METHODS ELABORATION ON DETECTION OF SOME ATYPICAL NEUROLYTIC AGENTS FOR CHEMICAL AND TOXICOLOGICAL ANALYSIS

Full Text

В настоящее время для лечения шизофрении применяются атипичные нейролептики, к которым в настоящее время относят клозапин, оланзапин, рисперидон, зипразидон, арипипразол и некоторые другие [3, 4]. Атипичные нейролептики за рубежом в значительной степени заменили традиционные препараты в качестве первой линии терапии при лечении шизофрении, несмотря на их высокую стоимость. Дозы препаратов подбираются индивидуально. При переходе с терапии типичным антипсихотиком на атипичный обычно проводят постепенную отмену старых препаратов с «наложением» по времени новой терапии. Однако, с другой стороны, и это отмечается многими авторами, в клинической практике порог доз, за которым могут развиться двигательные расстройства, минимален, т.е. повышение дозы на 1-2 мг выше терапевтической уже может вызвать развитие патологии [1]. Возможные комбинации атипичных нейролептиков можно условно разбить на три основные категории: - комбинации атипичных нейролептиков между собой; - сочетанное применение одного из атипичных антипсихотиков (кроме клозапина) с типичным нейролептиком; - комбинации некоторых атипичных нейролептиков с транквилизаторами. Для диагностики отравлений клозапином, рисперидоном, сертиндолом, оланзапином, арипипразолом необходимо разработать методики их обнаружения. Целью настоящего исследования явилась разработка методик обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола с использованием методов ТСХ, ВЭЖХ и УФ спектрофотометрии. В работе использовались таблетки «Клоназепам» производства «Polfa Tarchomin S.A.», содержащие 2 мг клозапина, таблетки «Рисполепт» производства «Янсен Фармацевтика Н.В.» (Италия), содержащие 2 мг рисперидона; «Зипрекса таблетки диспергируемые» 5 мг производства «Каталент Ю.К. Свиндон Зидис Лтд.» (Великобритания); таблетки «Сердолект», содержащие 4 мг сертиндола производства «Х. Лундбек АО, Копенгаген» (Дания); «Абилифай таблетки 15 мг» производства «Бристол-Майерс» (США). Для проведения исследований методом ТСХ использовались готовые пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-В-УФ. Для исследований готовились хлороформные растворы клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола, галоперидола, оксазепама, карбамазепина в 55 Фармация и фармакология. № 6 (7), 2014 концентрации 0,1 мг/мл. На линию старта хроматографической пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-В-УФ наносили по 20 мкл исследуемых растворов с помощью микрошприца. Пластину с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 10 минут, затем помещали в камеру с системой растворителей, предварительно насыщенную их парами в течение 30 минут и хроматографировали восходящим способом. После прохождения фронта растворителей 10 см пластину вынимали и сушили на воздухе в течение 15 мин. Детекцию пятен проводили с помощью УФ света при длине волны 254 нм. Значения величин Rf явились средним результатом трех параллельных определений. Нами использовались общие и частные системы растворителей [2]. Полученные данные представлены в таблице 1. Таблица 1 - Значение Rf клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола, галоперидола, оксазепама, карбамазепина в общих системах растворителей Название Значение Rf в системе растворителей вещества этанолтолуолдиоксанэтилацетатбензолэтанол- вода-25% ацетонхлороформхлороформэтанол- 25% раствор этанол-25% ацетон-25% 25% раствор 25% раствор аммиака раствор раствор аммиака раствор аммиака (8:1:1) аммиака аммиака (85:10:5) аммиака (100:1,5) (45:45:7,5:2,5) (47,5:45:5:2,5) (50:10:0,5) Клозапин 0,60 0,60 0,75 0,53 0,51 0,67 Рисперидон 0,67 0,89 0,84 0,64 0,56 0,60 Сертиндол - 0,79 - 0,35 0,55 0,68 Оланзапин 0,88 0,63 0,7 0,76 0,55 0,67 Арипипразол 0,82 0,86 - 0,69 0,73 0,78 Галоперидол 0,69 0,57 0,89 0,85 0,66 0,69 Оксазепам 0,85 0,57 0,69 0,81 0,87 0,74 Карбамазепин 0,78 0,67 0,82 0,59 0,68 0,70 Как следует из представленных данных, для предварительного исследования изучаемых атипичных нейролептиков в комбинации с типичными нейролептиками и транквилизаторами при ненаправленном анализе можно использовать системы растворителей: этанол - вода - 25% раствор аммиака (8:1:1), толуол - ацетон - этанол - 25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5), диоксан - хлороформ - ацетон - 25% раствор аммиака (47,5:45:5:2,5). Как видно из представленных данных в системе этилацетат - хлороформ - 25% раствор аммиака (85:10:5) идет наиболее четкое разделение рисперидона, сертиндола, оланзапина, галоперидола. Систему бензол - этанол - 25% раствор аммиака (50:10:0,5) можно использовать для разделения клозапина, сертиндола, оланзапина. Систему этанол - 25% раствор аммиака (100:1,5) целесообразно использовать для хроматографической очистки, так как пятна изучаемых веществ располагаются в средней хроматографической зоне, что позволяет отделить вещества от соэкстрактивных веществ в извлечениях из биологических объектов. Чувствительность определяли с использованием УФ света, реактива Драгендорфа и паров йода. Нами рекомендуется проводить детектирование изучаемых веществ сначала УФ светом с последующей обработкой парами йода или реактивом Драгендорфа. Для обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола с использованием метода ВЭЖХ готовили растворы веществ в 96% этаноле. Для определения использовалась хроматографическая колонка размером 2×75 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом «ProntoSil 120-5-C18 AQ»; подвижная фаза: элюент А - 0,1% раствор кислоты трифторуксусной, элюент Б - ацетонитрил. Условия хроматографирования изучаемых веществ представлены в таблице 2. 56 Фармация и фармакология. № 6 (7), 2014 Таблица 2 - Условия обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола с использованием метода ВЭЖХ Название Скорость Время Темпе- Объем Элюент Длина Время Время вещества потока, мин ратура, пробы, Б, % волны удерудер- мкл/мин оС мкл нм живания живания основного минорных пика, мин пиков, мин Клозапин 100 15 35 10 20-80 240 10,35 5,64 Рисперидон 100 15 35 10 20-80 238 7,85 9,84; 10,91; 13,14 Сертиндол 100 15 20 5 10-90 230 12 - Оланзапин 100 15 20 2 10-90 260 7,75 8,86; 9,95; 11,02 Арипипразол 200 15 20 10 20-80 260 11,5 13,26; 14,07 Полученные данные свидетельствуют о том, что невозможно подобрать условия, в которых бы обнаруживались все изучаемые вещества. Поэтому метод ВЭЖХ рекомендуется нами для проведения основного исследования клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола в том случае, если определяется в объекте одно вещество. Для проведения основного исследования извлечений нами разработаны условия обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола методом УФ спектрофотометрии. Для определения готовились растворы изучаемых веществ в 96% этаноле. Условия обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола методом УФ спектрофотометрии представлены в таблице 3. Таблица 3 - Условия обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола методом УФ спектрофотометрии Название вещества Концентрация λmax, нм λmin, нм раствора, мг/мл Клозапин 0,1 245±2 и 297±2 - Рисперидон 0,05 238±2, 275±2, 282±2 253±2 Сертиндол 0,02 225±2 и 260±2 243±2 Оланзапин 0,01 230±2 и 275±2 255±2 Арипипразол 0,02 245±2 - Полученные данные свидетельствуют о том, что с использованием предложенных условий можно обнаружить клозапин, рисперидон, сертиндол, оланзапин и арипипразол. Нами рекомендуется метод УФ спектрофотометрии использовать для анализа вещественных доказательств небиологического происхождения. Выводы Таким образом, нами предложены условия обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола при общем и частном скрининге методом ТСХ, а также условия обнаружения изучаемых веществ при проведении основного исследования методами ВЭЖХ и УФ спектрофотометрии.

About the authors

I. P Remezova

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical University of the Ministry of Healthcare of Russia, Pyatigorsk

Email: i.p.remezova@pmedpharm.ru

D. S Lazaryan

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical University of the Ministry of Healthcare of Russia, Pyatigorsk

Email: j.s.lazaryan@pmedpharm.ru

T. I Maksimenko

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical University of the Ministry of Healthcare of Russia, Pyatigorsk

D. Yu Sanzhieva

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical University of the Ministry of Healthcare of Russia, Pyatigorsk

A. Yu Rybasova

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical University of the Ministry of Healthcare of Russia, Pyatigorsk

References

Supplementary files