ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРЕДПОСЫЛКИ К ИММУНОФАРМАКОТЕРАПИИ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

Аннотация

Изучены гуморальные и клеточные факторы естественной резистентности в различных кровеносных сосудах при экспериментальном CCl 4-гепатите. Выявлено резкое снижение всех факторов с преобладанием супрессии клеточного звена в печеночных венах и постепенным значимым повышением лизоцима к 14 суткам, что предполагает использование в постдезинтоксикационном периоде соответствующих иммунопротекторов.

Полный текст

В фармакотерапии токсического гепатита, вызванного действием химических токсических веществ, алкоголем, а также вирусами, приоритетны дезинтоксикационные мероприятия и гепатотропные средства. В то же время печень играет немаловажную роль в естественном иммунитете [3], в силу чего крайне важно знать, как изменяются его гуморальные и клеточные факторы при токсическом гепатите и возможно ли восстановление иммунных функций организма при пораженной печени. Работа выполнена на 121 белых половозрелых крысах (самках) массой 180-230 г. Все подопытные животные были разделены на 4 серии опытов: 1 серия - здоровые (интактные) животные; 2 серия - животные, исследованные на 3 сутки после введения CCl4; 3 серия - животные на 7 сутки после отмены гепатотоксина; 4 серия - животные на 14 сутки после отмены гепатотоксина. Хронический гепатит воспроизводили по методике Д.С. Саркисова и Л.С. Рубецкого путем подкожного введения 50% раствора тетрахлорметана (CCl4) на оливковом масле из расчета 0,1 мл/100 мг массы тела. Гепатотоксин вводили через день в течение 65 суток. После 6 и 13 инъекции делали двухнедельные перерывы. Забор крови из 3-х кровеносных сосудов проводили по методике П.Н. Савилова in situ [2] микрохирургическим способом в последовательности: междолевой печеночный 80 Фармация и фармакология. № 6 (7), 2014 синус, портальная вена, аорта стерильными гепаринизированными шприцами по принципу «один сосуд - один шприц». Общую комплементарную активность (ОКА) определяли спектрофотометрически по степени гемолиза сенсибилизированных эритроцитов барана. Активность лизоцима и β-лизинов в сыворотке крови определяли чашечным способом с использованием в качестве тест-микроба культуры Micrococcus lisodeiticus и Bacillus subtilis соответственно [1]. Фагоцитарную активность нейтрофилов из крови трех сосудов исследовали к Staphylococcus aureus 209 и Escherichia coli coli К-12. Определяли фагоцитарное число (ФЧ) как процент клеток, поглотивших исследуемый тест-микроб, рассчитанный на 100 клеток, и фагоцитарный индекс (ФИ) - среднее число микробов, поглощаемых одной клеткой, при подсчете 100 клеток. Данные обработаны с учетом критерия Стьюдента. Комплементарная активность сыворотки крови здоровых животных в различных кровеносных сосудах существенно не различалась (p>0,05), в то время как активность лизоцима была достоверно выше в крови печеночных вен, а активность β-лизинов - в портальной крови (p<0,05) в сравнении с данными других сосудов, что косвенно указывает на иммунную защищенность печени. Токсический CCl4-гепатит привел к достоверному снижению всех гуморальных показателей во всех трех сосудах (p<0,05) по сравнению с нормой (рис. 1). Так, на 3 сутки ССl4-гепатита достоверно (p<0,05) снижалась активность комплемента и β-лизинов в артериальной крови, в портальной - наблюдалось снижение активности всех трех показателей, а в крови печеночных вен достоверно снижалась только активность β-лизинов. К 7-м суткам во всех трех сосудах проявилась лишь тенденция к восстановлению активности лизоцима (p>0,05), однако, к 14 суткам эта тенденция наметилась к β-лизинам, а к лизоциму в печеночных венах увеличилась значимо (р<0,05), что предполагает его раннее иммуновосстановление. ОКА 25 3 20 2,5 15 2 10 1,5 1 5 0,5 0 0 лизоцим β-лизины 2,5 2 1,5 арт. 1 порт. 0,5 печ. 0 Рисунок 1 - Гуморальные факторы сыворотки крови у здоровых животных и у животных с хроническим CCl4-гепатитом Показатели фагоцитоза у интактных крыс в крови печеночных вен были выше, чем в артериальной и портальной, тогда как интенсивность поглощения ими исследуемых микроорганизмов (р>0,05) не изменялась (рис. 2). 81 Фармация и фармакология. № 6 (7), 2014 ФЧ ФИ 80 6 60 4 40 20 2 0 0 St. aureus 209 арт. порт. печ. ФЧ ФИ 60 6 40 4 E. coli К-12 арт. 20 2 порт. 0 0 печ. Рисунок 2 - Клеточные факторы крови разных сосудов у здоровых животных и у животных с хроническим CCl4-гепатитом Клеточные факторы после ССl4-гепатита уже в ранние сроки были существенно снижены (p<0,05) к обоим исследуемым штаммам во всех трех сосудах без последующего восстановления. Напротив, происходило дальнейшее падение к 7 суткам ФЧ к St. aureus в портальной крови и крови печеночных вен, а ФИ в крови всех трех сосудов; к E. coli снижались и ФЧ, и ФИ в крови всех трех сосудов (р<0,05). По сравнению с артериальной кровью и ФЧ, и ФИ в крови печеночных вен были значимо ниже к St. aureus на 3-и и 7-е сутки; а к E. coli - с первых суток развития гепатита, что косвенно подтверждало глубокое морфофункциональное поражение печени, т.к. и к 14 суткам эти показатели не восстанавливались. Выводы 1. При резком угнетении гуморальных факторов естественной резистентности, вызванном ССl4-гепатитом, к 14 суткам существенно (р<0,05) повышался уровень лизоцима в печеночных венах. 2. Активность и интенсивность фагоцитоза клеток крови 3-х сосудов значимо снижались и не восстанавливались к 14 суткам. 3. Снижение естественной резистентности при ССl4-гепатите предполагает использование соответствующих иммунопротекторов в постдезинтоксикационном периоде.