INFLUENCE OF GLUFIMET, A NEW DERIVATIVE OF GLUTAMIC ACID, ON THE HEMOSTATIC SYSTEM OF STRESSED ANIMALS

Full Text

Ведущим патогенетическим механизмом стрес-сорных повреждений различных органов является нарушение системы гемостаза, причиной которого могут быть катехоламины, выделяющиеся в кровоток при воздействии стрессорных факторов и активирующие процесс свертывания крови по внешнему и внутреннему путям [12]. Увеличению коагуляционного потенциала крови способствует также тромбопластин, большое количество которого выделяется при формировании стресс-реакции. Стрессорное воздействие вызывает увеличение скорости образования фибрина, повышение активности плазменных факторов свертывания крови, концентрации фибриногена, тромбина. В настоящее время известно о существенной роли гемостазиологичес-ких сдвигов в атерогенезе, патогенезе гипертонической болезни, ишемической болезни сердца и мозга [2]. В этой связи, актуальным является поиск веществ для коррекции нарушений в системе гемостаза при стрес-сорном воздействии. В ранее выполненных работах на кафедрах фармакологии и фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ было показано выраженное анти-стрессорное действие производного гамма-аминомасляной кислоты - фенибута [5, 7, 11], а также его антикоагулянтное и антиагрегантное действие [6]. В настоящее время изучаются фармакологические свойства нового производного глутаминовой кислоты - глуфимета - в химической структуре которого имеется фрагмент фенибута, гамма-аминомасляной кислоты и глицина, что дало основание предположить наличие у него антикоагулянтного и антиагрегантного эффектов при стрессорном воздействии. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение влияния нового производного глутаминовой кислоты - глуфимета на систему гемостаза животных, подвергшихся длительному стрессорному воздействию. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 40 беспородных крысах-самцах массой 250-280 г. Были сформированы 4 группы по 10 животных в каждой: 1-я группа позитивного контроля; 2-я группа негативного контроля - стрессированные животные, которым вводили физраствор (0,1 мл/на 100 г массы); 3-я и 4-я опытные группы, включающие стрессированных животных, получавших глуфимет - в дозе 28,7 мг/кг и фенибут в дозе 25 мг/кг (n = 10). Стрессорное воздействие осуществлялось в специальной установке (6 изолированных отсеков одинакового объема), позволяющей производить комбинирование нескольких стрессорных раздражителей (пульсирующий свет, громкий звук и вибрация) [10]. Животные подвергались хроническому неизбегаемо-му стрессированию в течение 7 дней (ежедневно по 30 минут) со сменой разномодальных раздражителей каждые 5 мин по стахостической схеме, таким образом, чтобы каждое последующее стрессирую-щее воздействие было непредсказуемым для животных. Глуфимет и препарат сравнения фенибут вводились перорально 1 раз в день за 30 мин до стресси-рования в течение недели. 70 Выпуск 1 (49). 2014 ©зшірСз [ЩсоШтСІМЩ Забор крови для исследования у всех групп животных проводился из брюшного отдела аорты. Кровь стабилизировали 3,8%-м раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Определение показателей гемостаза осуществлялось на программируемом оптико-механическом коагулометре - Минилаб 701 с использованием наборов для определения протромбинового времени, тромбин-теста, фибриноген-теста, активированного частичного тромбопластинового времени (производство НПО РЕНАМ, Россия) [1]. Антиагрегантная активность исследовалась на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научнопроизводственной фирмы «Биола» (г. Москва, Россия) по методу Born G. в модификации Габбасова З.А. и соавт. (1989). В качестве индуктора агрегации тромбоцитов использовали АДФ («Renal», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкМ. Статистическую обработку результатов проводили в электронной таблице Exœl 5.0 с использованием f-критерия Стьюдента при помощи пакета статистических программ Microsoft Exœl 2006. Статистически достоверными различия считали при значимости р < 0,05. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Выявлено, что у стрессированных животных контрольной группы активированное частичное тромбоп-ластиновое время (АЧТВ) укорачивалось на 8,6 % по сравнению с показателем интактной группы животных, что свидетельствует об активации процессов коагуляции. Глуфимет практически не влиял, а фенибут даже несколько уменьшал АЧТВ по сравнению с группой негативного контроля (табл.). Протромбиновое время (ПВ) у стрессированных самцов контрольной группы уменьшилось по сравнению с аналогичным показателем интактных животных на 15,6 %, что отражает активацию внешнего пути образования тромбина на фоне стрессорного воздействия. Введение животным исследуемого соединения глуфи-мета не влияло на ПВ, а препарат сравнения фенибут даже способствовал снижению показателя по сравнению с контрольной группой животных (табл.). Об активации процессов коагуляции при стрессор-ном воздействии свидетельствует