MICROBIOLOGICAL AND HISTOLOGICAL PICTURE IN LOCAL CRYO IMPACT ON A SUPPURATING WOUND

Full Text

В настоящее время сохраняется значимость гнойных заболевания мягких тканей (ГЗМТ) как важной и трендовой темы для научного дискурса и изучения [1]. Специфичной чертой ГЗМТ является непрерывная диверсификация и вариабельность антибио-тикорезистентности возбудителей [2], из-за чего весьма востребовано развитие неконвенциональных подходов к лечению [3]. Чрезвычайно многообещающими в настоящее время признаются способы обработки с включением физических компонентов воздействия на гнойный раневой процесс. Перспективным, но до сих пор не достаточно глубоко изученным является метод локального криовоздействия (ЛК). У указанного варианта дебридмента есть несколько важных положительных качеств: низкий порог освоения [4], значительный антисептический потенциал, отсутствие развития устойчивых микроорганизмов [5], отсутствие выраженного общесистемного влияния на организм [6]. Тем не менее точные механизмы, детальные патологоанатомические изменения на тканевом уровне при применении дебридмента гнойной и заживающей раны с точечным использованием ЛК в недостаточной степени отслежены и проработаны [7], в связи с чем затруднена имплементация и исследование ЛК в рамках клинической практической деятельности [8]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Экспериментальное исследование микробиологической и гистологической картины при использовании сверхнизких температур в дебридменте гнойного процесса мягких тканей. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Исследовательская деятельность осуществлялась с учетом требований ГОСТ Р 53434-2009 г., дизайн исследования одобрен решением № 11-2015 Этического комитета Волгоградского государственного медицинского университета. Для создания модели гнойной раны использовано 40 самцов крыс Wistar-Kyoto возрастной категории 10-11 месяцев, весовой категории 180-198 г. Была произведена разбивка животных на 2 равные группы. Внутримышечно вводился медетомидин гидрохлорид, дозировка 0,25 мг. Выполнялось иссечение округлого участка диаметром 1,9 см, площадью (3,1 ± 0,3) см2. Потеря крови при манипуляции не более 0,6 мл. Время выполнения манипуляции не превышало 5-минутный интервал. В основание раны выполнялась инъекция 2,0 мл взвеси Staphylococcus aureus, культивированных на агаре Фогеля - Джонсона, в концентрации 1,2 * 109 Log10 КОЕ/мл, с контролем при помощи мутнометра Den-1B, компания Biosan, Латвия. Через 2 дня с момента выполнения манипуляций у крыс фиксирован развернутый гнойно-воспалительный процесс в созданной ране. Раны у животных контрольной группы заживали без дополнительных вмешательств извне. В основной группе ежесуточно, один раз в день, производили дебридмент раны парово-капельной струей, создаваемой из 40 мл жидкого азота криоаппаратом CryoPro, компания Cortex Technology, Дания, дистанция до раневой поверхности 35 мм, продолжительность 6 с. Дебридмент выполнялся в течение первой (экссудативной) фазы процесса заживления раны и прекращался при купировании симптомов гнойного воспаления. Для микробиологического исследования на 3-и и 5-е сутки выполнялось взятие мазков раневого отделяемого со стенок ран стерильным марлевым тампоном. Производились количественное определение бактериальной обремененности титрационным методом посева смывов раневого отделяемого на агар Байрд -Паркера с подсчетом числа образуемых колоний. Для гистологического исследования, через 5 часов после специфического воздействия на рану, производилась щипковая биопсия (под описанным выше наркозом) на 5, 9-е и 13-е сутки от начала эксперимента. В 1-й фазе материал брали со дна раны, во 2-й и 3-й фазе - с края раны. Выполняли фиксацию препаратов в забуференном по Лилли 10%-м растворе формалина с добавление 2%-го фенола. Затем препараты были обработаны парафином и выполнялись срезы толщиной 5 мкм, окрашиваемые в дальнейшем гематоксилин-эозином. Гистологическое исследование осуществлялось с использованием микроскопа Levenhuk D400 LCD, Levenhuk, Inc. (США). Проверка на отличное от нормального распределение проводилась по критерию Лиллиефорса. Для заданного уровня a = 0,05 отличий от распределения Гаусса - Лапласа, имеющих статистическую значимость, не зафиксировано. В исследовании задействованы методы дескриптивной статистики: выполнен подсчет выборочного среднего (М) и стандартной ошибки средней арифметической величины (m). Анализ полученных данных осуществлялся по методике ANOVA, проводился в программе Microsoft Exel, компания Microsoft, США. