплексного подхода к лабораторной диагностике лихорадки Западного Нила // М атериалы IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика 2017». Москва, 18-20 апреля 2017. -М.: ООО «Юлис», 2017. - С. 178-179.
- Лихорадка Западного Нила / под ред. д-ра мед. наук А.В. Топоркова. - Волгоград: Издательство «Волга-Пресс», 2017. - 304 с.
- Barzon L., Pacenti M., Franchin E., et al. Excretion of West Nile virus in urine during acute infection // J Infect Dis. - 2013. - Vol. 208 (7). - P. 1086-1092. -doi: 10.1093/infdis/jit290.
- Murray K.O., Garcia M.N., Yan C., Gorchakov R. Persistence of detectable immunoglobulin M antibodies up to 8 years after infection with West Nile virus // Am J Trop Med Hyg. - 2013. - Vol. 89 (5). - P. 996-1000. doi: 10.4269/ajtmh.13-0232.
- Niedrig M., Donoso Mantke O., Altmann D., Zeller H. First international diagnostic accuracy study for the serological detection of West Nile virus infection // BMC Infect Dis. - 2007. - Vol. 7. - P. 72. - Published 2007 Jul 3. -doi: 10.1186/1471-2334-7-72.
- Papa A., Anastasiadou A., Delianidou M. West Nile vi ru s IgM and IgG antibodies three years post-infection // H ippo kratia. - 2015. - Vol. 19 (1). - P. 34-36.
- Rizzoli A., Jimenez-Clavero M.A., Barzon L., et al. The challenge of West Nile virus in Europe: knowledge gaps and research priorities // Euro Surveill. - 2015. -Vol. 20 (20). - P. 21135. - Published 2015 May 21. -doi: 10.2807/1560-7917.es2015.20.20.21135.
- Sanchini А., Donoso-Mantke О., Papa А., et al. Second International Diagnostic Accuracy Study for the Serological Detection of West Nile Virus Infection. 2013 // PLOS Neglected Tropical Disease. - 2013. - Vol. 7, Is. 4. - e2184.
- Tabain I., Vilibic-Cavlek T., Kristofic B., et al. The role of IgG avidity determination in diagnosis of West Nile virus infection. Abstracts // International Journal of Infectious Diseases. - 2019. - Vol. 79 (S1). - P. 1-150. -doi.org/10.1016/j.ijid.2018.11.287.
- Zamarina T.V., Khrapova N.P., Tkachenko G.A., et al. Application of a complex of methods in laboratory diagnostics of West Nile fever // Russian Journal of Infection and Immunity. - 2018. - Vol. 8, no. 4. - P. 125. -doi: 10.15789/2220-7619-2018-4-2.22.
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)