АNTIAGGREGATION ACTIVITY OF NOVEL INDOL DERIVATIVES

详细

Antiaggregation activity of a novel indol derivatives was investigated in vitro in comparison with the antiaggregant drug acetylsalicylic acid (ASA) using the method of ADP- induced aggregation of platelets in rabbits. Both the standard antiaggregant drug acetylsalicylic acid and the studied compound showed a dose-dependent antiaggregation activity. 7 novel indol derivatives showed an effect better than that of acetylsalicylic acid.

全文:

Тромбоциты являются ключевыми медиаторами адгезии, высвобождения активных веществ и агрегатромбообразования [8]. Изучение столь важного значе- ции тромбоцитов и тем самым заметно влияют на риск ния красных кровяных телец показало ведущую роль развития тромбозов. препаратов, ингибирующих функцию тромбоцитов, в В клинической практике наиболее широкое примепрофилактике и лечении тромбозов и стимулировало нение нашли антиагрегантные препараты, такие как: ацедальнейшее изучение новых и известных антиагреган- тилсалициловая кислота, подавляющая циклооксигеназтных средств, показавших свою эффективность в ши- ный путь агрегации тромбоцитов и блокаторы P2Y12-рерокомасштабных исследованиях [6]. Известные к на- цепторов - Тиклопидин, Клопидогрель, Прасугрель, стоящему времени данные позволяют без сомнения Тикангрелор, Кангрелор [1, 10]. Эти препараты проявляутверждать, что, используя антитромбоцитарные вме- ют различные механизмы действия, основной точкой шательства при различных проявлениях активации тром- приложения для данных лекарственных средств являбоцитарного звена гемостаза, можно существенно ется стадия необратимой агрегации. Кроме того, эти уменьшить риск развития осложнений [5]. Доступные в препараты обладают рядом недостатков - позднее настоящее время антиагрегантные препараты оказыва- наступление основного терапевтического эффекта, поют влияние на некоторые этапы в процессе активации, вышение риска кровотечений различного генеза, нейт- Выпуск 1 (49). 2014 131 ропения, тромбоцитопения, аллергические реакции развитие резистентности при длительных курсах лечения [9]. Это объясняет актуальность выявления и изучения новых соединений с антиагрегантной активностью. Согласно литературным данным, химический класс производных индола считается перспективным для создания на его основе новых препаратов с антиагрегантной активностью [7, 11]. Поэтому нами был проведен поиск ингибиторов агрегации тромбоцитов среди новых производных индола. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Целю настоящего исследования явилось изучение антиагрегантной активности новых производных индола на модели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов in vitro. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ В данной работе проведено экспериментальное исследование влияния 28 новых производных индола под шифром Sbt [НИИ ФОХ ЮФУ] на процессы агрегации тромбоцитов in vitro. Из них 24 относятся к гидрохлоридам N-[(1-RR1-амино)карбонил-2-(1-R2+1 H-индол- 3-ил)винил]^3-амидам, а 4 соединения - к гидрохлоридам 1^^2-амино-3-(3^2-1 Н-индол-1-л)-2-пропанолам. Эксперименты выполнены на 10 кроликах, весом 3- 3,5 кг, содержащихся в условиях вивария (температура 22-24 °С, относительная влажность воздуха 40- 50 %) с естественным световым режимом на стандартной диете (ГОСТ Р. 50258-92), соблюдая правила качественной лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.3-96 и 1000.4-96), а также правила и Международные рекомендации Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемые при экспериментальных исследованиях (1997). Для исследования была выбрана модель АДФ-ин-дуцированной агрегации тромбоцитов по методу Born G, в модификации Габбасова В.