также укорочение тромбинового времени, которое наблюдалось у животных группы негативного контроля (14,4 ± 6,5) с по сравнению с интактными животными (20,3 ± 3,9) (р < 0,05). Введение соединений глуфимета и фенибута стресси-рованным животным приводило к удлинению ТВ на 46,5 и 27,8 % соответственно, по сравнению с группой негативного контроля (табл.). Отмечено увеличение концентрации фибриногена у животных, подвергшихся хроническому стрессорно-му воздействию на 27,5 % (р < 0,05) по сравнению с интактной группой, что свидетельствует о повышении у них свертываемости крови и риске образования тромбов (табл.). У стрессированных животных, получавших глуфимет и фенибут, концентрация фибриногена в плазме крови была ниже на 21,6 и 13,5 % (р < 0,05) соответственно по сравнению с контрольной группой стресси-рованных животных (табл.). Показано, что АДФ-индуцированные степень и скорость агрегации тромбоцитов у животных группы негативного контроля были на 64,2 % (р < 0,05) и 77 % (р < 0,05) соответственно выше по сравнению с таковой интактных животных. Глуфимет и фенибут снижали степень и скорость агрегации тромбоцитов на 19,4 % (р < 0,05); 28,4 % (р < 0,05); 25,7 % (р < 0,05) и 30,2 % (р < 0,05) соответственно по сравнению с группой негативного контроля (табл.). Таким образом, длительное стрессороное воздействие вызывает выраженные сдвиги в сторону гиперкоагуляции и гиперагрегации в плазменно-коагуляционном и сосудисто-тромбоцитарном звеньях гемостаза, о чем свидетельствует укорочение АЧТВ, протромбино-вого и тромбинового времени, повышение концентрации фибриногена, степени и скорости агрегации тромбоцитов у животных группы негативного контроля. Очевидно, изменения в системе гемостаза возникают и развиваются в результате увеличения концентрации адреналина при стрессорном воздействии. Адреналин, в свою очередь, связывается со специфическими мембранными рецепторами тромбоцитов и через G-белки стимулирует синтез тромбоксана А2 [9]. Возможно также, что эффект адреналина, связанный с активацией агрегации тромбоцитов обусловлен модуляцией мембран при его взаимодействии с а-адренорецепторами и изменением ее проницаемости к ионам Са2+ [13, 14]. Влияние глуфимета и фенибута на показатели гемостаза стрессированных животных Показатели Группы животных интактная стресс + физ р-р стресс + глуфимет стресс + фенибут АЧТВ, с 36,9 ± 13,6 34,3 ± 9,7 35,7 ± 9,3 28,2 ± 10,2 ПВ, с 31,4 ± 11,3 36,3 ± 16,9 33,2 ± 11,6 25,4 ± 11,0 ТВ, с 20,3 ± 3,9 14,4 ± 6,5* 21,1 ± 4,2# 18,4 ± 7,0 Фибриноген, г/л 2,9 ± 0,5 3,7 ± 0,3* 2,9 ± 0,8# 3,2 ± 0,6# Степень арегации, % 17,3 ± 6,0 28,4 ± 6,4* 22,9 ± 3,6# 21,1 ± 7,9# Скорость агрегации, %/мин 22,2 ± 10,5 39,3 ± 10,3* 28,1 ± 8,7# 27,4 ± 8,4# ‘Достоверно по f-критерию Стьюдента относительно интактной группы животных при р < 0,05; #достоверно по f-критерию Стьюдента относительно группы стрессированных животных при р < 0,05. Выпуск 1 (49). 2014 71 Кроме того, адреналин способствует освобождению из стенок сосуда факторов образования протромбиназы, способен активировать фактор XII в плазме, усиливает расщепление жиров и жирных кислот, которые поступают в кровь и имеют протромбиназную активность [3]. Нельзя исключить возможное негативное влияние стресса на вазодилатирующую и антитромботическую функцию эндотелия, что также может лежать в основе повышения агрегации и свертываемости крови животных, подвергшихся стрессорному воздействию. Исследуемые соединения-глуфимет и фенибут- ограничивают процессы гиперкоагуляции (особенно выражено на конечном этапе свертывания крови) и гиперагрегации тромбоцитов, о чем свидетельствует снижение ТВ и концентрации фибриногена, а также степени и скорости агрегации тромбоцитов у стрессированных животных, получавших вещества, по сравнению с группой негативного контроля. Вероятно, это связано с сим-патоингибирующим и противострессорным действием фе-нибута, показанном в ряде работ [7, 8, 11]. Вероятно, эти эффекты способствуют ограничению повреждающего действия стресса на эндотелий, способствуют нормализации его вазодилатирующей и антитромботи-ческой функции. Что касается глуфимета, он содержит в своей структуре фрагмент, сходный с фенибутом, чем, возможно, объясняется его антикоагулянтное и антиагрегантное действие. ЗАКЛЮЧЕНИЕ При длительном стрессорном воздействии наблюдаются процессы гиперкоагуляции и гиперагрегации крови, что проявляется в укорочении АЧТВ, протром-бинового и тромбинового времени, увеличении концентрации фибриногена, степени и скорости агрегации тромбоцитов. Производное глутаминовой кислоты - глуфимет и препарат сравнения фенибут ограничивают нарушения гемостаза, на что указывает снижение тромбинового времени, уровня фибриногена, степени и скорости агрегации тромбоцитов у животных, получавших исследуемые вещества. Глуфимет превосходит фенибут или сопоставим с ним по эффективности действия.

About the authors

N. V Sadikova

I. S Mokrousov

Email: taypin@mail.ru

I. I Prokofiev

D. D Borodin

References

Supplementary files