FEATURES OF CYTOKINE PROFILE IN PATIENTS WITH ANKYLOSING SPONDYLITIS

详细

The development and progression of ankylosing spondylitis involves many factors, including the pro- and anti-inflammatory cytokines, which have a stimulating effect on tissue destruction and systemic inflammation. In-depth study of IL -1p, IL-8, IL- 17, TNF -a, IL- 10 will help to find new approaches to the early diagnosis and treatment of this disease.

全文:

Анкилозирующий спондилит (АС, болезнь Бехтерева, болезнь Штрюмпеля-Мари-Бехтерева)-хроническое воспалительное заболевание неизвестной этиологии, характеризующееся преимущественным поражением позвоночника (спондилит), крестцово-подвздошных суставов (сакроилеит), во многих случаях периферических суставов (артрит), энтезисов (энтезит), у части больных глаз (увеит), сердца, аорты и других внутренних органов [1]. Распространенность АС в России составляет от 0,2 до 2 % [6]. Актуальность проблемы АС обусловлена высокой распространенностью - в популяции 0,1 %, поздним выявлением, поражением лиц молодого возраста, следствием чего являются: ранняя инвалидизация, падение качества жизни, повышение риска фатальных кардиоваскулярных событий, множественными висцеральными осложнениями. Известно, что при АС выявляются признаки системной воспалительной реакции (СВР), которая характеризуется нарастающей цитокинемией вследствие внутрисосудистой активации нейтрофилов и системы комплемента, коагулопатией по типу ДВС-синдрома, тотального включения в цитокиногенез сосудистых макрофагов и эндотелиоцитов посткапиллярных ве- нул, оксидантным стрессом, генерализованной активацией и дегрануляцией мастоцитов. Данные процессы в совокупности определяют вторичную системную альтерацию [3]. В последние годы изучение цитокинового профиля приобретает все большее значение в рамках поиска новых критериев диагностики и адекватной терапии в ревматологии, однако непротиворечивых и научно обоснованных гипотез, описывающих роль СВР в патогенезе АС, не сформулировано. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Оценить содержание в сыворотке крови провоспалительных цитокинов: интерлейкина-1 р (ИЛ-1р), интерлейкина-8 (ИЛ-8), фактора некроза опухоли-a (ФНО-a), противовоспалительного цитокина интерлейкина-10 (ИЛ-10) и индуктора синтеза основных провоспалительных цитокинов интерлейкина-17 (ИЛ-17) у пациентов с АС в зависимости от клинических особенностей патологии. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование проводилось на базе ревматологического отделения ГУЗГКБСМП № 25 г. Волгограда. Критериям включения соответствовали 69 пациентов, с достоверным диагнозом АС (согласно модифицированным Нью-Йоркским критериям 1984 г.) [7], средний возраст которых составил (39 ± 13,84) лет, среди которых было 55 (80 %) мужчин и 14 (20 %) женщин. Аксиальная форма АС имела место у 38 % больных, периферическая - у 62 % пациентов. В группу контроля были отобраны 20 мужчин, относительно здоровых, средний возраст которых составил (34 ± 7,2) года. Для оценки цитокинового профиля использовали наборы реагентов производства ЗАО «Вектор-Бест» для иммуноферментного определения концентрации цитокинов в сыворотке крови человека: ИЛ-1 р (ИНТЕРЛЕЙКИН-1 бета-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8766, чувствительность: 1 пг/мл, диапазон измерений: 0-250 пг/мл), ИЛ-8 (ИН- ТЕРЛЕЙКИН-8-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8762, чувствительность: 2 пг/мл, диапазон измерений: 0-250 пг/мл), ИЛ-10 (ИНТЕРЛЕЙКИН-10-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8774, чувствительность: 1 пг/мл, диапазон измерений: 0- 500 пг/мл), ИЛ-17 (ИНТЕРЛЕЙКИН-17-ИФА-БЕСТ, кат. № A-8778, чувствительность: 2 пг/мл, диапазон измерений: 0-500 пг/мл), ФНО-a (альфа-ФНО-ИФА-БЕСТ, Таблица 1 Провоспалительные цитокины Предельно допустимые значения, пг/мл ИЛ-1Р 0-11 ИЛ-8 0-10 ИЛ-10 0-20 ИЛ-17 О 1 сл ФНО-а 0-6 кат. № A-8756, чувствительность: 1 пг/мл, диапазон измерений: 0-250 пг/мл). Лабораторные исследования выполняли на многоканальном микропланшетном спектрофотометре «MULTISCAN EX» (Thermo Electron Corporation) при длине волны 450 нм в условиях клинико-диагностической лаборатории ФГБНУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» (г. Волгоград) в соответствии с ведомственными нормативными документами, регламентирующими порядок их проведения. После измерения оптической плотности раствора в лунках планшета на основании соответствующего калибровочного графика рассчитывали концентрацию исследуемого цитокина в анализируемых образцах. Полученные результаты выражали в пг/мл. Статистическая обработка данных проводилась при помощи программного обеспечения STATISTICA 6,0 (StatSoft, USA). Данные представлены в виде средней арифметической (М), среднеквадратического отклонения (ст), 25 и 75 процентилей. Для оценки достоверности различий между группами использовались критерии Стьюдента (t) для независимых групп [5]. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ На основании инструкций по применению к наборам реагентов нами были выделены следующие предельно допустимые значения (ПДЗ) (табл. 1). Полученные нами данные, при сравнении исследуемых цитокинов среди пациентов с АС и группой контроля, представлены в табл. 2. Исследование уровня провоспалительных цитокинов выявило значительное повышение данных показателей у большинства обследуемых пациентов с АС: ИЛ-1 р (у 84 %), ИЛ-8 (у 89,9 %), ФНО-а (у 76,8 %) в сравнении с контролем, что объясняется с позиции системного воспалительного процесса. Наряду с этим, повышения уровня ИЛ-17 в крови больных в сравнении с контрольной группой нами не выявлено, различия в данном случае оказались недостоверными. Противовоспалительный цитокин ИЛ-10 был обнаружен в повышенных концентрациях у 28 % пациентов с АС, что можно объяснить ответом клеточного иммунитета на избыточный синтез провоспалительных цитокинов, у группы контроля данный показатель не превышал ПДЗ (табл. 3). Предельно допустимые значения исследуемых показателей Все пациенты с АС были рандомизированы по длительности заболевания на 2 группы: группа 1 - длительность заболевания менее 5 лет и группа 2 - длительность заболевания более 5 лет. Таблица 3 Показатель Группа 1 (АС < 5 лет, п = 39) Г руппа 2 (АС > 5 лет, п = 30) ИЛ-1Р 64,33 ± 38,90 [17, 23; 95, 81] 41,23 ± 23,24 [10, 40; 62, 21] ИЛ-8 76,69 ± 26,94 [19, 37; 82, 74] 48,12 ± 21,67 [10, 23, 50; 74, 45] ФНО-а 82,10 ± 36,25 [14, 63; 84, 76] 51,76 ± 28,67 [11, 87; 69, 20] ИЛ-17 1,58 ± 0,56 [0, 64; 1, 82] 1.46 ± 0,94 [0, 74 1, 98] ИЛ-10 15,56 ± 10,24 [4, 54; 18, 2] 31,22 ± 14,87 [10, 23; 34, 54] Сравнение уровней провоспалительных цитокинов у пациентов с разной продолжительностью анкилозирующего спондилита, пг/мл Таблица 2 Сравнение уровней цитокинов у пациентов с АС и группы контроля, пг/мл Показатель Г руппы P t анкилозирующий спондилит (л = 69) контроль (л = 20) ИЛ-1Р 49,46 ± 56,76 [11, 89; 74, 29] 3,44 ± 1,87 [1, 08; 4, 86] 0,0006 3,6088 ИЛ-8 55,48 ± 80,60 [11, 32; 55, 23] 4,21 ± 2,18 [3; 6, 18] 0,006 2,832 ФНО-а 60,67 ± 67,85 [13, 56; 68, 81] 3,45 ± 0,78 [2, 80; 4, 21] 0,0003 3,8438 ИЛ-17 1,32 ± 0,81 [0, 81; 1, 98] 1,54 ± 0,77 [0, 99; 2, 02] 0,307 -1,029 ИЛ-10 18,32 ± 17,93 [4, 54; 23, 814] 4,10 ± 2,28 [2, 75; 5, 76] 0,0008 3,518 Следует отметить более высокую концентрацию провоспалительных цитокинов ИЛ-1р, ИЛ-8, ФНО-а у пациентов с течением заболевания менее 5 лет. Для всех сравниваемых групп кроме ИЛ-17 различия были достоверны р < 0,05). Известно, что ИЛ-1р и ФНО-а обладают свойствами инициировать воспаление и разрушение костной и хрящевой ткани [2]. ИЛ-8 наряду с другими цитокинами участвует в процессах стимуляции и дегрануляции лейкоцитов, неоангиогенезе, способствует миграции фагоцитов в очаг воспаления и вызывает синтез молекул адгезии. Вероятно, в группе 1 данные процессы не у всех пациентов и не полностью затронуты терапией нестероидными противовоспалительными средствами (НПВС) и, тем более, генно-инженерными биологическими препаратами (ГИБП), в отличие от пациентов группы 2, которые находятся под наблюдением врача и получают рациональную терапию более длительное время. Стоит также отметить значение противовоспалительных цитокинов: ИЛ-10 обладает мощным противовоспалительным и иммуномодулирующим, иммуносупрессивным эффектом, основным действием которого является ингибирование синтеза провоспалительных цитокинов, в том числе ИЛ-1 р, ФНО-а, ИЛ-8, что объясняет более высокие средние значения ИЛ-10 пациентов в группе 2. ИЛ-17 открыт относительно недавно и опосредует сигнализацию посредством особого пути, связанного с активацией Act1 (также известной как CIKS - Connection to IKK and SAPK/JNK), регулирующей продукцию иммунных медиаторов, ассоциирующихся с врожденным иммунитетом: ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-а и ИЛ-8 [4]. Непосредственно в нашем исследовании ИЛ-17 не выявлялся в значительно повышенных концентрациях, хотя в современной ревматологии в последнее время ему придается достаточно высокое значение и, несомненно, он требует дальнейшего изучения у данной группы пациентов. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Проведенное нами исследование выявило достоверное повышение провоспалительных цитокинов ИЛ-1р, ФНО-а, ИЛ-8 и противовоспалительного ИЛ-10 в сравнении с группой относительно здоровых лиц. Также в ходе исследования установлена прямая взаимосвязь между продолжительностью заболевания и содержанием исследуемых биомаркеров. ЛИТЕРАТУРА