А., воспроизведенная на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов «Биола» 220 LA (Россия) [2]. Исследования выполняли на богатой тромбоцитами плазме кролика, которую получали по методу Люсова В.А. и Белоусова Ю.Б. [3]. В качестве индуктора агрегации использовали аденозин-5-дифосфорную кислоту (АДФ) («Serva», Венгрия), в конечной концентрации 5 мкМ. Соединения и препарат сравнения ацетилсалициловая кислота изучались в концентрации 100 мкМ. Уровень агрегации оценивался по значению степени агрегации, определяемой, как максимальное приращение светопропускания после добавления индуктора. Для оценки активности соединений определяли Д % ингибирования функциональной активности тромбоцитов. Для расчета EC50 (эффективная концентрация, подавляющая процесс агрегации тромбоцитов на 50 %), который проводили с использованием метода регрессионного анализа, вещества изучались в концентрации 100, 10 и 1 мкМ. Исследование токсичности наиболее активных соединений выполнялось в соответствии с требованиями и инструкциями Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития [4]. Острая токсичность определялась на 75 белых нелинейных мышах-самцах массой 20-22 г при внутрибрю-шинном введении. Гибель животных регистрировалась в течение двух недель. Величину токсикологического показателя LD50 рассчитывали по методу Личфилда-Вилкоксона. Статистическая обработка экспериментальных данных проводилась с использованием критерия Манна-Уитни при помощи пакета статистических программ программного обеспечения Microsoft Excell 2006. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В ходе проведенного исследования было установлено, что производные индола в различной степени выраженности оказывают антиагрегантный эффект in vitro. Так, из 28 новых производных индола 11 соединений статистически значимо превосходили ацетилсалициловую кислоту, эффект 13 веществ был сравним с действием препарата сравнения, остальные 5 соединений уступали ему по активности (табл. 1). Вещества под шифрами Sbt-815, Sbt-820, Sbt-130, Sbt-79, Sbt-143 и Sbt-814 блокировали процесс агрегации тромбоцитов более чем на 50 %. Поэтому данные соединения были изучены в диапазоне концентраций от 1 х 10-3 М до 1 х 10-6 М. В результате проведенных исследований все данные соединения оказали дозозависимый антиагрегантный эффект, поэтому для них была рассчитана величина ЭК50. Таблица 1 Влияние новых производных индола двух групп на агрегацию тромбоцитов, индуцируемую АДФ (опыты in vitro) № п/п Шифр соединения Ингибирование агрегации тромбоцитов Д % (М ± m) в концентрации 100 мкМ 1 Sbt-815 92,14 ± 4,23# 2 SBT-820 63,2 ± 3,6# 3 Sbt-79 55,20 ± 2,25# 4 Sbt-130 53,52 ± 1,11 # 5 Sbt-143 52,46 ± 7,15# 6 Sbt-814 51,8 ± 13,1 # 7 SS-33 47,37 ± 6,20# 8 SS-31 47,26 ± 10,50 9 Sbt-708 45,20 ± 2,75# 10 SS-43 44,48 ± 7,90 11 Sbt-26 44,2 ± 2,3# 12 SS-56 42,86 ± 1,80# 13 Sbt-713 42,53 ± 4,84 14 Sbt-46 42,40 ± 0,75# 15 Sbt-68 41,10 ± 2,21 16 Sbt-140 41,05 ± 6,27 132 Выпуск 1 (49). 2014 ©зшірСз [ЩсоШтСІМЩ Окончание таблицы 1 № п/п Шифр соединения Ингибирование агрегации тромбоцитов А % (М ± m) в концентрации 100 мкМ 16 Sbt-140 41,05 ± 6,27 17 SS-46 39,32 ± 8,80 18 Sbt-8 37,97 ± 2,50 19 SS-41 38,90 ± 9,50 20 SS-35 37,14 ± 4,10 21 Sbt-109 30,49 ± 1,02 22 Sbt-178 29,14 ± 3,56 23 Sbt-5 24,25 ± 4,62 24 Sbt-11 21,25 ± 5,24 25 SS-34 18,64 ± 4,00 26 SS-32 11,67 ± 6,20 27 SS-36 10,43 ± 3,10 28 Sbt-25 9,14 ± 6,84 29 Ацетилсали циловая кислота 32,75 ± 1,10* Статистическая достоверность различий по сравнению с исходными показателями: *р < 0,05; #статистическая достоверность по сравнению с препаратом сравнения. Для ацетилсалициловой