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Полученные данные по динамике высевания бакте-р и ал ь ной микрофлоры из раневого отделяемого в исследованных группах животных представлены в таблице. Динамика изменения бактериальной обсемененности раневого отделяемого День от начала эксперимента Контрольная группа (п = 20),КОЕ/мл* log10 Группа с КВ (п = 20), КОЕ/мл* log10 Уровень значимости (Р) 3-и сутки 106,80 ± 0,66 103,40 ± 0,68 ^абл. = 6,06 (0,05; 1; 38) = 4,08 ^абл. > ^рит. P < 0,05 5-е сутки 103,50 ± 0,73 101,20 ± 0,68 ^абл. = 7,6 (0,05; 1; 38) = 4,08 ^абл. > ^рит. P < 0,05 К 3-м суткам в группе контрольная у 80 % животных отмечается высевание патогенной микрофлоры, что является наибольшим показателем среди прочих групп. В группе с левомеколем рост микрофлоры отмечается у 60 % животных, в группе с криовоздействием - у 40 %, в группе с комбинированной обработкой микрофлора давала рост лишь у 20 % животных. На 5-е сутки у всех животных с обработкой криовоздействием роста патогенной микрофлоры не отмечалось. На 5-е сутки в контрольной группе в биоптате из раны наблюдалось большое количество тканевого детрита, под которым определялись скопления из сегментоядерных и палочкоядерных нейтрофилов, диапедез-ные геморрагические участки. Сосуды микроциркуляции дилатированы с множеством микротромбов. В группе с КВ наблюдалась похожая картина, детрит, фибринно-лейкоцитарные массы. Лейкоцитарная инфильтрация нейтрофилами с единичными макрофагами и фибробластами (грануляционные процессы) (рис. 1). На 9-е сутки в контрольной группе в препаратах детрит фибринно-лейкоцитарные массы. Лейкоцитарная инфильтрация представлена макрофагами. Вокруг сосудов определялись очаговые лимфоплаз-моцитарные инфильтраты и в незначительном количестве единичные поверхностные сосудистые петли и вертикальные сосуды. В группе с КВ определялся созревающий слой с пучками горизонтально расположенных фибро -бластов. Наблюдались молодые эпителиальные клетки с базофильной цитоплазмой и разрастание васкуляризированной рыхловолокнистой соединительной ткани в краях раны (процессы эпителиза-ции) (рис. 2). На 13-е сутки в контрольной группе визуализировались хорошо выраженные поверхностные сосудистые петли и вертикальные сосуды. Клеточная инфильтрация макрофагами и фибробластами. По краям раны наблюдались молодые эпителиальные клетки с базофильной цитоплазмой и разрастание васкуляризированной рыхловолокнистой соединительной ткани в краях раны. В группе с КВ в биоптате определялись пучки горизонтально расположенных фибробластов, васкуляризированная рыхлая волокнистая соединительная ткань, при этом в группе с КВ+МЛ уже определялся грубоволокнистый коллаген дермы (процессы рубцевания) (рис. 3). ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ходе исследования выявлено, что дебридмент гнойной раны с использованием локального криовоздействия способствует быстрой элиминации возбудителей в раневой зоне, значительно интенсифицирует грануляционные и эпителизационные процессы. Подтверждена безопасность применения криовоздействия. Зафиксированные морфологические и гистологические изменения подтверждают целесообразность расширенного клинического изучения возможностей криовоздействия по ускорению и улучшению результатов лечения гнойных заболеваний мягких тканей.

About the authors

Sergey S. Maskin

Volgograd State Medical University

Email: maskin@bk.ru
Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Department of Hospital Surgery Volgograd, Russia

Alexander V. Pavlov

Volgograd State Medical University

Email: necronimus@yandex.ru
Candidate of Medical Sciences, assistant of the Department Hospital Surgery Volgograd, Russia

Lyubov A. Igolkina

Volgograd State Medical University

Email: igolkinal@mail.ru
Candidate of Medical Sciences, assistant of the Department Hospital Surgery Volgograd, Russia

References

Supplementary files