A NEW AYAFROL PHYTOPREPARATION BIOACCESSIBILITY STUDY

Full Text

Учитывая современный подход к лечению ран, перспективно создание лекарственных препаратов на основе биологически активных компонентов растений, которые имеют ряд преимуществ: обладают высокой биологической и фармакологической активностью, многонаправленностью действия и возможностью применения соответственно фазам раневого процесса, при этом отсутствуют побочные реакции и токсичность [5, 6]. При использовании препаратов на мазевой основе с низкой абсорбционной характеристикой достигается высокая концентрация вещества на поверхности ран, что позволяет в сочетании с высокой эффективностью, нивелировать побочные эффекты, связанные с проникновением компонентов в системный кровоток [6]. В АО «Международный научно-производственный холдинг «Фитохимия» (Республика Казахстан) разработан новый фитопрепарат «Аяфрол, мазь 3%» на основе эфирного масла Ajania fruticulosa (Ledeb.) Poljak (аяния кустарничковая) для местного лечения ран [3, 4]. Эфирное масло из травы аянии кустарничковой представляет собой темно-синюю жидкость с приятным запахом, обладающее высокой ранозаживляющей, противовоспалительной и антибактериальной активностью. Также выявлена противовирусная и интерферон-индуцирующая активность эфирного масла аянии кустарничковой и установлено, что эфирное масло аянии кустарничковой при исследовании на цитотоксичность в разведениях ½ и ¼ проявляет выраженный эффект. В результате испытаний на антимикробную активность образцов эфирного масла установлено, что они обладают умеренно-выраженным антибактериальным действием, при этом не отмечается зависимости в проявлении антимикробного действия от вида культуры и времени сбора. В составе эфирного масла обнаружены α-туйон, 1,8-цинеол, камфора, камфен, α-пинен, β-мирцен, хамазулен [1], а также новое соединение 2,12'-бис-хамазуленил, являющееся димером хамазулена [2]. При химическом изучении данного сырья выделены новый сесквитерпеновый лактон гермакранового типа аянолид А, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, сесквитерпеновые лактоны. Нами разработана технология мази на основе эфирного масла аянии кустарничковой и определен оптимальный состав на гидрофильной основе, состоящий из смеси ПЭО-400 и ПЭО-1500 с содержанием эфирного масла 3%. Целью данного исследования явилось изучение фармакокинетики хамазулена (ХН) - основного компонента эфирного масла аянии кустарничковой, после местного применения мази «Аяфрол». Эксперимент проводился на 40 половозрелых крысах одинакового возраста, размера, массы тела по 5 животных в 8 группах. Каждая группа соответствовала определенному времени экспозиции мази на раневой поверхности животного. Перед началом эксперимента каждой крысе был дан эфирный наркоз в индукционной камере, (объем 3 литра, 3 мл эфира, время экспозиции 5 мин), после чего производилось моделирование раны - по пластиковому шаблону скальпелем вырезался участок кожи размером 20х30мм до глубины мышечного слоя. Навеску мази, массой 5 г равномерно наносили градуированным шпателем тонким слоем, толщиной 1 мм, в виде аппликаций по всей поверхности раневого дефекта. Через 0,5 ч,1 ч, 2 ч, 4 ч,6 ч, 12 ч и 24 ч после легкого эфирного наркоза производился забор крови у животных путем внутрисердечной пункции. Для отделения сыворотки кровь центрифугировалась на центрифуге ELMICM70M.07 15 мин при 1000 об/мин. В качестве контроля использовали сыворотку крови интактных животных. Количественное определение ХН в сыворотке осуществляли на системе для высокоэффективной жидкостной хроматографии фирмы «Agilent 1260 Infinity». Разделение в градиентном режиме осуществлялось на колонке Polaris C18-A 100 × 2,0 мм, 63 Фармация и фармакология. № 6 (7), 2014 3 мкм (Agilent Technologies). Подвижная фаза состояла из А: 10 мM водного раствора фосфорной кислоты (Phosphoric acid solution 50% for HPLC, Fluka®) и В: ацетонитрила (Acetonitrile LC-MS Ultra CHROMASOLV®, tested for UHPLC-MS, Fluka®). Методика основана на одиночной жидко-жидкостной экстракции вещества, с использованием вещества хамазулен (99%, АО «МНПХ «Фитохимия») в качестве внешнего аналитического стандарта. При разработке методики использовали рекомендации, изложенные в [7]. Разделение было достигнуто на обращенно-фазовой колонке типа C 18 (неподвижная фаза) с использованием смеси ацетонитрил/водный раствор фосфорной кислоты (4:6) в качестве подвижной фазы. Элюент отображен при 286 нм. Калибровочные кривые были линейными в диапазоне концентраций 0,2-20 мкг/мл. Результаты определения содержания ХН в сыворотке крови экспериментальных животных после аппликации фитопрепарата «Аяфрол,мазь 3%» на рану площадью 6,0 см2 представлены на рисунке 1. мкг/мл 0,025 0,020 0,0182 0,015 0,0152 0,010 0,0116 0,0076 0,0086 0,005 0,0046 0,000 0,0012 30 мин 1 час 2 часа 4 часа 6 часов 12 часов 24 часа Экспозиция Рисунок 1 - Динамика концентрации хамазулена в сыворотке крови после местного воздействия мази «Аяфрол» в течение 24 часов экспозиции Статистически значимое повышение уровня лекарственного вещества в крови и максимальное его содержание обнаруживается через 4 часа, среднее значение - 0,0182 мкг/мл (ДИ=0,0052; d=0,00593; a=0,05). Через 6 и 12 часов концентрация ХН статистически значимо снижается до 0,0116 мкг/мл (ДИ=0,00159; d=0,00182; a=0,05) и 0,0086 мкг/мл (ДИ=0,00182; d=0,00207; a=0,05) соответственно, а к 24 часам достигает базового уровня, составляющего 0,0046 мкг/мл (ДИ=0,00159; d=0,00182; a=0,05). Выводы 1. 1.При местном применении фитопрепарата «Аяфрол, мазь 3%» на поверхности ран экспериментальных животных в системном кровотоке концентрация компонентов не превышает 0,025 мкг/мл, кумуляции их в системном кровотоке при 24 часовой экспозиции не происходит. 2. Компоненты мази с эфирным маслом аянии кустарничковой предназначены для местного воздействия на раневой процесс, непосредственно в месте контакта с раневой поверхностью.

About the authors

S. M Adekenov

“Fitohimiya” International scientific and manufacturing holding, Karaganda, Kazakhstan

E. M Turgunov

Karaganda State Medical University, Karaganda, Kazakhstan

Email: turgunov@kgmu.kz

G. A Atazhanova

“Fitohimiya” International scientific and manufacturing holding, Karaganda, Kazakhstan

I. S Azizov

Karaganda State Medical University, Karaganda, Kazakhstan

Email: azizov@kgmu.kz

V. S Tritek

Life Sciences Center, Nazarbaev University, Astana, Kazakhstan

Email: tritek.v@yandex.kz

R. M Badyrov

Karaganda State Medical University, Karaganda, Kazakhstan

Email: badyrov_ruslan@bk.ru

References