кислоты этот показатель составил 71 мкМ. Соединение Sbt-815 оказалось наиболее активным и по ЭК^ превосходило препарат сравнения в 47 раз. Остальные 5 соединений по показателям величины ЭК50 были активнее ацетилсалициловой кислоты в 7- 8 раз. Полученные результаты представлены в табл. 2. Как видно из табл. 2, наиболее активными в отношении ингибировании агрегации тромбоцитов оказались соединения Sbt-815 и Sbt-820, поэтому у них была определена острая токсичность и рассчитан терапевтический индекс. Для вещества Sbt-815 острая токсичность составила 200 мг/кг, а для соединения Sbt-820 - 144 мг/кг. Таким образом, по терапевтическому индексу соединение Sbt-815 превосходит ацетилсалициловую кислоту в 13 раз, а Sbt-820 - в 1,7 раза (табл. 3). Далее была изучена зависимость аниагрегант-ной активности новых производных индола от их химической структуры. Так как в целом все изученные вещества ингибировали АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов in vitro и отличались лишь по степени выраженности эффекта, можно предположить, что в антиагрегантную активность данного класса вносит положительное влияние базовая структура, а именно индол. Анализ влияния заместителей на высокий уровень антиагрегантной активности новых производных индола производился для заместителей в положении R1, R2 и R3 В группе веществ, относящихся к гидрохлоридам N-[(1 ^^-амино)карбонил-2-(1 -R2+1 H-индол-3-ил)винил]-R3-амидам, значимый вклад в антиагрегантную активность, по-видимому, вносит диэтиламиноэтильный заместитель в положении R1, а также этильный и метильный радикалы в положении R2. При анализе заместителей в положении R3 четкой зависимости антиарегантной активности от наличия данных радикалов обнаружить не удалось. В отношении соединений группы гидрохлоридов 1-R1R2-амино-3-(3-R2-1H-индол-1-л)-2-пропанолов было Таблица 2 Эффективная концентрация (ЭК50) новых производных индола и ацетилсалициловой кислоты № Шифр соединения Ингибирование агрегации А% (М ± m) ЭК50 (10-5) 10-3 М 10-4 М М О -0 10-6 М 1 Sbt-130 - 53,52 ± 1,11* 41,41 ± 6,27* 24,60 ± 2,18* 8,15 2 Sbt-79 - 55,20 ± 2,25* 20,6 ± 1,1* 7,03 ± 1,99* 8,73 3 Sbt-143 - 52,46 ± 7,15* 23,50 ± 1,85* 11,07 ± 1,15* 9,2 4 Sbt-814 - 51,8 ± 13,1* 33,04 ± 9,80* 15,98 ± 7,15* 9,17 5 Sbt-820 - 63,2 ± 3,6* 37,37 ± 1,55* 41,3 ± 1,1* 8,0 6 Sbt-815 - 92,14 ± 4,23* 52,40 ± 6,49* 44,30 ± 9,45* 1,5 7 Ацетилсалициловая кислота 53,4 ± 4,23* 29,3 ± 3,4* 3,1 ± 1,9 0 71,0 Статистическая достоверность различий по сравнению с исходными показателями *р < 0,05. Таблица 3 Антиагрегантная активность (ЭК50), величина острой суточной токсичности (ЛД50), и терапевтический индекс (ТИ) новых производных индола и ацетилсалициловой кислоты № Шифр ,0 5 Э ЛД50 ТИ соединения 1 х 10-5 М мг/кг ЛД50/ЭК50 1 Sbt-820 8,0 х 10-5 144 4,1 2 SBT-815 1,5 x 10-5 200 31,2 3 Ацетилсалициловая кислота 7,1 х 10-4 310 2,4 Выпуск 1 (49). 2014 133 обнаружено, что значимый вклад в изученный вид активности, возможно, вносят фенилкарбоксиэтиль-ные радикалы в положении R2. При анализе второго радикала R2 четкой зависимости активности от наличия данного радикала обнаружить не удалось. ЗАКЛЮЧЕНИЕ В результате изучения 28 новых производных индола на предмет ингибирования агрегации тромбоцитов in vitro показано, что данный класс является перспективным для изучения данного вида активности. Были найдены высокоактивные соединения под шифрами Sbt-815 и Sbt-820, которые по условному терапевтическому индексу превосходят препарат сравнения ацетилсалициловую кислоту в 13 и 1,7 раза соответственно, что свидетельствует о целесообразности дальнейшего более углубленного фармакологического изучения данных соединений.