OZONOTHERAPY AS A FACTOR HAVING AN IMPACT ON THE RESULTS OF CELL THERAPY OF EXPERIMENTAL LIVER CIRRHOSIS

Full Text

Введение По данным ВОЗ в последние десятилетия в мире отмечается рост заболеваемости и смертности вследствие хронических диффузных заболеваний печени, в том числе цирроза печени. При декомпенсированном циррозе печени, до недавнего времени, терапия была симптоматической. Ортотопическая трансплантация печени теперь предлагается, как операция выбора при терминальной стадии цирроза печени [1, 2]. Однако дефицит донорских органов не позволяет этому методу решить проблему лечения пациентов с терминальными стадиями заболеваний печени [3]. Поэтому поиск альтернативных методов лечения хронических диффузных заболеваний печени в поздних стадиях остается актуальной проблемой. Клеточная терапия, активно используемая в последние годы при многих заболеваниях [4], стала одним из таких методов. Ряд экспериментальных исследований продемонстрировали улучшение лабораторной и гистологической картины при использовании стволовых клеток в лечении хронических заболеваний печени. В частности, мы в своих экспериментальных исследованиях показали, что трансплантация аутологичных мезенхимальных стволовых клеток обладает положительным терапевтическим эффектом при экспериментальном циррозе печени у кроликов [5, 6, 7]. Однако неоднозначные результаты экспериментального и клинического применения стволовых клеток в гепатологии привели к необходимости поиска способов, которые могли бы улучшить результаты клеточной терапии цирроза печени. В некоторых исследованиях была доказана роль оксидативного стресса и снижения активности анти-оксидантной системы в патогенезе цирроза печени [8, 9]. Поэтому оправданным может являться назначение антиоксидантов для коррекции прооксидантного и антиоксидантного дисбаланса. В качестве антиоксиданта нами выбран медицинский озон. Цель исследования: оценить влияние озонотера-пии на результаты клеточной терапии цирроза печени в эксперименте Материал и методы Для выполнения целей нашей работы использовались белые крысы самцы линии Вистар (n=45). Экспериментальные исследования проводились согласно «Положению о порядке использования лабораторных животных в научно-исследовательских работах и педагогическом процессе Гомельского государственного медицинского университета и мерах по реализации требований биомедицинской этики», утвержденным Ученым Советом ГомГМУ №54-А от 23.05.2002 года, и требованиями, регламентирующими работу с экспериментальными животными. Для развития цирроза печени у крыс использовали предложенную нами токсико-алиментарную модель цирроза печени. Суть модели заключается во внутри-брюшинном введении крысам в течение 8 недель 50% раствора CCl4 (тетрахлорметана) на оливковом масле из расчета 0,5 мл на кг массы тела два раза в неделю и раствора тиоацетамида из расчета 100 мг/кг один раз в неделю. Кроме того ежесуточно с кормом животным вводят 5 г топленого свиного сала, а также добавляют к питьевой воде 5% раствора этилового спирта. На данную модель получен положительный результат предварительной экспертизы по заявке на выдачу патента на изобретение Республики Беларусь №а20160406 от 20.11.2016. После развития цирроза печени токсическое воздействие прекращали одновременно всем животным и 92 Диссертационная орбита Вестник восстановительной медицины № 1^2018 разделяли их на 3 группы. В группу 1 входили крысы с циррозом печени (n=15), которым не проводили никаких терапевтических воздействий (контрольная группа). В группу 2 входили крысы с циррозом (n=15), которым после окончания «затравки» проводили однократную внутрипортальную трансплантацию взвеси аутологичных МСК. И наконец, в группу 3 вошли крысы с циррозом (n=15), которым после окончания «затравки» в течение 5 дней проводили курс озонотерапии, а на следующий день после последнего сеанса озонотерапии также осуществляли однократное внутрипортальное введение суспензии аутологичных МСК. Озонотерапия проводилась путем внутрибрюшин-ного введения стерильного озонированного физиологического раствора (0,9% раствор натрия хлорида, ОФР). ОФР получали путем барботирования стерильного физиологического раствора озонокислородной смесью на медицинской озонотерапевтической установке УОТА-60-01 «Медозон» (ООО «фирма МЕДОЗОН», Россия). В нашем исследовании использовался ОФР в концентрации 5 мг/л. Вводили ОФР из расчета 5 мкг озона на кг массы тела животного. Озонотерапию проводили курсом из 5 процедур, которые выполняли ежедневно в одно и то же время. Для большей объективности эксперимента крысам групп 1 и 2 провели 5 процедур введения неозонированного физиологического раствора в том же количестве. Для клеточной терапии мы применяли аутологичные мезенхимальные стволовые клетки жировой ткани (МСК). Источником аутологичных МСК являлся участок жировой ткани паховой области крысы, забор которого проводили у каждой крысы под масочным наркозом до начала моделирования цирроза печени. Выделение и культивирование МСК из жировой ткани проводили по стандартной методике протокола. Трансплантация аутологичных МСК проводили путем инъекции в воротную вену крысы после предварительной верхней срединной лапаротомии и визуализа ции воротной вены. Количество введенных клеток составило 5х106 на килограмм массы тела крысы. Животные разных групп выводили из эксперимента в одинаковые сроки: в день окончания моделирования цирроза печени (по 5 животных из каждой группы), через 30 дней после введения МСК (по 5 животных из каждой группы) и 90 дней после введения МСК (оставшиеся животные всех групп). Также в день окончания моделирования из эксперимента были выведены 5 здоровых крыс для определения «нормальных» гистологических и лабораторных показателей. После выведения животных из эксперимента изучали общую морфологическую и морфометрическую картину печени. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином. Морфометрическое исследование гистологических препаратов проводили на микроскопе Nikon eclipse 50i с использованием пакета морфометрических программ ImageJ (NIH, США). Оценивалась толщина соединительнотканных септ, выраженность дистрофических изменений.

About the authors

B. B Osipov

UO "Gomelskij Gosudarstvennyi Medicinskij Universitet"

Email: b_osipov_jr@mail.ru
Gomel, Belarus

References

Supplementary files